姜黄素通过氧化应激对亚慢性酒精性肝损伤的保护作用.pdf
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1、论著姜黄素通过氧化应激对亚慢性酒精性肝损伤的保护作用尤梅桂 陈曦 兰兴鹏 陈潇怡 林敏 田华 吴雅茗【摘要】目的 观察姜黄素()对亚慢性酒精性肝损伤大鼠的保护作用 方法 将 只 雄性大鼠按体重分为空白组、乙醇组、姜黄素高、中、低 个剂量组熊去氧胆酸组 各组大鼠预防性给药 第 上午采用白酒(红星二锅头)连续灌胃 诱发亚慢性酒精性肝损伤大鼠模型下午各组大鼠继续给药 天每天正常饮食饮水称重于末次给药 后检测经口给予姜黄素及熊去氧胆酸后对大鼠各项全血生化指标、肝组织丙二醛()、超氧化物歧化酶()的含量以及肝组织病理形态学的影响 结果 与空白组比较乙醇组大鼠血清、淀粉酶、葡萄糖、甘油三酯、无机磷、肝组织
2、 均显著升高 酶活性显著降低肝细胞出现大量脂肪空泡、胞浆疏松化与乙醇组相比姜黄素各给药组能显著降低亚慢性酒精性肝损伤大鼠血清中、淀粉酶、葡萄糖、甘油三酯、无机磷及肝组织 的含量显著升高 酶活性与阳性药对比姜黄素高、中剂量组血清、显著降低酶活性显著增加差异具有统计学意义(.)结论 结果表明姜黄素可减轻乙醇诱导的大鼠亚慢性酒精性肝损伤其作用机制可能与抗氧化应激有关【关键词】姜黄素 酒精性 肝损伤 氧化应激 大鼠中图分类号.文献标识码:./.()().:.【】.().()().【】基金项目:福建省中青年教师教育科研项目()厦门医学院大学生创新训练项目()厦门医学院大学生创新训练项目()厦门医学院机能
3、与临床转化福建省高校重点实验室开放课题()作者单位:福建厦门厦门医学院基础医学部(尤梅桂、陈曦、兰兴鹏、陈潇怡、林敏、田华、吴雅茗)厦门医学院机能与临床转化福建省高校重点实验室(尤梅桂、田华、吴雅茗)通信作者:尤梅桂:.齐齐哈尔医学院学报 年第 卷第 期 .酒精性肝病()是一种复杂的病理性过程根据不同的病理表现可分为脂肪肝、肝炎、肝纤维化及肝硬化 短期连续性大量饮酒会引起患者亚慢性酒精性肝损伤初期主要表现为脂肪肝进一步发展成酒精性肝炎()酒精性肝炎是急性炎症性肝病的一种不管是短期还是长期内都有很高的发病率和致死率 截至目前为止 的确切发病机制还不明确 目前研究结果表明与肠黏膜屏障的破坏、炎症、
4、氧化应激、细菌移位、细胞死亡和再生障碍等有关 而目前集中的关注点是乙醇在肝脏代谢过程中的损伤以及损伤引起的肝脏实质细胞继发的炎症反应 有研究显示大量酒精引起肝损伤的主要机制可能与抗氧化应激有关 目前酒精性肝损伤的治疗药物主要是针对如脂肪变性、炎症性改变 目前临床常用的药物如下:糖皮质激素、己酮可可碱、还原型谷肤甘肤、熊去氧胆酸、秋水仙碱、水飞蓟宾等姜黄素是中草药姜黄制品中最具生物活性的主要成分之一几乎无毒主要药理作用有抗肿瘤、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗微生物等其在抗氧化、清除自由基、抗炎、保护肝脏等方面效果尤其显著 已有大量研究结果显示姜黄素对乙醇性肝损伤具有很强的保护作用然而姜黄素是否可以通
5、过抗氧化应激作用缓解大鼠亚慢性酒精性引起的肝损伤从而起到保护作用及其作用机制尚不明确 本实验采用短期连续大剂量灌胃给予乙醇建立大鼠亚慢性酒精性肝损伤模型并用姜黄素进行干预观察其对亚慢性酒精性肝损伤大鼠的保护作用并对其作用机理进行探究一、资料与方法.实验材料:()仪器:全自动生化分析仪:成都斯玛特科技有限公司 全波长酶标仪:日本株式会社日立制造所正置荧光显微镜:德国蔡司 型台式冷冻高速离心机:德国 公司 实验室级超纯水机:南京易普达科技发展有限公司()药品与试剂:姜黄素():大连美仑生物技术有限公司熊去氧胆酸片()购自上海上药信谊药厂有限公司全自动生化分析试剂盒():成都普利泰生物科技有限公司(
