交通任督针刺法对血管性痴呆大鼠CA1区脑源性神经营养因子及学习记忆功能的影响.pdf
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1、交通任督针刺法对血管性痴呆大鼠 CA1 区脑源性神经营养因子及学习记忆功能的影响李新华,郭 霞,赵立新摘要 目的:探讨交通任督针刺疗法对血管性痴呆大鼠学习记忆功能及海马 CA1 区脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法:采用不同时点永久性结扎雄性 SD 大鼠双侧颈总动脉(改良 2-VO)法复制全脑缺血模型,随机分为空白组、假手术组、模型组、针刺组、尼莫地平组;Morris 水迷宫评价大鼠造模前与治疗后空间学习记忆功能;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠海马 CA1 区组织细胞形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测 BDNF 表达。结果:治疗后,模型组定位航行潜伏期明显
2、较空白组及假手术组延长(P0.05),空间搜索穿越次数较空白组及假手术对照组明显减少(P0.05);针刺组和尼莫地平组定位航行潜伏期均明显短于模型组(P0.05),空间搜索穿越次数均明显多于模型组(P0.05)。海马病理组织 HE 染色光镜下观察,模型组大量神经元变性,体积变小,胞核与胞浆界限不清,核固缩成三角形或不规则形,核仁消失,血管、神经元及神经胶质细胞周围间隙扩大,针刺组神经元细胞均可见零星损伤细胞,海马锥体细胞层细胞形态、排列基本正常。与模型组相比,针刺组和尼莫地平组 BDNF 表达明显增加(P0.05 或P0.05);结论:交通任督针刺法对 Morris 水迷宫定位航行潜伏期的学习
3、能力和空间搜索穿越次数的记忆能力有一定改善作用,可提高血管性痴呆大鼠海马CA1 区 BDNF 表达,对缺血致大鼠海马神经元细胞损伤有一定的保护作用。关键词 血管性痴呆;交通任督针刺法;脑源性神经营养因子;学习记忆功能;实验研究d o i:1 0.1 2 1 0 2/j.i s s n.1 6 7 2-1 3 4 9.2 0 2 3.1 7.0 1 0 E Ef ff fe ec ct ts s o of f C Co oo or rd di in na at ti in ng g R Re en nd du u A Ac cu up pu un nc ct tu ur re e o on n
4、t th he e B Br ra ai in n-d de er ri iv ve ed d N Ne eu ur ro ot tr ro op ph hi ic c F Fa ac ct to or r i in n C CA A1 1 R Re eg gi io on n a an nd d t th he e L Le ea ar rn ni in ng g a an nd d MMe emmo or ry yF Fu un nc ct ti io on n i in n R Ra at ts s w wi it th h V Va as sc cu ul la ar r D De e
5、mme en nt ti ia aL LI I X Xi in nh hu ua a,G GU UO O X Xi ia a,Z ZH HA AO O L Li ix xi in nShanxi Traditional Chinese Medicine Hospital,Taiyuan 030012,Shanxi,ChinaC Co or rr re es sp po on nd di in ng g A Au ut th ho or r ZHAO Lixin,E-mail:A Ab bs st tr ra ac ct t O Ob bj je ec ct ti iv ve e:To inve
6、stigate the effect of Coordinating Rendu Acupuncture on learning and memory function,and theexpression of brain-derived neurotrophic factor(BDNF)in CA1 region of hippocampus in rats with vascular dementia.MMe et th ho od ds s:Themodel of global cerebral ischemia was established by permanent ligation
7、 of bilateral common carotid arteries(modified 2-VO)atdifferent time points in male SD rats,the rats were randomly divided into blank group,sham operation group,model group,acupuncturegroup,and nimodipine group.Morris water maze was used to evaluate the spatial learning and memory function of rats b
