多发性骨髓瘤细胞信号淋巴细...子家族受体表达及其临床价值_王卫国.pdf

收稿日期 修回日期 基金项目 安徽省高校自然科学研究重点项目（）作者单位 安徽省阜阳市人民医院 检验科，；蚌埠医学院 检验医学院，安徽 蚌埠 作者简介 王卫国（），男，硕士，主任技师通信作者 李玉云，硕士研究生导师，教授：文章编号（）检验医学多发性骨髓瘤细胞信号淋巴细胞激活分子家族受体表达及其临床价值王卫国，马 芳，王伟伟，张 夏，吴仲峰，李玉云摘要目的：探讨多发性骨髓瘤（）细胞信号淋巴细胞激活分子（，）家族受体表达的临床价值。方法：选取 例 病人和 例良性血液病病人，采用流式细胞术分析浆细胞 家族受体成员的表达。正常浆细胞和 细胞中表达无差异的 家族受体成员利用分辨率度量（）分析其区分 细胞和粒细胞的能力、设门分析 细胞百分比，在 份 细胞中于 内和 间的表达频率。结果：与正常浆细胞比较，细胞 和 表达频率降低（），、和 表达频率差异无统计学意义（）；细胞、和 的平均荧光强度（）高于淋巴细胞和粒系细胞（），的 变异系数低于 和（），而 高于 和（）；联合、或 设门与参考设门得到的 细胞比例呈明显正相关关系（值分别为 、和 ，）；细胞、和 在 内和 间表达频率差异无统计学意义（），但 的 阳性频率明显降低（）。结论：细胞 和 表达降低，可作为一种标记 细胞的抗原。关键词 多发性骨髓瘤；信号淋巴细胞激活分子；中图法分类号 文献标志码 ：，（，；，）：（）（）：，（），：，（），（）；，（）（），（），（）；，（，）；，（），（）：，；多发性骨髓瘤（，）是一种单克隆浆细胞恶性增殖的血液细胞肿瘤，目前仍不可治愈。免疫表型的差异是区分正常和异常浆细胞的基础，高表达的抗原也可以成为免疫治疗良好靶标。当前推荐标记浆细胞的抗原为 和，但 在 细胞中不是全部表达、在老化细胞中表达迅速下降以及 靶向治疗的应用，需要寻求一些新的抗原来识别 细胞。信 ，号 淋 巴 细 胞 激 活 分 子（，）家族受体属于免疫球蛋白超家族的型跨膜蛋白，参与先天性和适应性免疫反应的调节，调控免疫细胞的增殖和细胞因子的产生，主要由、和 等分子组成。家族受体成员在 细胞中如何表达及在诊疗中的价值，目前国内鲜有相关报道，本研究旨在探讨 家族受体成员在 细胞中表达的临床应用价值。资料与方法 一般资料选择 年 月至 年 月在阜阳市人民医院诊断的 病人 例，男 例，女 例，平均年龄（）岁，诊断标准依据中国多发性骨髓瘤诊治指南（年修订）。另择 例良性血液病病人作为对照组，其中缺铁性贫血 例、巨幼细胞性贫血 例和感染病人 例，男 例，女 例，平均年龄（）岁。组间性别、年龄差异均无统计学意义（、，）。仪器和试剂，标记、和，标记 和，等荧光标记单克隆抗体，分别购自 公司和 公司；流式细胞仪和溶血剂购自 公司。浆细胞 家族受体表达检测抽取入组者骨髓 ，肝素抗凝，计数并调整细胞浓度为（）。采用四色抗体组合，每个流式管的骨架抗体为、或，各检测管 中 分 别 加 入、和，抗体用量 ，再加入 的骨髓，室温染色 ，加入溶血素溶血，离心后弃上清液，磷酸盐缓冲液洗涤 次，加缓冲液重悬细胞后上机检测。采用 软件分析，侧向光射门除去细胞碎片，利用 或 联合设门圈出浆细胞，再分析 家族受体成员的表达，以抗原表达频率为阳性、为阴性，并记录平均荧光强度（）、中位数和变异系数（）。统计学方法采用 检验、（或）检验、单因素方差分析、检验和 相关分析。结果 家族受体成员表达频率比较与对照组的正常浆细胞比较，细胞 和 表达频率降低（），、和 表达频率差异无统计学意义（）（见表）；但 仅为部分表达，不适合做进一步分析。表 细胞和正常浆细胞 家族受体成员表达频率比较（；）细胞 细胞 正常浆细胞 示 值 细胞、粒细胞和淋巴细胞群、和 比较 细胞群、和 的 高于淋巴细胞群（），也高于粒系细胞群（）（见表）。表 细胞、淋巴细胞和粒系细胞、和 比较（）细胞群 细胞 淋巴细胞 粒系细胞 组内 检验：与 细胞比较；与淋巴细胞比较 细胞、和 的比较 细胞 的 （）低于（）和（）（、，）。、和 分辨率度量比较、和 荧光强度能否区分 细胞群和粒细胞群，采用分辨率度量（，）（细胞 中位数 粒系细胞 中位数）（细胞 粒系细胞）进行评估。、和 的 分别为 、和 ，种抗原表达在 细胞中 均可与粒系细胞群区分，的 高于 和（、，）。、和 设门与参考设门分析 细胞比例 细胞的参考设门方案为 （欧洲骨髓瘤网络）。相关性分蚌埠医学院学报 年 月第 卷第 期析 显 示：、和参考设门分析得到的 细胞百分比明显呈正相关（、和 ，）。