细胞原代培养-细胞生物学实验报告.doc
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1、细胞生物学实验报告细胞原代培养 姓名: 学号: 班级: 专业: 同组成员: 一、实验原理 细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一,可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来,故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。 原代培养的方法: 1、组织块法 在平皿中用弯头剪把组织尽量剪碎,每个组织块小于1mm3大小。用Hanks液洗涤23次,自然沉淀。用吸管吸去上清液。将组织块贴于培养瓶进行培养。 2、酶消化法 将1mm3大小的组织块放入1个
2、三角瓶内加入1030ml的0.125%的胰蛋白酶。370C磁棒搅拌消化2030分钟。然后终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液,离心800rpm 510分钟收集细胞。弃上清,加入带有双抗的培养基,放入培养瓶培养 。 取材注意事项: 取材要注意新鲜和保鲜。取材应严格无菌。取材和原代细胞制作时,要用锋利的器械,如手术刀或剃须刀片切碎组织,尽可能减少对细胞的机械损伤。要仔细去除所取材料上的血液(血块)、脂肪、坏死组织及结缔组织,切碎组织时应避免组织干燥,可在含少量培养液的器皿中进行。取材应注意组织类型、分化程度、年龄等,一般来讲,胚胎组织较成熟个体组织容易培养,分化低的较分化高的组织容易生长,肿瘤组
3、织较正常组织容易培养。 二、实验目的1、理解细胞原代培养原理2、熟悉细胞原代培养方法与过程3、了解细胞原代培养的应用4、独立进行细胞原代培养操作三、实验材料手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯。动物:9-12日龄的鸡胚蛋四、实验步骤1、购买9-12日龄鸡胚蛋。放入孵化箱中孵养待用。2、取鸡胚蛋一枚放入超净工作台中,用酒精棉球擦拭鸡蛋壳后,气室处擦拭两遍,用镊子小心去除气室部分的蛋壳。3、取D-hanks液按1:100加入双抗。4、换用洁净的无菌镊子揭开膜,再用洁净的无菌弯头镊子取出鸡胚至灭菌的培养皿中,并用D-hank
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