酵母型真菌的微生物学检验.doc
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1、 . 酵母型真菌的微生物学检验1检验程序 深部真菌检验程序见图23-8。2. 标本采集 根据感染部位的不同,采集不同的标本。采集标本时应避免病灶周围正常菌群污染。对于疑似隐球菌性脑膜炎患者,以腰椎穿刺术无菌采集脑脊液35ml,特殊情况可采用小脑延髓池或脑室穿刺术,标本采集后应立即送检。3标本直接检查(1)直接显微镜检查:取标本直接涂片,革兰染色后镜检,显微镜下见到革兰阳性、圆形或卵圆形菌体或孢子及假菌丝(图23-6),可确认为念珠菌感染。克柔念珠菌可见假菌丝成对称分枝,有细长的芽生孢子。光滑念珠莳镜下可见卵圆形芽生孢子,细胞尖端单芽,无真假菌丝,不产生厚壁孢子。用患者脑脊液作墨汁负染色检查是诊
2、断隐球菌脑膜炎最简便、快速的方法。常规细胞染色可发现隐球菌,但易误诊和漏诊。如用PAS染色后新生隐球菌呈红色。(2)G试验:也称螯试验,可测定1-3-D-葡聚糖,后者是多种不同种类真菌细胞壁的共有成分,部分可激活马蹄蟹的协同凝集酶-G因子,用显色反应经分光光度计可测定其浓度。血液及无菌体液中检出1-3-D-葡聚糖为深部真菌,如念珠菌、曲霉菌和酵母菌等感染的标志,但不能确定为何种深部真菌感染。(3)抗原检测:取患者血清做ELISA、免疫印迹法等检测白念珠菌抗原,如烯醇化酶、甘露聚糖抗原及念珠菌热敏抗原。(4)抗体检测:早期诊断可采用患者血清作ELISA夹心法、免疫酶斑点试验,方法简便、快速。也可
3、用乳胶凝集试验和对流免疫电泳试验等检测血清中抗白念珠菌抗体。(5)核酸检测:用PCR法将白念珠菌DNA分子扩增后以分子探针检测,具有较好的敏感性和特异性。现有学者提出用短肽噬菌体展示技术与ELISA结合,高分辨率熔解曲线与真菌通用引物PCR结合鉴定白念珠菌及其他念珠菌。4分离培养将标本接种在沙保弱培养基上,25或37培养14天后,白念珠菌可在培养基表面出现奶油色类酵母型菌落,镜检可见假菌丝和芽生孢子。热带念珠菌在沙保弱培养基上形成色暗而干燥的菌落。克柔念珠菌在沙保弱琼脂培养基上25培养23天,呈扁平、干燥、灰黄色、可见皱褶菌落。光滑念珠菌在沙保弱培养基上2537培养23天,形成奶油色乳酪样菌落
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