酵母细胞壁对白羽肉鸡肠道发育的影响.pdf
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1、中国饲料2023 年第 17 期作者简介院廖灿青渊1985-冤袁男袁在读研究生袁主要从事家禽生长发育及疾病防控的研究袁E-mail院曰*通讯作者院王家乡袁教授袁E-mail院DOI院10.15906/11-2975/s.2023080101摘要 为了探明酵母细胞壁渊YCW冤对肉鸡小肠各段肠道组织形态尧肠道内容物 PH 值和肠道微生物的影响袁选用 1 日龄科宝肉鸡 200 只袁随机分为 4 个组袁每组 5 个重复袁每个重复 10 只鸡遥对照组 A 饲喂基础日粮袁试验组 B尧C和 D 在基础日粮中分别添加 250尧500 g/t 和 1000 g/t YCW袁试验期 42 d袁在 21 日龄和 4
2、2 日龄测量了小肠各段长度和重量袁在 42 日龄采集了各段肠道食糜检测 pH 值和 HE 染色袁将 42 日龄采集的盲肠食糜采用 16S 高通量检测微生物多样性遥结果表明院渊1冤在 21 日龄时院与对照组相比袁添加 500 g/t YCW 组的空肠长度显著提高渊P 0.05冤曰添加 500 g/t YCW 组十二指肠和空肠的相对长度显著提高渊P 0.05冤曰添加 1000 g/t YCW 组十二指肠重量和相对重量显著提高渊P 0.05冤遥渊3冤与对照组相比袁试验组肠道食糜 pH 都有所下降袁各组间差异不显著渊P 0.05冤遥 渊4冤肉鸡盲肠微生物群落 ASV尧等级丰度曲线和稀释曲线分析表明袁随
3、着 YCW 添加量的加大袁盲肠 ASV/OTU 总数目和独有数目会减少遥 Alpha 多样性分析表明袁添加 250 g/t YCW 组的微生物菌落多样性和菌落丰富度表现最佳袁各组间无显著差异渊P 0.05冤遥肉鸡盲肠微生物 LEfSe 分析基于分类等级树的组间差异分类单元展示袁o_Lactobacillales尧g_Enterococcus尧f_Enterococcaceae尧g_cc_115 在各组中差异表达袁o_Lactobacillales尧g_Enterococcus尧f_Enterococcaceae 在 A 组中的丰度最高袁g_cc_11 在C 组中的丰度最高遥 以上结果表明袁YC
4、W 的添加可改善和维持肠道酸性环境袁促进肉鸡养殖前期肠道发育袁调控肠道微生物丰度袁促进肠道健康袁提高养殖生产效益遥关键词 酵母细胞壁曰白羽肉鸡曰肠道组织形态曰肠道 pH曰肠道微生物多样性中图分类号 S816.7文献标识码 A文章编号 1004-3314渊2023冤17-0165-07酵母细胞壁对白羽肉鸡肠道发育的影响廖灿青1袁3袁 周小辉1袁 陈中平2袁 谢智文2袁徐杰2袁 戴晋军2袁 王家乡3*渊1.宜昌安琪生物农业科技有限公司袁湖北宜昌 443200曰2.安琪酵母股份有限公司袁湖北宜昌 443000曰3.长江大学袁湖北荆州 434023冤福邦酵母技术专栏窑 广告 窑酵母细胞壁渊YCW冤主要
5、成分为甘露聚糖尧葡聚糖尧蛋白质以及少量的脂类和几丁质等渊朱延军等,2009冤遥 研究表明酵母细胞壁能够吸附肠道病原菌尧 促进肠道有益菌群定植尧 调节机体免疫功能尧特异性吸附霉菌毒素等袁作为酵母源生物饲料的重要组成部分袁已经被广泛应用于畜禽养殖渊周胜男,2017冤遥 欧盟将酵母细胞壁 纳入渊EU冤NO68/2013 号法规袁我国也已将酵母细胞壁纳入了叶饲料原料目录渊2013冤曳渊戴晋军等,2022冤遥 目前酵母细胞壁对肉鸡免疫相关的研究较多袁 在对肠道发育方面的研究较少袁因此袁本研究旨在评估日粮中添加酵母细胞壁对白羽肉鸡肠道组织形态尧 肠道pH 和肠道微生物多样性的影响遥1材料与方法1.1试验材
