转基因技术和生物安全省公共课一等奖全国赛课获奖课件.pptx
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1、转基因技术转基因技术及安全及安全控制控制第第1页页主要内容主要内容一、什么是转基因技术?一、什么是转基因技术?二、转基因的特点二、转基因的特点三、转基因种类及对人类的贡献三、转基因种类及对人类的贡献四、转基因技术及原理四、转基因技术及原理五、转基因的风险与安全控制五、转基因的风险与安全控制第第2页页一、什么是转基因?一、什么是转基因?第第3页页基因(基因(genegene)化学遗传学基因决定性状基因决定性状 物种特征特征是由基因决定,是能够遗传。物种特征特征是由基因决定,是能够遗传。种瓜得瓜,种豆得豆。种瓜得瓜,种豆得豆。含有特定遗传信息脱氧核糖核酸(DNA)分子片段。控制生物性状基本遗传单位
2、第第4页页基因研究历史基因研究历史1859年,达尔文(英国)“物种起源”;1865年,米歇尔(瑞士)发觉核酸;1866年,孟德尔(奥地利)发表豌豆遗传试验结果;1879年,弗莱明(德国)发觉细胞核内染色体;19,萨顿(美国)提出染色体遗传学说;19,摩尔根(美国)创建当代遗传学基因学说;1944年,艾弗里(美国)证实DNA是遗传信息载体;1953年,沃森(美国)和克里克(英国)提出DNA双螺旋结构;1966年,密码子破译完成;197273年,DNA重组技术建立;1980年,得到转基因小鼠;1983年,得到转基因植物(烟草)第第5页页细胞:生命活动基本单元细胞:生命活动基本单元 基因是怎样控制性
3、状?基因是怎样控制性状?一个一个DNADNA分子含有多个基因分子含有多个基因 开启子开启子 -编编 码码 区区 -终止子终止子 基因编码蛋白质基因编码蛋白质蛋白质决定性状蛋白质决定性状 第第6页页转基因技术转基因技术第第7页页二、转基因生物(GMO)特点 转转基基因因生生物物:经经转转基基因因技技术术修修饰饰生生物物体体被被称称为为“遗遗传传修修饰饰过过生生物物体体”(Genetically modified organism,简简称称GMOGMO),或或转转基基因因生生物物(transgenic organism ),包包含含转转基基因因微生物微生物、转基因植物转基因植物及及转基因动物转基因
4、动物。第第8页页转基因生物特点转基因生物特点作为产品:保持受体生物优点,改进受体生物得一些缺点或增加特定功效(如:抗除草剂、耐盐碱、耐高温、品质改良、产量等)作为生产工具:提升生产效率,生物反应器转基因最大特点就是转基因最大特点就是能够跨物种进行基因能够跨物种进行基因转移转移第第9页页利用当代生物技术,将人们期望目标基因,经过人工分离、重组后,导入并整合到生物体基因组中,从而改进生物原有性状或赋予其新优良性状。转基因技术转基因技术 转基因作物新品种培育主要过程转基因作物新品种培育主要过程 转化体筛选分析转化体筛选分析回交转育回交转育 遗传转化遗传转化 基因分离基因分离基因克隆基因克隆重组重组D
5、NADNA第第10页页 转基因技术与传统育种技术比较转基因技术与传统育种技术比较 目都是目都是通过改通过改变变 基因获基因获得优良得优良性状性状基因起源:近缘种基因起源:近缘种操作对象:基因组操作对象:基因组基因起源:广泛基因起源:广泛 操作对象:基因操作对象:基因 自然驯化自然驯化人工选育人工选育诱变育种诱变育种杂交育种杂交育种分子标识分子标识 转基因育种转基因育种传统育种技术传统育种技术 第第11页页 传统杂交育种传统杂交育种优良基因=X杂交优良基因 基因工程育种基因工程育种重组优良基因=供体生物供体生物 受体生物受体生物 新种质新种质 目基因目基因 受体事物受体事物 新种质新种质转基因育
6、种与常规育种技术之比较转基因育种与常规育种技术之比较优良基因第第12页页转基因育种程序转基因育种程序基因分离基因分离体外重组体外重组转化转化转化体转化体安全性评价安全性评价结合常规育种结合常规育种转基因品种转基因品种遗传稳定性遗传稳定性评价评价市场开发市场开发载体构建载体构建农杆菌介导农杆菌介导基因枪轰击基因枪轰击筛选筛选第第13页页转基因技术优转基因技术优势势第第14页页三、转基因生物及对人类贡献三、转基因生物及对人类贡献转基因植物基因植物抗虫、抗病、抗逆、抗虫、抗病、抗逆、观赏、功能食品、功能食品医学医学应用(生用(生产疫苗)疫苗)转基因基因动物物医用(生医用(生产人体器官、人体器官、生生
