高效液相色谱法测定肝复颗粒中6种成分含量.pdf
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1、1医疗装备 2024 年 3 月第 37 卷第 5 期 Medical Equipment,March.2024,Vol.37,No.5肝复颗粒是一种中成药,主要由虎杖、冷水花、吉祥草、苦参、黄柏、丹参、栀子等 7 味药材组成,具有疏肝利胆、活血化瘀、清热解毒等功效,主要用于治疗气滞血瘀、肝胆湿热所致的急慢性肝炎。方中虎杖的主要成分为虎杖苷和大黄素,具有护肝的作用1-2;栀子的有效成分为栀子苷和西红花苷类,具有保肝、抗癌等作用3-4;丹参中丹参酮类成分主要具有保护肝脏、抗菌消炎的作用5-6。中国药典7的原有标准收载中记载了栀子苷的定量限定,但是关于其他成分测定的相关研究较少。研究证实,复方中药
2、成分复杂,其疗效高效液相色谱法测定肝复颗粒中 6 种成分含量吴国军,徐惠玲,龚艳珍(通信作者)江西省人民医院(江西南昌330006)摘要目的建立高效液相色谱法(HPLC)法,同时测定肝复颗粒中栀子苷、西红花苷、丹参酮、隐丹参酮、虎杖苷、丹参酮 A 6 种成分的含量。方法采用COSMOSILC18色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸为流动相,流速为 0.8 ml/min,进行梯度洗脱,检测波长为 205 nm。结果6 种成分均实现较好的分离,在一定的浓度范围内各成分均呈良好的线性关系,平均回收率为 97.92%99.67%,相对标准偏差(RSD)为 0.28%1.51%。定量数据经统计学软件分析,可知栀
3、子苷和西红花苷是影响批次样品差异的主要因素。结论建立 HPLC 法同时测定肝复颗粒中栀子苷、西红花苷、丹参酮、隐丹参酮、虎杖苷、丹参酮A 6 种成分的含量,有利于对肝复颗粒成分的质量控制。关键词肝复颗粒;6 种成分;含量测定;高效液相色谱法中图分类号R284.1 文献标识码A 文章编号1002-2376(2024)05-0001-05DOI10.3969/j.issn.1002-2376.2024.05.001基金项目:江西省中医药管理局科技计划(2022B1056)收稿日期:2023-03-16论著 Determination of Six Components in Ganfu Granu
4、les by High Performance Liquid ChromatographyWu Guojun,Xu Huiling,Gong Yanzhen(Corresponding Author).Jiangxi Provincial Peoples Hospital,Nanchang Jiangxi 330006,China【Abstract】ObjectiveTo establish a high-performance liquid chromatography(HPLC)method for the simultaneous determination of six compone
5、nts in Ganfu granules,including geniposide,crocin,tanshinone,cryptotanshinone,polygonatum cuspidatum glycoside,and tanshinone A.MethodsUsed a COSMOSILC18 chromatographic column,with acetonitrile 0.1%phosphoric acid as the mobile phase and a flow rate of 0.8 ml/min,for gradient elution with a detecti
6、on wavelength of 205 nm.ResultsSix components all achieved good separation,and within a certain concentration range,each component showed a good linear relationship.The average recovery rate was from 97.92%to 99.67%,and the RSD was from 0.28%to 1.51%.Quantitative data was analyzed by statistical sof
7、tware,and it was found that geniposide and crocin were the main factors affecting the differences in batch samples.ConclusionEstablishing a high-performance liquid chromatography(HPLC)method to simultaneously determine the content of six components in Ganfu granules,including geniposide,crocin,tansh
8、inone,cryptotanshinone,polygonatum cuspidatum glycoside,and tanshinone A,is beneficial for the quality control of Ganfu granules.【Key words】Ganfu Granules;6 components;Content determination;High performance liquid chromatography2医疗装备 2024 年 3 月第 37 卷第 5 期 Medical Equipment,March.2024,Vol.37,No.5由方中药