6、)、超氧化物歧化酶()、丙二醛()试剂盒(比色法):购自南京建成生物工程研究所羧甲基纤维化钠():西陇科学股份有限公司()动物:只 雄性、级大鼠体重 购自上海吉辉实验动物饲养有限公司动物质量许可证号:(沪)动物合格证号:.实验方法:()模型制备、分组及给药:将 只 雄性大鼠按体重随机分为空白组、乙醇组、姜黄素 /组、姜黄素 /组、姜黄素/组、熊去氧胆酸/组每组 只 除正常组给予等量溶剂(./)外其余各组大鼠按各给药剂量(姜黄素 /、/、/熊 去 氧 胆 酸 /)预防性给药 后于第 开始除空白组给予等量蒸馏水外其余各组每天上午采用白酒(红星二锅头)(/)灌胃连续 诱发大鼠亚慢性酒精性肝损伤模型每
7、天下午除空白组和乙醇组给予等量溶剂(./)外其余各组大鼠继续按各给药剂量治疗性给药 每天正常饮食饮水并称重记录()全自动生化分析仪做血清生化指标检测:末次给药后 用 乌拉坦腹腔注射待大鼠麻醉后摘眼球取血并将血液放置于肝素锂抗凝管内缓慢颠倒并旋转混匀用移液枪量取 血置于定量检测试剂盘内按试剂盘说明书在全自动生化分析仪中进行健康 项检测()肝生化指标测定:取每只大鼠一部分肝组织用锡箔纸包裹置于 冰箱保存备用 检测时将冷冻保存的肝组织从冰箱中取出每个肝组织精密称取.加入.冷生理盐水()冰浴下将组织匀浆并于离心机 /离心 取上清液采用 蛋白浓度测定试剂盒测定组织蛋白含量然后用比色法按说明书再测定肝组织
8、匀浆中的、含量 在高温酸性条件下可与硫代巴比妥酸()反应生成红棕色的三甲川 处为最大吸收波长通过测定三甲川吸光度来推算肝组织中 的含量 在蛋氨酸和核黄素存在条件下氮蓝四唑()照光后会发生光化还原反应生成蓝色甲腙其在 处有最大光吸收 能阻止 的光化还原反应其抑制强度与酶活性在一定范围内成正比()肝脏病理组织学观察(厦门医学院病理教研室行病理组织学检查):大鼠肝脏用中性甲醛固定苏木精伊红染色()取各组小鼠肝脏组织石蜡切片二甲苯脱蜡、无水乙醇脱水处理后将切片浸泡于蒸馏水中清洗用苏木素(索莱宝)对组织的细胞核染色 蒸馏水清洗后用盐酸酒精分化液分化 蒸馏水再次清洗 后用伊红试剂染色 用蒸馏水清洗切片 后
9、酒精中脱色 左右二甲苯中固定 然后采用中性树脂封片在蔡司 正置荧光显微镜下进行观察并拍照()齐齐哈尔医学院学报 年第 卷第 期 .数据学处理:利用 .统计分析软件处理数据计量资料以均数标准差()表示两组间比较采用非配对 检验分析多组间 比 较 采 用 单 因 素 方 差 分 析 用 分析进行组间两两比较.为差异具有统计学意义二、结果.姜黄素对亚慢性酒精性肝损伤大鼠一般情况的影响:空白组大鼠正常饮食饮水毛发有光泽一般情况均正常体重逐渐增加乙醇组大鼠饮食饮水日渐减少出现食欲不振、大便稀溏毛发蓬松无光泽走路不稳动作呆板体重下降明显等现象 各给药组一般情况均较乙醇组有所好转.姜黄素对亚慢性酒精性肝损伤
10、大鼠肝功能、水平的影响:与空白组相比乙醇组大鼠血清中、水平显著性升高表明造模成功(.)与乙醇组相比各给药组及阳性药组大 鼠 血 清 中、水 平 均 显 著 性 降 低(.)说明姜黄素和熊去氧胆酸对亚慢性酒精性肝损伤大鼠有较好的保护作用 与熊去氧胆酸组比较姜黄素 /、/组大鼠血清中、含量显著性降低差异有统计学意义(.)提示姜黄素的作用优于熊去氧胆酸 见表.姜黄素对亚慢性酒精性肝损伤大鼠血清葡萄糖、甘油三酯、淀粉酶及无机磷含量的影响:与空白组相比乙醇组大鼠血清葡萄糖、甘油三酯、淀粉酶及无机磷含量显著增加(.)与乙醇组比较阳性药组及各用药组大鼠血清葡萄糖、甘油三酯、淀粉酶及无机磷含量显著下降差异有统
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- 姜黄 通过 氧化 应激 慢性 酒精性 损伤 保护 作用
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