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研究论文Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报江苏省部分地区水禽肠道外致病性大肠杆菌的分离鉴定及生物学特性研究摘 要：本研究旨在明确江苏地区水禽致病性大肠杆菌的血清型、进化分群、毒力基因分布和耐药情况，以期为水禽大肠杆菌病的防控提供依据。本研究从江苏省部分规模化水禽养殖场疑似大肠杆菌感染病例中，分离得到24株水禽肠道外致病性大肠杆菌，并检测分离菌株的血清型、毒力基因分布、系统进化分群和耐药情况。血清型检测结果表明，O65血清型菌株共8株，占全部菌株的33.3%，O16、O68、O87、O126、O138、O164血清型菌株各1株，其他未鉴定血清型10株；毒力基因检测结果表明，fimA、ECs3737、ECs3703、tsh和irp2基因在分离菌株中的阳性率分别为83.3%、75.0%、66.7%、33.3%和4.2%，其中含有4个毒力基因组合的菌株占29.2%；系统进化分群结果表明，非致病群A占45.8%，低致病群B1占33.3%，高致病群B2和D分别占8.3%、1.3%；药敏试验结果表明，24株分离菌株均对恩诺沙星、强力霉素100%耐药，对四环素、万古霉素、红霉素的耐药率为91.7%，对阿莫西林/棒酸的敏感率为100%。本研究结果表明，江苏省水禽致病性大肠杆菌血清型较为复杂、耐药性严重。关键词：禽致病性大肠杆菌；血清型；毒力基因；耐药性中图分类号：S852.61 文献标志码：A 文章编号：1674-6422（2023）03-0025-09Isolation,Identifi cation and Biological Characteristics of Extraintestinal Pathogenic Escherichia coli Strains from Waterfowl in Some Areas of Jiangsu ProvinceGUO Changming1,CHEN Huaijun2,YUAN Cheng1,FENG Qi1,WANG Yongjuan1,XU Hai1,WU Shuang1,ZHU Shanyuan1(1.Jiangsu Key Laboratory for High-Tech Research and Development of Veterinary Biopharmaceuticals,Jiangsu Agri-animal Husbandry Vocational College,Taizhou 225300,China;2.College of Animal Science and Technology,Guangxi University,Nanning 530004,China)收稿日期：2021-01-16基金项目：江苏现代农业产业技术体系集成创新中心（JATS2019367）；江苏省农业科技自主创新资金项目 CX（18）1004；江苏省农业重大技术协同推广计划试点项目蛋禽产业（2019-SJ-009-06）；江苏省高等学校自然科学研究面上项目（19KJB230005）；江苏高校“青蓝工程”项目（苏教师函202111 号）；泰州市科技支撑计划（农业）项目（TN201916）；泰州市311高层次人才培养工程（201921号）；江苏农牧科技职业学院科研项目（NSF20190202）作者简介：郭长明，男，博士，副教授，主要从事兽医微生物学与免疫学研究；陈怀君，女，硕士研究生，临床兽医学专业通信作者：朱善元，E-mail：2023,31(3):25-33郭长明1，陈怀君2，袁 橙1，封 琦1，王永娟1，徐 海1，吴 双1，朱善元1（1.江苏农牧科技职业学院 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室，泰州 225300；2.广西大学动物科学技术学院，南宁 530004）Abstract:The purpose of this study was to isolate pathogenic Escherichia coli strains from suspected clinical cases on some large-scale waterfowl farms in Jiangsu province and characterize their serotypes,phylogenetic groups,virulence gene distribution and drug resistance.Total 24 strains of pathogenic E.coli were obtained and used in the study.One strain was identifi ed as serotype O16,O68,O87,O126,O138 and O164.Eight strains were serotype O65,accounting for 33.3%of all strains.Other 10 strains were not able to be 26 中国动物传染病学报2023 年 6 月 禽致病性大肠杆菌（Avian pathogenic Escherichiacoli,APEC）属于肠道外致病性大肠杆菌（Extraintestinal pathogenic Escherichia coli,ExPEC)1，所引起的禽大肠杆菌病可通过多种途径进行传播，其特征是多器官组织的损伤并伴有肝炎和心包炎等症状，是一种复杂的综合症2。