6、料酵母细胞壁样品由安琪酵母股份有限公司提供袁 粗蛋白质 21%耀 23%袁茁-葡聚糖25%耀 27%袁甘露聚糖 26%耀 28%袁溶解率 45%耀50%袁可溶部分中分子量在 14 万 耀 19 万道尔顿的约占 38.03%袁9 万 耀 14 万道尔顿的约占 61.53%遥1.2试验动物及日粮试验动物选用科宝白羽165中国饲料2023 年第 17 期肉鸡袁基础日粮配方参考 NY/T 33-2004袁日粮营养水平见表 1遥1.3试验设计与饲养管理选择 1 日龄白羽肉鸡 200 羽袁随机分为 4 个处理组袁每个处理组 5 个重复袁每个重复 10 羽袁各组间试验鸡的平均体重差异不显著渊P 跃 0.05
7、冤遥 对照组 A 饲喂基础日粮袁试验组 B尧C尧D 分别在基础日粮中添加 250尧500尧1000 g/t 的酵母细胞壁袁试验期 6 周遥 试验肉鸡自由采食尧饮水袁采用保温灯取暖调控圈内温度袁鸡舍消毒使用聚维酮碘或稀戊二醛溶液袁肉鸡舍内环境控制和饲养管理依照肉鸡饲养管理标准进行遥免疫程序院 在 4 耀 8 d 新支二联疫苗免疫袁11 耀 15 d 进行法氏囊疫苗免疫袁18 耀 22 d 进行新城疫二免遥1.4测定指标及方法1.4.1肠道组织形态学测定肠道长度和重量测定院在 21 日龄和 42 日龄晚上 20院00 断料 12 h渊仅供饮水冤袁 在试验 22 日龄和 43 日龄上午 8院00袁每
8、个重复称取 3 只接近平均体重的鸡进行屠宰袁用手术剪和手术刀将腹腔解剖露出肠道袁用手术剪剪掉肠道连接肌胃的末端取出肠道袁分离十二指肠渊前端从肌胃末端剪断袁后端从胆管与十二指肠交接处剪短冤尧空肠渊十二指肠与胆管交界处到卵黄囊憩室处冤和回肠渊卵黄囊憩室处到回盲交接处冤遥小肠长度院用塑料尺测量十二指肠尧空肠和回肠的长度遥肠道绝对长度=肠道长度渊cm冤曰肠道相对长度=肠道长度渊cm冤/活体重渊kg冤遥小肠重量院剥离各段小肠结缔组织和肠系膜袁根据家禽解剖学结构袁 在特定的位置用手术剪剪开肠段袁然后用生理盐水反复冲洗掉肠道内食糜袁用滤纸吸干水分袁再分别称重袁计算十二指肠尧空肠和回肠的相对重量遥消化器官绝对
9、重量=消化器官重渊g冤曰消化器官相对重量=消化器官重 渊g冤/活体重渊kg冤遥肠道 HE 检测院试验结束后袁每个重复称取 3只接近平均体重的鸡进行屠宰遥 用手术剪剪下每只肉鸡的十二指肠渊离肌胃末端 5 mm 处冤尧空肠中间段和回肠中间段约 3 耀 4 cm 的肠段组织袁尽快放入 10%的中性福尔马林固定液中遥 样品经固定尧洗涤尧脱水尧透明尧透蜡尧包埋尧修块后袁切成较厚石蜡切片袁H-E 染色袁 封片后用显微摄影分析系统测量十二指肠尧 空肠和回肠的绒毛高度和隐窝深度袁并计算绒毛高度与隐窝深度比值遥1.4.2肠道内容物 pH 测定43 日龄袁 在洁净环境下屠宰肉鸡袁 并收集回肠和盲肠中食糜 50 耀
10、100 g袁用于检测肠道内容物的 pH渊用 pH 计冤遥1.4.3盲肠微生物菌落多样性测定43 日龄袁在洁净环境下屠宰肉鸡袁 并收集回肠和盲肠中食糜50 耀 100 g袁用 16S 检测肠道内容物的微生物丰度遥盲肠微生物量用 ASV/OTU 丰度表制作韦恩图遥Alpha 多样性分析软件院 QIIME2 渊2019.4冤遥 LEfSe分析软件院Python LEfse 包袁R ggtree袁ggplot2 包等遥1.5数据处理与统计分析试验数据采用 Excel进行预处理袁以野平均数依标准差冶表示袁采用 SPSSstatistic 22 统计软件中 one-way ANOVA 进行单因素方差分析袁