储存稳定性比较 选择 份 样本，储存在 冰箱，于 再次检测 细胞、和 的表达频率。与 内检测的结果相比，的阳性频率明显降低（），而、和 阳性频率差异均无统计学意义（）（见表）。表 细胞、和 储存前后的阳性频率（）指标 差值 阳性频率 阳性频率 阳性频 阳性频率 讨论 正常浆细胞为多克隆性，但其膜抗原表达具有异质性。随着诊疗的发展，需要寻求一些能替代 的抗原用于浆细胞的检测。家族受体成员特异性表达于造血细胞，对免疫细胞增殖和功能的调节也起着重要作用，而免疫细胞的失衡与感染、肿瘤和自身免疫病等关系极为密切。近年来，家族受体成员的表达与肿瘤和感染的关系备受关注，在 细胞中的表达方式也是研究的热点。本次实验发现：较正常浆细胞，细胞 和 表达降低；而、和 在正常和异常浆细胞中绝大多数为强表达。结果表明 和 表达降低可以当作异常浆细胞的特征，并提示、和 或许可以用于标记 细胞。若一种抗原在多种血细胞中均表达，和 水平是 区分细胞最有价值的指标，尤其是。通过分析 发 现，细 胞、和 的 均明显高于粒系细胞和淋巴细胞，利用 可以将 细胞区分出来。阴性和低侧向散射光区域为红系细胞和红细胞碎片，从本实验流式图上能看出该区细胞几乎不表达、和，这种表达方式对识别 阴性的 极为有利。异常浆细胞也可以位于 弱阳性区域，且侧向散射光稍高，和粒系细胞的位置可能有所重叠，但不会与成熟淋巴细胞有重叠。利用 分析发现，细胞、和 的 水平，可以将 细胞从粒系细胞中区分出来，在 或 的双参数散点流式图上显现得较为明显，但 的 较低且 更高，显示出更强的区分力。联合设门分析浆细胞比例是目前推荐的 方案。以 和 为骨架抗体，利用、和 分别替代，分析 细胞的百分比，发现检测结果和参考方法具有很好的相关性，其中 为最高。这些结果显示出 在识别 的可用性。用于 检测骨髓样本，推荐肝素抗凝，虽然 可存放 ，但检测 细胞一般要求不超过。个 样本储存在 ，在 内和 时间时间段再检测发现：与 时内检测结果相比，在 时段检测，细胞 阳性表达降低，而、和 表达频率差异无统计学意义，显示、和 在储存过程中表达较为稳定，也提示随着样本的老化，用 设门会低估 细胞的比例。总之，家族受体成员在 细胞的表达中具 有 临 床 应 用 价 值。异 常 浆 细 胞 和 表达减低。在 细胞中高表达、较高、较低、与经典方法所获取 细胞比例的相关性好和储存过程中表达稳定，是一种可用于 细胞的标记抗原。参考文献 张彩霞，王洪涛，张国君 及 对以硼替佐米为基础治疗的初诊 患者预后的意义 中国实验血液学杂志，（）：，：，（）：，：，：，（）：，（）：（下转第 页），周万飞，刘高峰，秦中强，等 对肝细胞癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响 蚌埠医学院学报，（）：李红梅，李静，霍强，等 新型格尔德霉素葡萄糖苷的制备及其诱导人乳腺癌 细胞凋亡的作用 蚌埠医学院学报，（）：，（）：谷悦 大红袍红橘多甲氧基黄酮提取物及其主要单体的抗前列腺癌活性研究 重庆：西南大学，寇丽栋，王伟 四氢咪唑并，：，噻吩并，哌啶衍生物的合成及抗肿瘤活性 应用化学，（）：赵方诺 氟原子在药物设计中的主要应用以及引入方法国际公关，（）：，（）：郝莹莹，于佳斌，练旭冬，等 紫草素衍生物诱导肺癌细胞 细胞周期阻滞及细胞凋亡 山东化工，（）：冉茂良，高环，尹杰，等 氧化应激与 损伤 动物营养学报，（）：苏明俊 蛋白通过 信号通路介导宿主细胞 期阻滞的分子机制 大庆：黑龙江八一农垦大学，李朝兴 调控 依赖的信号通路及细胞凋亡武汉：湖北工业大学，（本文编辑 刘梦楠）（上接第 页），（）：中国医师协会血液科医师分会，中华医学会血液学分会，中国医师协会多发性骨髓瘤专业委员会 中国多发性骨髓瘤诊治指南（年修订）中华内科杂志，（）：，（）：，（）：王显凤，周慧星，张之尧，等 骨髓标本放置时间对流式细胞术浆细胞免疫表型检测结果的影响 白血病淋巴瘤，（）：张先瑞，方美云 与 多发性骨髓瘤细胞生物学特征的研究现状 东南大学学报（医学版），（）：，（）：，：徐家新，李娟，王磊，等 失衡与毛细支气管炎发病关系研究 蚌埠医学院学报，（）：傅磊，沈磊，卞建军，等 重组人血小板生成素联合大剂量地塞米松对原发性 病人 细胞及、细胞的影响 蚌埠医学院学报，（）：时杰，朱尊民，孙恺，等 在初诊多发性骨髓瘤患者的表达及预后判断中的意义 中华血液学杂志，（）：，（）：（本文编辑 周洋）蚌埠医学院学报 年 月第 卷第 期