水禽大肠杆菌感染发病率和死亡率高，给水禽养殖业造成了严重的经济损失。使用抗菌药物仍然是治疗水禽大肠杆菌病的主要手段，随着抗生素的广泛应用，使水禽大肠杆菌对常用抗生素的耐药性日益严重，多重耐药菌株增多，为临床上防控和治疗该病带来极大的挑战3。同时，不合理的使用抗菌药物，也导致动物体内抗菌药物的残留，细菌的耐药性可以通过动物源性食品传给人类,从而威胁到人类的健康4-5。禽大肠杆菌血清型数量众多且复杂，并随着时间和地域改变，使用疫苗对该病进行防治存在难度。我国各地分离到的APEC血清型达50余种，常见的O抗原血清型为O2、O76、O78、O92和O93等6。研究表明，通过系统进化分群对禽大肠杆菌进行分类，其主要类型为B2和D型6。毒力相关因子在禽大肠杆菌感染的过程中发挥重要作用，如与宿主组织定植相关的黏附素（F1菌毛、P菌毛）、参与摄铁的耶尔森菌强毒力岛（high pathogenicity island,HPI）、肠细胞脱落位点毒力岛（locus of enterocyte effacement pathogenicity island,LEE）、型分泌系统2（ETT2毒力岛）、溶血素（hemolysin E,HlyE）、自转运蛋白温度敏感性血凝素（temperature-sensitive hemagglutinin,TSH）等。研究表明，部分毒力因子之间相互作用影响菌株的致病力，通常含有4个以上毒力因子的禽大肠杆菌具有致病性6。2020年1月2020年9月本实验室（江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室）在江苏省部分地区的水禽养殖场进行采样，并分离鉴定出禽大肠杆菌24株。通过对分离株进行分子进化分群、O抗原血清型、毒力基因和耐药情况的检测，旨在明确江苏省水禽大肠杆菌病的流行情况和为有效防治大肠杆菌病提供参考。加强对水禽致病性大肠杆菌流行病学的监测和防控，对水禽养殖业的健康发展和兽医公共卫生具有重要意义。1 材料与方法1.1 样品来源 24株禽大肠杆菌为本实验室于2020年1月2020年9月从江苏部分地区水禽养殖场发病死亡水禽的肝脏、心脏、脑中分离获得。1.2 主要试剂 2 Rapid Taq Master Mix、2 Taq Master Mix均购自南京诺唯赞生物科技有限公司；LB培养基、麦康凯培养基、伊红美蓝培养基均购自英国OXOID公司；细菌基因组DNA提取试剂盒、DL2000 DNA Marker均购自宝生物工程（大连）有限公司；引物由苏州金唯智生物科技有限公司合成；大肠杆菌O抗原单因子血清购自中国兽医药品监察所；药敏纸片购自杭州滨和微生物试剂有限公司。1.3 细菌的分离及16S rDNA PCR鉴定 用接种环在无菌条件下蘸取病死水禽的心脏、肝脏、脑组织，划线于麦康凯平板上，37培养16 h，挑取单个红色菌落接种于伊红美蓝培养基，37培养16 h，挑取金属光泽疑似大肠杆菌单菌落，接种于LB培养基，置于摇床180 rpm、37恒温培养6 h。分别取新鲜菌液1 mL，按细菌基因组DNA提取试剂盒说明书提取细菌基因组DNA。根据参考文献11合成大肠杆菌16S rDNA PCR鉴定引物（表1），对24株分离菌serotyped.Virulence genes fi mA,ECs3737,ECs3703,tsh and irp2 were found in 83.3%,75.0%,66.7%,33.3%and 4.2%isolated strains,respectively.Furthermore,29.2%isolates possessed 4 out of 5 virulence genes as mentioned above.Phylogenetic clustering results showed that non-pathogenic group A accounted for 45.8%,low-pathogenic group B 1 accounted for 33.3%,and high-pathogenic group B2 and D accounted for 8.3%and 1.3%,respectively.The drug susceptibility testing showed that all 24 isolated strains were 100%resistant to enoxacin and doxycycline,91.7%resistant to tetracycline,vancomycin and erythromycin,and 100%susceptible to amoxicillin/clavulanic acid.These results indicated a complex pattern of the serotypes of pathogenic E.coli from waterfowl in Jiangsu province and severe drug resistance.Key words:Escherichia coli;waterfowl;serotype;virulence;antibiotic resistance 27 郭长明等：江苏省部分地区水禽肠道外致病性大肠杆菌的分离鉴定及生物学特性研究第 31 卷第 3 期株进行PCR鉴定。