11、 差异显著性用 Duncan 氏多重比较法袁以 P 0.05冤曰与对照组相比袁各试验组空肠长度都有所增加袁其中添加 500 g/t 酵母细胞壁组的空肠长度显著提高17.93%渊P 0.05冤遥42 日龄小肠各段长度结果见表 2袁 与对照组相比袁 添加酵母细胞壁组十二指肠长度都有所下降袁 添加 1000 g/t 酵母细胞壁组的十二指肠长度表 1基础日粮营养水平渊风干基础冤日龄22 42 d代谢能/渊MJ/kg冤12.96粗蛋白质/%粗纤维/%逸19.0臆4.51 21 d12.54逸21.0臆4.5粗灰分/%臆7.0臆7.5钙/%0.71.30.61.3总磷/%逸0.6逸0.55氯化钠/%蛋氨酸
12、/%0.3 0.8逸0.50.3 0.8逸0.43166中国饲料2023 年第 17 期肠道回肠时间21 d42 dA 组6.19依0.1622.00依7.31B组C组5.70依0.946.32依0.5517.46依3.1718.12依4.45D组6.31依0.7716.89依2.4842 d12.88依2.5711.25依2.4811.29依2.6111.56依1.22十二指肠21 d5.04依0.34a5.62依0.64ab5.54依0.87ab7.41依1.96b空肠21 d9.17依1.6410.21依1.349.61依0.9711.67依2.5242 d24.90依1.8822.44
13、依5.7120.15依2.8324.61依5.61表 4酵母细胞壁对肉鸡小肠各段重量的影响g最小袁比对照组降低 19.42%袁各组间无显著差异渊P 0.05冤曰与对照组相比袁试验组空肠长度都有所增加袁 其中添加 1000 g/t 酵母细胞壁组提高17.73%袁各组间差异不显著渊P 0.05冤曰与对照组相比袁 试验组回肠长度都有所提高袁 其中添加1000 g/t 酵母细胞壁组提高 10.45%袁 各组间差异不显著渊P 0.05冤遥2.1.2酵母细胞壁对白羽肉鸡小肠各段相对长度的影响21 日龄小肠各段相对长度结果见表 3袁与对照组相比袁 添加 250 g/t 酵母细胞壁和 1000g/t 酵母细胞
14、壁的十二指肠相对长度有所减少袁添加 500 g/t 酵母细胞壁组十二指肠相对长度比对照组和其他试验组显著提高渊P 0.05冤曰与对照组相比试验组空肠相对长度都有所增加袁 其中添加500 g/t 酵母细胞壁组的十二指肠相对长度与对照组和其他试验组相比显著提高渊P 0.05冤袁试验组之间添加 500 g/t 酵母细胞壁组的回肠相对长度比 250 g/t 酵母细胞壁组显著提高 21.97%渊P 0.05冤曰与对照组相比袁 添加酵母细胞壁组空肠相对长度都有所增加袁 其中添加 1000 g/t 酵母细胞壁组的空肠相对长度提高 15.66%袁 各组间差异不显著 渊P 0.05冤曰与对照组相比袁添加酵母细胞
