高致病性禽流感强制免疫血清抗体检测分析 (1).pdf

8120245技术推广试验研究哲理自少齐埋于小草，而今渐却出蓬蒿。高致病性禽流感是由A型流感病毒中的H5（Re-11）、H5（Re-12）和H7（Re4）亚型毒株引起的一种人畜共患传染病。为维护公共卫生安全和畜产品质量安全，合理制定禽类免疫抗体检测计划，扎实推进动物疫病监测及流行病学调查，科学评估动物疫情发展态势，抓实高致病性禽流感等人畜共患病防治，创新疫病防控方式，有效控制和预防禽流感疫情发生，准确掌握强制集中免疫密度和效果，排查疫情隐患，保障养禽业健康发展。免疫抗体检测是动物接种疫苗后通过血清学方法对免疫机体进行抗体水平测定，根据抗体检测结果检验免疫成效，评价疫苗质量、免疫程序是否合理，了解禽类健康状况及对疾病抵抗力的重要方法。会泽县制定2023年畜禽免疫效果检测计划，在全县24个乡（镇、街道）开展秋季家禽高致病性禽流感强制免疫抗体水平集中检测，并对抽检的免疫禽类血清样本抗体检测结果进行分析，为今后探讨和总结禽类防疫免疫中存在的问题提供参考，现将2023年秋防检测结果作报告。1 检测材料和样品来源检测样品为县内规模养鸡场和散养户饲养的不同年龄肉蛋鸡血清。样品来源于每个乡（镇、街道）抽检的2个行政村及5个重点规模养鸡场，每个行政村采集1030份血清样品，每个规模养鸡场采集10份血清样品，采用翅静脉采血，每份血样1.52mL，并按要求填写采样登记表。2 检测方法及操作步骤2.1检测方法和试剂鸡血清样品主要检测H5（Re-11）、H5（Re-12）和H7（Re4）禽流感血清抗体，按GB/T189362003要求，采用HA-HI血清抗体检测方法（见表1），工作温度为室温。表1 鸡血清样品检测方法及试剂检测项目检测方法试剂厂商检测依据试剂批号H5（Re-11）、H5（Re-12）和H7（Re4）禽流感血清抗体HA-HI血清抗体检测哈尔滨维科生物技术开发公司GB/T18936200320220906.2022005.仪器名称及编号酶标仪HZCADC-YQ-020；振荡器HZCADC-YQ-025；移液器HZCADC-YYQ-007；HZCADC-YYQ-0102.2操作步骤2.2.1HA（血凝）试验（a）在微量反应板112孔均加入25 LPBS溶液，换吸头（b）吸取25L抗原原液加入第1孔并混匀，从第1孔吸取25L到第2孔，混匀后吸取25L到第3孔，如此反复对倍稀释至第11孔，从第12孔吸取25L混合液弃之，换滴头（c）每孔加入25LPBS溶液，再每孔加入25L1%RBC悬液（d）对照排，25L1%RBC悬液+50LPBS溶液（e）震荡20s，高致病性禽流感强制免疫血清抗体检测分析金友能1，丁怀凤1，徐莉萍1，郤 林2（1.会泽县动物疫病预防控制中心，云南 会泽 654200；2.会泽县动物卫生监督所，云南 会泽 654200）摘 要：为严格落实动物防疫主体责任，准确掌握高致病性禽流感秋防强制集中免疫密度和效果，采用 HA-HI（血凝）试验方法对会泽县 24 个乡（镇、街道）规模养鸡场 5 户 50 份鸡血清样品、散养户 658 户1611 份鸡血清样品检测其高致病性禽流感强制免疫抗体。结果表明，规模养殖场免疫抗体合格率 100%，散养户免疫抗体合格率 82.6%。全县鸡整体血样抗体检测合格率高于农业部标准要求，说明会泽县 2023 年度秋防高致病性禽流感强制免疫效果较好，但在禽类饲养管理、免疫技术和方法等方面仍需改进。关键词：高致病性禽流感；抗体检测；HA-HI（血凝）试验；防疫屏障8220245技术推广试验研究名言求学的三个条件是：多观察、多吃苦、多研究。加菲劳室温（2025）下静置40min后观察结果（f）判定结果。将微量板倾斜45，观察红细胞有无呈泪滴状流淌。完全凝集（不流淌）的抗原最高稀释倍数代表一个血凝单位（HAU）。2.2.2HI（血凝抑制）试验（a）配制4个HAU的病毒抗原（b）在微量板112孔均加入25LPBS溶液（c）吸取25L待检血清到第1孔并混匀，从第1孔吸取25L到第2孔，再从第2孔吸取25L到第3孔，如此反复一直到第12孔，最后从第12孔吸取25L混合液弃掉（d）112孔加入25L4HAU浓度的病毒抗原，震荡20s，混合均匀后室温下静置30min（e）每孔加入25L1%RBC悬液，震荡20s，室温下静置40min观察结果。3 结果判定标准 试验成立条件以完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度；阴性对照孔血清滴度不大于2log2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度。被检鸡禽群免疫抗体合格率70%判定为合格；免疫抗体检测结果（见表2）。表2 全县免疫抗体检测结果抗原检测范围（个）检测结果乡（镇、街道）村（社区）规模场 散养户规模场（个）散养户（个）合格数/样本数合格率（%）合格数/样本数 合格率（%）H5（Re-12）2439-216-274/32783.8H5（Re-11）2439522150/50100529/64282.4H7（Re4）2439522150/50100514/64280.1合计7211710658100/1001001317/161181.8注：-表示没有采样4 检测结果分析检测结果显示，规模场抽检5家，采样100份，H5（Re-11）免疫抗体合格率100%；H7（Re4）亚型禽流感免疫抗体合格率100%。散养户抽检658户，采样1611份，H5（Re-12）免疫抗体合格率83.8%；H5（Re-11）免疫抗体合格率82.4%；H7（Re4）亚型禽流感免疫抗体合格率为80.1%。会泽县2023高致病性禽流感秋防总体效果良好，平均免疫抗体合格率均81%，超过农业部规定标准（70%）。规模场抗体免疫效果理想，说明饲养管理相对较好，免疫程序科学，免疫操作规范，免疫次数和间隔时间合理。散养户免疫还存在漏洞，应加强对散养户抗体检测不合格鸡群补免。5 小 结5.1强化基层动物防疫体系建设禽流感强制免疫成效要严格落实防疫主体责任，强化基层动物防疫体系建设，充分发挥动物防疫合作社作用，健全技术培训、推广激励机制，积极推行政府购买防疫服务新模式，构建免疫、采样、协检、病死动物收集、巡查、报告、应急处置等兽医社会化服务平台，落实各项防控措施。加大数字化防控技术推广应用，继续推进动物免疫信息化，提升动物防疫网格化管理水平。加快动物疫病检测信息系统的开发应用，建立动物疫病检测精准、风险评估科学的预警体系。督促指导饲养动物的单位和个人切实履行动物疫病强制免疫义务，自主实施免疫接种，建立免疫档案，做好免疫记录。5.2积极扎实推进强制免疫制定强制免疫计划及实施方案，对中小规模养殖场及散养户继续采取春秋两季集中免疫与定期补免相结合，规模养殖场实施程序化免疫，确保动物疫病强制免疫100%。同时结合疫病防控实际，积极组织开展重点动物疫病免疫。加强指导，组织免疫效果检测和评价，对畜禽群体抗体合格率未达规定要求的及时补免，确保合格率常年在75%以上，筑牢防疫屏障。收稿日期：2023-10-30