PCR反应体系共25 L：2 Taq Master Mix 12.5 L，上、下游引物各1.0 L，模板2.0 L，ddH2O 8.5 L。PCR反应条件：95预变性3 min；95变性15 s，53退火15 s，72延伸30 s，共30个循环；72再延伸5 min。反应结束后，取2.0 L的PCR产物 进行1%琼脂糖凝胶电泳检测结果。1.4 O抗原血清型鉴定 按照大肠杆菌O抗原定型血清说明书制备抗原，取抗 原和血清各50 L于载玻片上混匀，涂成直径约2 cm的圆膜，1 min内出现明显凝集颗粒判定为阳性。同时以抗原与0.5%石炭酸生理盐水混合物作对照，观察有无自凝集现象。1.5 毒力相关基因PCR鉴定 根据参考文献7-13合成fimA、papC、irp2、eaeA、ECs3703、ECs3737、tsh、hlyE共8对毒力相关基因的检测引物。对24株分离株进行PCR检测，引物信息见表1。PCR反应体系共25 L：2 Taq Master Mix 12.5 L，上、下游引物各1.0 L，模板2.0 L，ddH2O 8.5 L。PCR反应条件：95预变性3 min；95变性15 s，退火（退火温度见表1）15 s，72延伸40 s，共30个循环；72再延伸5 min。反应结束后，取2.0 L的PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳检测结果。1.6 细菌分子进化分群PCR鉴定 根 据参考文献7合成大肠杆菌分子进化分群引物（引物信息见表2），采用三重PCR方法对分离菌株进行系统分群鉴定，大肠杆菌系统进化分群判定标准见图1。PCR反应体系共25 L：2 Rapid Taq Master Mix 12.5 L，3对上、下游引物各1.0 L，模板1.0 L，ddH2O 5.5 L。PCR反应条件：95预变性 3 min；95变性15 s，55退火15 s，72延伸15 s，共30个循环；72再延伸5 min。表 1 16S rDNA 和毒力相关基因引物序列Table 1 Primers for 16S rDNA a nd virulence-related genes引物名称Primers name引物序列（5-3）Primer sequence(5-3)片段大小（bp）Fragment length(bp)退火温度（）Ann ealing temperature()参考文献Reference16S rDNAF:GACGAACCAACGGTCAGGAT150056Clermont 等7（2000）R:TGCCGCCAGTACCAAAGACAfimAF:AATGCCGGCTCTGTTGATCAAACCGT42056陈晓浪等8（2010）R:AGATACTGAACCTTGAAGGTCGCATCpapCF:ATGAAAGACAGAATACCTTTTGCAGT70052陈晓浪等8（2010）R:ACTCCATGTGAAATTTCTGTTTGTCGirp2F:AAGGATTCGCTGTTACCGGAC28055Schubert 等9（1998）R:TCGTCGGGCAGCGTTTCTTCTeaeAF:ATATCCGTTTTAATGGCTATCT42547Franck 等10（1998）R:AATCTTCTGCGTACTGTGTTCAECs3703F:ATTGCCAAATAATGCCAGAAGAGTCACC58155Ren 等11（2004）R:ATCAATGTTGGACCGAATGTGAACGAATAECs3737F:TACTAATGCCATATAGCCCCATAA44255Ren 等11（2004）R:CTACGCTTTTAACAAACGATTGATtshF:ACTATTCTCTGCAGGAAGTC82458王娟等12（2003）R:CCTCCGATGTTCTGAACGThlyEF:TCGGCATCCACATTAGTTG61752金文杰等13（2006）R:AATCGAGTTGTTTCCGTCTCT表 2 大肠杆菌分子分群引物序列Table 2 Molecular clustering primer sequence of Eschorichia coli引物名称Primers name引物序列（5-3）Primer sequence(5-3)片段大小（bp）Fragment length(bp)chuAF:GACGAACCAACGGTCAGGATR:TGCCGCCAGTACCAAAGACA279yiaAF:TGCCGCCAGTACCAAAGACR:ATGGAGAATGCGTTCCTCAAC211TspE4.C2F:GAGTAATGTCGGGGCATTCAR:CGCGCCAACAAAGTATTACG152 28 中国动物传染病学报2023 年 6 月图 1 大肠杆菌系统进化分群判定标准Fig.1 Standard for the determination of the Escherichia coli phylogenetic group1.7 药敏试验 选取24种抗菌药依据美国临床实验室标准协会（Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI）制定的抗生素药敏试验标准，用Kirly-Baue纸片扩散法测定分离菌株耐药性。