15、壁的回肠相对长度有所增加袁 添加 1000 g/t 酵母细胞壁组回肠相对长度提高 8.19%袁差异不显著渊P 0.05冤遥2.1.3酵母细胞壁对白羽肉鸡小肠各段重量的影响21 日龄小肠各段重量结果见表 4袁 与对照组相比袁 添加酵母细胞壁组的十二指肠重量有所增加袁 添加 1000 g/t 酵母细胞壁组十二指肠重量显著提高 47.02%渊P 0.05冤曰与对照组相比袁添加酵母细胞壁组的回肠重量都有所增加袁 其中添加 1000 g/t酵母细胞壁组回肠重量提高 1.94%袁 各组间差异不显著渊P 0.05冤遥42 日龄小肠各段重量结果见表 4袁与对照组相比袁 添加酵母细胞壁组的十二指肠重量有所降低袁
16、添加 250 g/t 酵母细胞壁组十二指肠重量降低12.66%袁各组间差异不显著渊P 0.05冤曰与对照组相比袁试验组空肠重量都有所减少袁其中添加 500 g/t酵母细胞壁组的空肠重量最小袁 比对照组降低19.08%袁各组间差异不显著渊P 0.05冤曰与对照组相比袁 添加酵母细胞壁组的回肠重量都有所降低袁其中添加 1000 g/t 酵母细胞壁组回肠相重量最低袁比对照组降低 23.22%袁各组间差异不显著渊P 0.05冤遥2.1.4酵母细胞壁对白羽肉鸡小肠各段相对重量的影响21 日龄小肠各段相对重量结果见表 5袁与对照组相比袁 添加酵母细胞壁组的十二指肠相对重量有所增加袁 添加 1000 g/t
17、 酵母细胞壁组十二指肠相对重量比对照组和添加 250 g/t 酵母细肠道回肠时间21 d42 dA 组49.03依6.5167.00依8.66B组C组42.50依2.5048.40依0.5370.00依6.5669.67依10.69D组43.33依2.0874.00依9.1042 d28.83依1.6124.50依2.1825.50依2.1823.23依6.60十二指肠21 d20.63依1.1920.27依0.3121.03依0.5520.33依1.04空肠21 d40.90依2.52a43.60依0.46ab48.23依1.08b41.90依1.47ab42 d57.93依12.1765.
18、83依8.2564.83依7.2968.20依5.07表 2酵母细胞壁对肉鸡小肠各段长度的影响注院同行数据注有不同小写字母者表示差异显渊P 0.05冤曰下同遥肠道回肠时间21 d42 dA 组62.33依8.19ab27.97依4.17B组C组53.38依3.78a65.11依0.24b27.23依1.4732.77依10.23D组55.71依4.85ab30.26依1.8242 d12.03依0.949.54依0.7311.94依2.989.68依3.26十二指肠21 d26.23依1.45a25.46依1.01a28.29依0.55b26.09依1.22a空肠21 d52.00依3.27a
19、54.76依1.75a64.89依1.35b53.87依4.44a42 d24.20依5.5325.58依2.0330.30依7.9527.99依1.89表 3酵母细胞壁对肉鸡小肠各段相对长度的影响cmcm/kg167中国饲料2023 年第 17 期胞壁组显著提高 46.96%和 33.38%渊P 0.05冤曰与对照组相比袁添加 250 g/t 酵母细胞壁组的回肠相对重量降低 9.28%袁 差异不显著 渊P 0.05冤袁添加 500 g/t 酵母细胞壁组和添加 1000 g/t酵母细胞壁组的回肠相对重量都有所增加袁 比对照组分别提高 8.01%和 2.54%袁与添加 250 g/t 酵母细胞壁