9、材独立或相互作用决定,各药材所占比例将影响整个药方的疗效7-10。因此,评价复方中药的疗效需多成分测定。本研究采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定肝复颗粒中 6 种成分(虎杖苷、西红花苷、隐丹参酮、丹参酮、丹参酮 A、栀子苷)的含量,以期全面、客观地评价肝复颗粒的药效成分,现报道如下。1 仪器与试剂1.1 仪器高效液相色谱仪(山东鲁创分析仪器股份有限公司,型号:LC-500);高精度电子天平(上海赞维衡器有限公司,型号:ZA505AS);恒温水浴锅(常州国宇仪器有限公司,型号:HH-s6);数控超声波清洗器(北京东南仪
10、诚实验室设备有限公司,型号:KQ5200DV)。1.2 药品与试剂对照品栀子苷(批号:110749-201919)、虎杖苷(批号:111575-201603)、隐丹参酮(批号:110852-201807)、丹 参 酮(批 号:110867-201607)、丹参酮 A(批号:110766-202022)均购自中国食品药品检定研究院,西红花苷(上海泽叶生物科技有限公司,批号:ZY67302SD),色谱纯乙腈(上海优试化工有限公司,批号:20200322),色谱纯甲醇(广州浩盈化工科技有限公司,批号:20200310)。肝复颗粒共 12 批,生产厂家为贵州君之堂制药有限公司(批次分别为:200201
11、、200202、200203、200204、020401、200402、200403、200404、200701、200702、200703、200704)。2 方法与结果2.1 色谱条件色 谱 柱:COSMOSIL C18(150 mm4.6 mm,4.6 m)。流动相:乙腈(A)-0.1%磷酸(B)。以 0.8 ml/min 流速梯度洗脱(010 min,A:2%16%;1015 min,A:16%16%;1520 min,A:16%50%;2023 min,A:50%70%;2326 min,A:70%2%;2630 min,A:2%),检测波长为 205 nm,柱温为 40,进样量为
12、10 l。2.2 配制对照溶液同一 25 ml 容量瓶中放入适量的虎杖苷、隐丹参酮、丹参酮、丹参酮A、西红花苷、栀子苷为对照品,加甲醇溶解制成每毫升含虎杖苷0.28 mg、隐丹参酮 0.36 mg、丹参酮 0.44 mg、丹参酮A 0.14 mg、西红花苷 0.22 mg、栀子苷 0.12 mg 的混合溶液,备用。2.3 配制供试品溶液取肝复颗粒研磨成均匀细粉,称量 0.5 g,放入具塞锥形瓶中,添加色谱纯甲醇溶解,称定质量,超声(功率为250 W,频率为40 kHz)提取30 min取出、放冷,加色谱纯甲醇补足质量,摇匀,经0.45 m 微孔滤膜过滤后得所需滤液。2.4 配制阴性供试品溶液按
13、照颗粒制备工艺,分别制备小样虎杖、丹参及栀子阴性颗粒,并按“2.3”方法分别制备阴性溶液。注:1 为栀子苷,2 为西红花苷,3 为丹参酮,4 为隐丹参酮,5 为虎杖苷,6 为丹参酮A图 1各样品高效液相色谱图2.5 方法学2.5.1 线性试验采用甲醇按比例稀释“2.2”中混合对照品储备液,分别稀释 2、10、50、100 倍。按色谱条件进样,以峰面积为纵坐标(Y),浓度为横坐标(X),绘制标准曲线,计算对照品的回归方程及相关系数,见表 1。3医疗装备 2024 年 3 月第 37 卷第 5 期 Medical Equipment,March.2024,Vol.37,No.5表 16 种成分的线
14、性关系 成分回归方程r线性范围(g/ml)栀子苷Y=11 024.7492X-8 120.84310.99831.20120西红花苷 Y=21 069.2743X-20 308.4598 0.99962.20220丹参酮Y=5 776.1354X-3 051.86070.99954.40440隐丹参酮Y=5 419.2013X+433.78650.99993.60360虎杖苷Y=8 940.7712X-772.62220.99992.80280丹参酮AY=5 691.0708X+3 511.03050.99981.401402.5.2 精密度试验根据“2.1”方法色谱条件将混合对照品连续进样
15、6 次,记录峰面积、保留时间,虎杖苷、隐丹参酮、丹参酮、丹参酮 A、西红花苷、栀子苷的相对标准偏差(relative standard devition,RSD)分别为 0.22%、0.42%、0.83%、0.17%、0.31%及 0.24%,表明仪器精密度良好。2.5.3 重复性称量 6 份颗粒粉末,按供试品制备方法制得样品 6 份,根据“2.1”方法色谱条件测定,记录保留时间、峰面积,计算虎杖苷、隐丹参酮、丹参酮、丹参酮A、西红花苷、栀子苷的平均含量分别为 1.7427、1.3941、1.2448、0.7967、0.4481 mg/g,RSD 分别为 1.31%、0.26%、1.55%、0
16、.38%、1.31%及 0.25%,表明该方法重复性良好。2.5.4 稳定性根据“2.1”方法色谱条件分别对制备后 0、2、4、8、12、24 h 试品溶液进行测定,记录峰面积、保留时间,计算虎杖苷、隐丹参酮、丹参酮、丹参酮A、西红花苷、栀子苷的RSD分别为0.34%、1.28%、1.37%、0.61%、1.28%及 1.23%,表 明 供试品溶液 24 h 内稳定性良好。2.5.5 加样回收率在具塞锥形瓶中放入已知含量的样品 0.5 g,6 份,按 100%加入 6 个对照品,按照“2.3”实验方法制成供试品溶液,测定溶液中成分的含量并计算回收率,同时以溶液检测时的信噪比 S/N 3 作为最
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