取100 L细菌培养液涂板、贴药敏片，37培养18 h后观察结果并量取抑菌圈大小，依据抑菌范围解释标准进行结果判断。2 结果2.1 细菌的分离及16S rDNA PCR鉴定 用麦康凯培养基和伊红美蓝培养基分离培养大肠杆菌，再通过PCR鉴定，共分离到24株大肠杆菌。分离株在麦康凯和伊红美蓝培养基上的生长形态见图2，部分菌株16S rDNA PCR鉴定结果见图3。2.2 O抗原血清型鉴定 对24株分离菌株进行O抗原血清型鉴定，鉴定结果如表3所示。其中，血清型为O16、O68、O87、O126、O138、O164型的菌株各1株，O65血清型菌株共8株，占全部菌株的3 3.3%，其他血清型10株。2.3 毒力基因的鉴定 通过PCR分别检测了24株禽大肠杆菌分离株8种毒力基因，由检测结果可知，除eaeA、papC、hlyE这3个毒力基因外，其余5种毒力基因均有检测到（图45）。其中fimA基因在所有菌株中被检出20株（83.3%）、ECs3737基因18株（75%）、ECs3703基因16株（66.7%）、tsh基因8株（33.3%），均有较高的分布率，为重要的APEC毒力基因，而irp2基因检测到3株阳性，检出率为4.2%。图 3 部分菌株 16S rDNA PCR 产物电泳结果Fig.3 Agarose gel electrophoresis of PCR products of 16SrDNA gene of some strainsM:DNA相对分子质量标准(DL2000);16:大肠杆菌16S rDNA PCR产物;7:阴性对照M:DL2000 DNA marker;1-6:PCR products of 16S rDNA;7:Negative controlA B图 2 大肠杆菌在麦康凯培养基（A）和伊红美蓝培养基上的形态（B）Fig.2 Morphology of Escherichia coli on MacConkey(A)and Eosin-methylene Blue medium(B)chuAAB2DB1yjaATspE4.C2B2 or DB1 or AbpM 1 2 3 4 5 6 720001000750500250100 29 郭长明等：江苏省部分地区水禽肠道外致病性大肠杆菌的分离鉴定及生物学特性研究第 31 卷第 3 期对24株分离菌株毒力基因组合分布进行统计，结果如表4所示，含有4个毒力基因组合的菌株共7株（29.2%），其中基因组合为fimA+ECs3703+ECs3737+tsh有6株，fimA+ECs3703+ECs3737+irp2组合1株。3种基因组合共9株（37.5%），其中组合fimA+ECs3703+ECs3737有7株。2.4 细菌分子进化分群鉴定 对24株水禽大肠杆菌进行系统进化分群鉴定，可观察到特异电泳条带chuA（279 bp）、yjaA（211 bp）和TspE4.C2（152 bp）（图6）。系统进化分群结果可知，非致病群A占45.8%（11/24），低致病群B1占33.3%（8/24），高致病群B2和D分别占8.3%（2/24）和1.3%（3/24）（表5）。2.5 药敏试验 药敏试验结果显示，24株分离菌株对受试的抗菌药物表现出多重耐药。其中 分离菌株均对恩诺沙星、强力霉素（100%）耐药，对四环素、万古霉素、红霉素的耐药率为91.7%。分离株对阿莫西林的敏感率仅为16.7%，但对阿莫西林/棒酸的敏感率为100%（表6）。多重耐药统计结果可知，在24株分离菌株中，耐10种以上药物的菌株占79.2%（19/24）（图7）。表 3 24 株禽致病性大肠杆菌的血清型分布Table 3 Serotype distributions of 24 strains of APEC血清型Serotype菌株Strains菌株数Numbers of strains比例（%）Proportion(%)O68GL3314.17O87GL1514.17O16GL4814.17O138GL5014.17O164HA3G14.17O126D214.17O65GL30、GL56、GL89、SY2G、GYZ1、GYZ4、E1-1、HA2X833.3其他G L 3 4、G L 3 5、G Y C 1、S Y 3 G、G Y Z 3、G Y Z 5、GYZ6、DY1G、DY3G、E2-11041.7图 4 部分菌株毒力基因 PCR 产物凝胶电泳结果Fig.4 Agarose gel