20、组相比袁500 g/t 酵母细胞壁组的回肠相对重量显著提高 19.06%渊P 0.05冤曰与对照组相比袁试验组空肠相对重量都有所减少袁 各组间差异不显著 渊P 0.05冤曰与对照组相比袁添加酵母细胞壁组的回肠绝对重量都有所降低袁其中添加 250 g/t 酵母细胞壁组回肠相绝对重量最低袁 比对照组降低26.74%袁各组间差异不显著渊P 0.05冤遥2.1.5酵母细胞壁对白羽肉鸡小肠各段肠绒毛高度和肠隐窝深度的影响42 日龄白羽肉鸡小肠各段肠绒毛高度和肠隐窝深度的结果见表 6袁与对照组相比袁 试验组十二指肠绒毛高度和隐窝深度都有所下降袁各组间无显著差异渊P 0.05冤曰与对照组相比袁 添加酵母细胞
21、壁组空肠绒毛高度有所增加袁 隐窝深度有所下降袁 各组间无显著差异渊P 0.05冤曰与对照组相比袁添加 250 g/t 酵母细胞壁组的回肠绒毛高度下降袁添加 500 g/t 酵母细胞壁组和添加 1000 g/t 酵母细胞壁组的回肠绒毛高度有所增加袁各组间差异不显著渊P 0.05冤遥2.2酵母细胞壁对白羽肉鸡肠道食糜 pH 的影响各组肉鸡肠道食糜 pH 结果见表 7袁与对照组相比袁试验组 pH 都有所下降袁差异不显著渊P 0.05冤袁因此袁说明该酵母细胞壁对肉鸡肠道环境有改善作用袁可以降低肉鸡肠道 pH袁当添加量为500 g/t 时袁可以使肉鸡肠道处于弱酸性遥2.3酵母细胞壁对白羽肉鸡盲肠微生物的
22、影响2.3.1肉鸡盲肠微生物群落 OTUs尧等级丰度曲线和稀释曲线分析图 1 是各组 OTU 的韦恩图袁从图上可以看出袁A尧B尧C 和 D 四个组共有的 OUT为 21294 个袁 每个组分别有的 OUT 为院 6052尧6679尧6594 和 5746 个曰 四组总共独有的 OUT 为19005 个袁 分别独有的 OTU 为 4642尧5108尧4973和 4282 个曰两组共有的 OUT 总数为 5737 个袁A尧B 组共有的为 926 个袁A尧C 组共有的为 961 个袁A尧D 组共有的为 846 个袁B尧C 组共有的为 1046个袁B尧D 组共有的为 968 个袁C尧D 组共有的为 9
23、90个曰四组共有的 OTU 为 472 个曰由此可以进一步说明袁随着酵母细胞壁添加量的加大袁盲肠 ASV/OTU 总数目和独有数目会减少遥从图 2 等级丰度曲线可以看出袁 随着测序数量的增加而趋于平缓袁 说明肠道菌群数量并没有肠道回肠时间21 d42 dA 组7.87依0.23ab9.20依3.21B组C组7.14依0.98a8.50依0.67b6.74依0.658.51依2.84D组8.07依0.55ab6.90依0.6742 d5.38依1.174.36依0.735.31依1.774.78依0.82十二指肠21 d6.41依0.42a7.04依0.62a7.45依1.16ab9.42依2.
24、05b空肠21 d11.66依2.1012.80依1.3412.92依1.3114.87依2.4842 d10.39依0.958.66依1.629.38依2.4310.11依2.35表 5酵母细胞壁对肉鸡小肠各段相对重量的影响g/kg肠道项目隐窝深度/滋mA组247.27依46.13B组C组232.10依47.26200.93依31.45D组213.57依54.12隐窝深度/滋m226.37依26.18211.48依33.87206.75依22.62217.64依28.50十二指肠绒毛高度/滋m1854.35依87.261747.28依94.521817.83依53.431753.71依63.
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