液相色谱柱的清洗.doc
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1、液相色谱柱的清洗一、 液相色谱柱按基体成分的分类1、硅胶基体:不键合任何化学基团的为硅胶柱,键合的化学基团有C18、C8、C4、氨基、氰基、苯基等。2、聚合物基体:常见的聚合物基体为聚苯乙烯、聚丙烯酸酯、聚乙烯醇。聚合物上再键合化学基团。根据填料基体的成分不同可以分为: 二、 色谱柱常见问题的成因1、硅羟基的死吸附 :硅胶粒子表面存在硅羟基,这些硅羟基会吸附样品和流动相中的很多物质,当吸附达到饱和时就会出现柱效下降、峰形劣化的现象。有些吸附是可逆的,可以通过清洗解决。2、重金属离子:重金属以金属氧化物的形式残存在硅胶粒子的表面,这些金属氧化物很容易与其它化合物形成螯合物,使其被氧化,造成峰形劣
2、化。 3、缓冲液中盐的析出:当流动相中含有缓冲盐溶液,而且分析结束后,如果没有先用水进行冲洗,而是直接用纯有机相冲洗,瞬间柱子中的微环境是高有机相、低水相。这时流动相中的缓冲盐溶液极易析出盐份,将柱子堵塞,使柱压升高,柱效下降。 4、色谱柱变干:如果对色谱柱保存不当,使 色谱柱中的保存液全部挥发,柱子内部变干,造成色谱柱的损伤,会影响分离效果。三、 对色谱柱进行适当清洗的意义以上提到的部分故障可以通过适时、适当的清洗得到解决,恢复色谱柱的功能,延长色谱柱的使用寿命。下面对比较常见的几种型号的色谱柱的清洗方法进行讨论,具体的冲洗方法要根据实际情况作适当的选择和调整。当然,不同的用户和色谱产品厂商
3、对自己的色谱柱会有不尽相同的处理方法。四、 新柱使用前的冲洗新柱在使用前应先认真阅读说明书及性能测试报告,了解柱子的性能指标。分析用的流动相往往与柱子的保存试剂不同,故在分析样品之前,应使用合适的试剂将柱子中的保存试剂清洗出来。要注意清洗用的流动相与保存溶剂的相溶性。 1、反相柱如岛津C18、C8等柱保存在70%甲醇中,可用1020倍柱体积的甲醇或乙腈来平衡色谱柱。流速应缓慢提高,如开始0.3mL/min,1015min后可慢慢加快。2、正相柱或称极性色谱柱一般保存在正庚烷或正己烷中。如果分析时的流动相含有极性溶剂,应使用乙醇或异丙醇冲洗,流速0.10.3mL/min ,将保存液冲洗干净后,再
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