electrophoresis of PCR products of virulence genes of some strainsM:DNA相对分子质量标准(DL2000);1:fi mA基因PCR产物;2:irp2基因PCR产物;3:ECs3703基因PCR产物;4:ECs3737基因PCR产物;5:tsh基因PCR产物;6:阴性对照M:DL2000 DNA marker;1:PCR products of fi mA gene;2:PCR pro ducts of irp2 gene;3:PCR products of ECs3703 gene;4:PCR products of ECs3737 gene;5:PCR products of tsh gene;6:Negative control图 5 8 种毒力相关基因在 24 株 APEC 中的分布Fig.5 Distribution of 8 virulence-associated genes in 24 strains of APEC菌株数（株）毒力相关基因2520151050fimAPapCirp2eaeAtshhlyEECs3703ECs373720161880003M 1 2 3 4 5 6bp20001000750500250100 30 中国动物传染病学报2023 年 6 月表 5 不同进化分群在分离菌株中的分布Table 5 Distribution of different evolutionary clusters in isolated strains进化分群类型Evolutionary clustering type菌株名称The name of the strain菌株数Number of strainsAGL15、GL33、GL56、GL89、SY2G、SY3G、GYZ3、DY1、DY3、D2、HA3G11B1GL34、GL35、GYC1、GYZ5、GYZ6、E1-1、E2-1、HA2X8 B2GL48、GL502DGL30、GYZ1、GYZ43 表 4 不同毒力基因组合在分离菌株中的分布Table 4 Distributions of combination of different virulence genes in isolated strains毒力基因数量Number of virulence genes毒力基因组合类型Combination of virulence genes菌株名称Name of the strain菌株数Number of strains比例（%）Proportion(%)2fimA+ECs3703SY2G14.2fimA+irp2GYZ114.2ECs3703+ECs3737E1-114.2fimA+ECs3737D2、HA3G28.33fimA+ECs3703+ECs3737GL15、GL34、GYC1、GYZ3、GYZ6、E2-1、HA2X729.2fimA+ECs3737+tshGL5614.2fimA+irp2+tshGYZ414.2 4fimA+irp2+ECs3703+ECs3737GYZ514.2fimA+ECs3703+ECs3737+tshGL30、GL33、GL35、GL48、GL50、GL89625图 6 部分菌株系统进化分群电泳结果Fig.6 Results of phylogenetic electrophoresis of some strainsM:DNA相对分子质量标准(DL2000);115:大肠杆菌进化分群PCR产物M:DL2000 DNA marker;1-15:PCR products of Escherichia coli evolved clusteringbpM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 1520001000750500250100chuA 279 bpyjaA 211 bpTspE4.C2 152 bp 31 郭长明等：江苏省部分地区水禽肠道外致病性大肠杆菌的分离鉴定及生物学特性研究第 31 卷第 3 期3 讨论近年来，随着全球经济的发展，人类对肉蛋奶等动物相关产品的需求量也与日俱增，在养殖业规模不断扩大的同时伴随着动物疫病频发14。APEC具有复杂多样的血清型，因此，使用疫苗对该病进行预防较为困难。由于一些养殖场不合理地使用甚至滥用抗菌药物，致使细菌耐药性、多重耐药性问题日趋严重。若动 物源食品中含有抗菌药物残留，会给人类和动物的健康带来不利影响。因此，对APEC进行分子流行病学调查十分必要，以便掌握其流行特点及规律，为精准防控该病奠定基础。本研究分离得到的24株APEC，通过血清型鉴定发现，优势血清型主要为O65，与董向磊15报道的山东地区流行的优势血清型结果一致。但是与国内外其他研究报道的APEC优势血清型为O2、O76、O78、O92、O93、O119的结果差异较大6,16-17。研究表明，国内外不同地区的禽大肠杆菌分离株O抗原血清型存在一定差异，可能是采样地点、季节及时间的不同所导致。此外，水禽的跨地域销售运输和疫苗防控也可能使当地的优势血清型发生改变18。因此，需要针对各个地区流行的APEC血清型及相应的环境气候采取较为有效的防控措施。