8、efore and aftertreatment.The histomorphological changes of hippocampal CA1 region were observed by hematoxylin-eosin staining and theexpression of BDNF was detected by Western Blot.R Re es su ul lt ts s:The navigation latency in model group was significantly longer than that inblank group and sham o
9、peration group(P0.05),the times of spatial search traversing were significantly less than those in blankgroup and sham operation group(P0.05).The average navigation latency of acupuncture group and nimodipine group wassignificantly shorter than that of model group(P0.05),and the times of space searc
10、h traversing were significantly more than that ofmodel group(P0.05).A large number of neurons in model group were denatured and reduced in size,the boundary between thenucleus and cytoplasm was unclear,the nucleus was condensed into a triangle or irregular shape,and the nucleoli disappeared,thevesse
11、ls,neurons,and neuroglia spaces were enlarged.The neurons in acupuncture group were damaged sporadically,and themorphology and arrangement of hippocampal pyramidal layer were normal(P0.05 orP0.05).C Co on nc cl lu us si io on n:Coordinating Rendu Acupuncture can improve the learning ability of Morri
12、s water maze navigation latency and thememory ability of space searching times,and can increase the expression of BDNF in hippocampal CA1 region of vascular dementiarats,it shows some protective effect on ischemia-induced injury of hippocampal neurons in rats.K Ke ey yw wo or rd ds s vascular dement
13、ia;Coordinating Rendu Acupuncture;brain derived neurotrophic factor;learning and memory function;experimental study 血管性痴呆(vascular dementia,VD)是由各种复杂的脑血管因素引起的脑组织损害而造成以认知功能障碍为主要临床表现的一种痴呆综合征 1,是老年人群的常见病、多 发 病,是 仅 次 于 阿 尔 茨 海 默 病 的 痴呆 2。血管性痴呆作为目前唯一一种可以预防的痴呆类型,如果及早发现、早期诊断明确、及时干预治疗,血基金项目 山西省卫生健康委员会科研课题(N
14、o.2018084)作者单位 山西省中医院(太原 030012)通讯作者 赵立新,E-mail:引用信息 李新华,郭霞,赵立新.交通任督针刺法对血管性痴呆大鼠CA1 区脑源性神经营养因子及学习记忆功能的影响 J.中西医结合心脑血管病杂志,2023,21(17):3160-3164.管性痴呆是可以防治的,是可逆的 3,但到目前为止,仍没有统一和有效的治疗方法 4。因此,对于血管性痴呆防治的临床研究及实验研究具有相当重要的现实意义。“交通任督”针刺法是山西省中医院原针灸科主任郭耀康教授在长期针灸临床实践中创立的针灸理论和疗法,并将其应用于治疗血管性痴呆,疗效显著。随着对血管性痴呆发病机制的不断深入