图 7 24 株 APEC 对 24 种抗生素的多重耐药统计结果Fig.7 Results of multiple drug resistance of the 24 APEC isolates to 24 antibiotics表 6 24 株分离菌株的药敏试验Table 6 Drug sensitivity assay for 24 isolated strains药 物Drugs耐药Resistance（R）中介Intermediate（I）敏感Susceptible（S）菌株数Number of strains所占比例（%）Proportion(%)菌株数Number of strains所占比例（%）Proportion(%)菌株数Number of strains所占比例（%）Proportion(%)氟苯尼考 FFC1979.228.3312.5甲氧胺嘧 TMP1770.800729.2磺胺异恶 SIZ1979.214.2416.7复方新诺 SXT1770.800729.2 恩诺沙星 ENR24100.00000诺氟沙星 NOR1458.314.2937.5环丙沙星 CIP1458.314.2937.5氧氟沙星 OFX1354.214.21041.7左氧氟沙 LEV1354.214.21041.7氨苄青霉 CAR2083.328.328.3阿莫西 AML1979.228.3416.7 阿莫西林/棒酸 AMC000024100.0四环素 TET2291.728.300强力霉素 DOX24100.00000 万古霉素 VAN2291.70028.3 红霉素 ERY2291.728.300新霉素 NEO1562.5937.500庆大霉素 GEN1145.8001354.2卡那霉素 KAN1458.3520.8520.8头孢曲松 CRO1458.314.2937.5头孢哌酮 CFP1458.328.3833.3头孢克洛 CEC1458.314.2937.5头孢他啶 CAZ1041.7520.8937.5头孢拉定 RAD1458.314.2937.51-56-101466711-1516-20药物数量（个）耐药菌株数（株）21-25876543210 32 中国动物传染病学报2023 年 6 月系统进化分群是对大肠杆菌进行分型的一种重要的方法，可以追溯大肠杆菌进化起源18。本研究发现，24株分离菌株主要为A和B1进化分群，与Kobayashi等19研究报道的巴西某屠宰场的优势进化分群结果相一致，但与其他国家及国内某些地区研究结果不同，部分研究显示分离菌株的优势进化分群为B2群6,20。分离菌株的进化分群类型有所差异可能是由于采样地点、动物来源、饲养环境及采样时间的不同所致。本研究设计合成的8种毒力基因与禽大肠杆菌的致病性、耐药性存有一定联系。fimA基因在所有分离菌株中的检出率为83.3%，ECs3737基因为75%，ECs3703基因为66.7%，均有较高的分布率，为重要的禽大肠杆菌毒力基因。而tsh、irp2基因在本研究中检出率略低，分别为33.3%、4.2%。24株分离菌株同时也存在多种毒力基因组合形式，含有4个及以上毒力基因组合的菌株共7株，其中，fimA+ECs3703+ECs3737+tsh基因型有6株，fimA+ECs3703+ECs3737+irp2基因组合为1株。3基因组合共9株，其中fimA+ECs3703+ECs3737基因组合有7株。携带毒力基因较多的菌株可能致病性也较强，各分离株的致病性尚需进一步验证。药敏试验结果显示，分离菌株均为多重耐药菌株，其中79.2%（19/24）的菌株耐10种以上药物，由此可见，目前水禽大肠杆菌多重耐药现象较为严重，这可能与其血清型复杂、不合理使用抗菌药物有关21。APEC分离株对恩诺沙星、强力霉素两种药物的耐药率为100%，出现对同种药物耐药的现象，可能与江苏地区各养殖场的用药习惯有关，这些药物可能长期用于水禽大肠杆菌病的防控，导致耐药性的产生。Dou等22研究表明，在中国东部分离的243株APEC中，对四环素耐药的菌株占98%。本研究24株分离菌株中对四环素耐药的占91.7%，耐药率较高，与该研究结果一致。胡紫萌等23研究结果表明，分离的APEC对四环素、氟苯尼考、恩诺沙星、氧氟沙星的耐药率分别为100%、86%、70%、36%，钟舒红等24研究报道，在广西分离的禽源致病性大肠杆菌中，对氟苯尼考、恩诺沙星、庆大霉素的耐药率分别为47.8%、22.8%、26.5%，与本文研究结果均有所差异，这可能跟分离株的时空分布、各地的用药习惯不同有关。由本研究结果可以看出，国内不同地区的水禽大肠杆菌分离菌株均有不同程度的多重耐药现象，因此科学、合理、精准的使用抗菌药物对有效控制水禽大肠杆菌病的发生、减抗限抗的推广都具有重要意义。本研究通过对江苏省部分规模化水禽养殖场分离的24株水禽肠道外致病性大肠杆菌进行O抗原血清型测定、毒力基因及系统进化分群检测及耐药性研究，为水禽致病性大肠杆菌致病机理及防控提供参考，同时为后续对禽大肠杆菌耐药机制的研究奠定基础。参考文献1 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