15、研究,脑源性神经营养因子在血管性痴呆发生发展过程中所发挥的作用越来越受到重视。本研究采用永久性结扎双侧颈总动脉(改良 2-VO)法复制全脑缺血模型,以“交通任督法”取风府、百会、人中、关元、中脘穴位进行针刺干预,观察其对血管性痴呆大鼠空间学习记忆功能、海马0613CH I N E S EJ OURNA LO FI N T E G R AT I V E ME D I C I N EONC AR D I O-C E R E B ROVA S C U L ARD I S E A S E S e p t e m b e r 2 0 2 3 V o l.2 1 N o.1 7CA1 区 组 织 细 胞
16、形 态 学 及 脑 源 性 神 经 营 养 因 子(BDNF)表达的影响,探讨交通任督针刺法干预血管性痴呆大鼠的作用机制。1 材料与方法1.1 实验动物健康成年 SD 大鼠 60 只,雄性,月龄 23 个月,体质量(21010)g。由北京华阜康生物科技股份有限公司提供,许可证号:SCXK(京)2019-0004。按照随机数字表分为空白组(12 只)、假手术组(12 只)和手术组(36 只)。1.2 实验药品及试剂尼莫地平片(商品名:尼膜同,拜耳医药保健有限公司生产),注射用青霉素钠 中诺药业(石家庄)有限公司,BDNF 抗体(武汉三鹰生物技术有限公司),BDNF 二抗(BiOS 公司),聚偏二
17、氟乙烯(PVDF)膜(Solarbio 公司),二喹啉甲酸(BCA)蛋白浓度测定试剂盒(SEVEN 公司),十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)快速凝胶配置试剂盒(SEVEN 公司),彩虹 130 广谱蛋白 Marker(Solarbio 公司),-actin 内参引物 生工生物工程(上海)股份有限公司,超敏增强型化学发光试剂(ECL)检测试剂盒(赛文生物技术有限公司)。1.3 实验材料及仪器汉医牌一次性使用无菌针灸针(长春爱康医药器械有限公司,规格为 0.25 mm13 mm);Morris 水迷宫(型号:DMS-2,中国医学科学院药物研究所);全自动全封 闭 脱 水 机(
18、型 号:Excelsior,美 国 Thermo 公司);石蜡包埋机(型号:TKY-BMB,湖北康泰医疗设备有限公司);包埋专用冷台(型号:TKY-BMB,湖北秦康医疗设备有限公司);旋转石蜡切片机(型号:F325,德国 Thermo 公司);摊片机(型号:TKY-TPA,湖北泰康医疗设备有限公司);烤片机(型号:TKY-TPA,湖北泰康医疗设备 有限公司);万能荧光成 像系统(型 号:BX51-DP72,日本奥林巴斯);电热恒温鼓风干燥箱(型号:101-2-S,上海跃进医疗器械厂);低温台式离心机(型号:Auegrax-30K,美国 Beckman Coulter 公司);脱色水平摇床(型号
19、:TS-1000,海门市其林贝尔仪器制造有限公司);双 向电泳 系 统(PROTEANi12 IEF Mini-PROTEAN Tetra PROTEAN 11 XL,美国 Bio-Rad 公司);半干式转印系统(TRans-Blot SemiDry PowerPacUniversal,美国 Bio-Rad 公司);高性能成像分析仪(型号:HD2,美国 ProteinSimple 公司)。1.4 实验方法1.4.1 模型制备随机选取空白对照组、假手术组各 12 只,手术组36 只大鼠采用改良 2-VO 法制备全脑缺血模型,在不同时点永久性结扎双侧颈总动脉 5-7,即采用每间隔 3 d分 2 次
20、永久性结扎大鼠双侧颈总动脉法制备模型。将大鼠用 10%的水合氯醛(3.5 mL/kg 体质量)腹腔注射麻醉后,仰卧位固定在手术台上,常规消毒,颈正中切口,先分离一侧颈总动脉,用 1 号缝合线结扎两端,中间永久性剪断,缝合伤口,后肢肌内注射青霉素钠 4104U,放回笼中保温饲养。假手术组麻醉及手术过程同上,但不阻断颈总动脉,间隔 3 d 后结扎、剪断另一侧颈总动脉。术后 7 d 切口愈合,进行 Morris 水迷宫测试,与造模前比较有明显的学习记忆障碍为成功制备血管性痴呆大鼠模型。痴呆标准以对照组大鼠逃避时间的均值为参考值,计算实验组大鼠各时段成绩的平均逃避潜伏期与参考值之差占该大鼠平均逃避潜伏
21、期时间的比例,20%确定为痴呆大鼠。1.4.2 动物分组及给药将造模后大鼠随机分为模型组、交通任督法针刺组(针刺组)、尼莫地平组。针刺组:取一次性使用无菌针灸针(规格 0.25 mm13 mm),参照林文注等编著的 实验针灸学 选穴:风府(天门)、百会、人中、关元、中脘,取穴及针刺法见表 1,深度约 0.5 寸,平补平泻,留针 30 min,每日 1 次,连续 15 d。尼莫地平组:给予尼莫地平片 12 mg/kg,按 10 mL/kg 体质量灌胃给药,每日 1 次,连续 15 d。空白组、假手术组、模型组不做任何治疗。表 1 取穴及针刺法 穴名 定位 局部解剖 刺灸法风府(天门)枕骨顶嵴后枕
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