7、产药用蛋白)用蛋白)畜牧畜牧应用(提高畜禽用(提高畜禽抗病力、改良生抗病力、改良生产形形状)状)转基因微生物基因微生物基因工程菌(生基因工程菌(生产疫疫苗、提高生苗、提高生产率)率)工工业应用(用(纤维素、素、酿酒)酒)环保(保(污染物降解)染物降解)第第15页页转基因抗虫棉(含转基因抗虫棉(含转基因抗虫棉(含转基因抗虫棉(含BtBtBtBt蛋白)蛋白)蛋白)蛋白)第第16页页第第17页页转抗除草剂转抗除草剂转抗除草剂转抗除草剂基因大豆基因大豆基因大豆基因大豆第第18页页转基因大米转基因大米转胡萝卜素基因转胡萝卜素基因(University of Cambridge)药用大米药用大米(Kans
8、as,America)第第19页页转转Bt-SCKBt-SCK基因水稻基因水稻第第20页页/10/10Copyright Jiangyong转抗环斑病转抗环斑病转抗环斑病转抗环斑病毒基因番木毒基因番木毒基因番木毒基因番木瓜瓜瓜瓜第第21页页地雷探测草地雷探测草 能预测地震拟南芥能预测地震拟南芥能预测地震拟南芥能预测地震拟南芥转基因荠菜能够减转基因荠菜能够减转基因荠菜能够减转基因荠菜能够减轻土壤污染轻土壤污染轻土壤污染轻土壤污染第第22页页GM corn Your mealGM potato第第23页页转基因动物在医药方面应用转基因动物在医药方面应用 1985年出世年出世Tracy,标价标价46
9、00万美元,万美元,能够提供全球治疗囊肿能够提供全球治疗囊肿性纤维化(一个遗传疾性纤维化(一个遗传疾病)所需全部胰蛋白酶病)所需全部胰蛋白酶抑制剂抑制剂1 1、产产量高量高量高量高2 2、没有、没有、没有、没有污污染染染染3 3、成本低、成本低、成本低、成本低第第24页页动物动物多肽药品用途用途绵羊绵羊a1抗胰蛋白酶蛋白抗胰蛋白酶蛋白治疗气肿治疗气肿绵羊绵羊CFTR治疗治疗 囊肿性纤维化囊肿性纤维化绵羊绵羊组织型纤溶酶原活化因子组织型纤溶酶原活化因子治疗血栓治疗血栓绵羊绵羊凝血凝血VIII因子、因子、IX因子因子治疗血友病治疗血友病绵羊绵羊纤维蛋白原纤维蛋白原伤口愈合伤口愈合猪猪组织型纤溶酶原
10、活化因子组织型纤溶酶原活化因子治疗血栓治疗血栓猪猪凝血凝血VIII因子、因子、IX因子因子治疗血友病治疗血友病山羊山羊人蛋白质人蛋白质 C治疗血栓治疗血栓山羊山羊抗血栓因子抗血栓因子 3治疗血栓治疗血栓山羊山羊谷氨酸脱羧酶谷氨酸脱羧酶治疗治疗I型糖尿病型糖尿病山羊山羊Pro542治疗爱滋治疗爱滋 病病牛牛a-乳清白蛋白乳清白蛋白抗炎症抗炎症牛牛凝血凝血VIII因子因子治疗血友病治疗血友病牛牛纤维蛋白原纤维蛋白原伤口愈合伤口愈合牛牛胶原蛋白胶原蛋白 I,II组织修复组织修复,治疗风湿性关节炎治疗风湿性关节炎牛牛乳铁蛋白乳铁蛋白治疗肠道感染治疗肠道感染,感染性关节炎感染性关节炎牛牛人血清白蛋白人血
11、清白蛋白维护血液体积维护血液体积鸡鸡,牛牛,山羊山羊单克隆抗体单克隆抗体用于疫苗生产用于疫苗生产第第25页页26转基因鲑鱼转基因鲑鱼野生鲑鱼野生鲑鱼表示红色荧光蛋白转基因鱼表示红色荧光蛋白转基因鱼第第26页页乳汁中分泌人凝血因子乳汁中分泌人凝血因子乳汁中分泌人凝血因子乳汁中分泌人凝血因子IXIXIXIX转基因山羊转基因山羊转基因山羊转基因山羊 培育出人耳小鼠培育出人耳小鼠培育出人耳小鼠培育出人耳小鼠第第27页页 1982 年美国年美国 EliLilly 企业企业推出基因工程制造人胰岛素,推出基因工程制造人胰岛素,商品名为商品名为(Humulin)。传统生。传统生产方法是从牛胰脏中提取。产方法是
12、从牛胰脏中提取。每每 1000 磅牛胰脏,才能得磅牛胰脏,才能得到到 10 克胰岛素。经过基因克胰岛素。经过基因工程方法,把编码胰岛素基工程方法,把编码胰岛素基因送到大肠杆菌细胞中去,因送到大肠杆菌细胞中去,造出能生产胰岛素工程菌;造出能生产胰岛素工程菌;从从200升发酵液就可得到升发酵液就可得到10克胰岛素。克胰岛素。第第28页页转人生长素基因工程菌转人生长素基因工程菌转基因转基因酵母菌酵母菌第第29页页高效光谱杀蚊工程菌高效光谱杀蚊工程菌高效光谱杀蚊工程菌高效光谱杀蚊工程菌废水处理基因工程菌废水处理基因工程菌废水处理基因工程菌废水处理基因工程菌第第30页页四、转基因技术及原理四、转基因技术
13、及原理(一)转基因基本(一)转基因基本技术线路技术线路(二)转基因的(二)转基因的受体系统受体系统(三)外源基因导(三)外源基因导入的方法入的方法(四)转基因筛选(四)转基因筛选与检测与检测转基因转基因技术技术第第31页页转基因基本技术线路转基因基本技术线路1 1、获得、获得目的基因,目的基因,克隆到载克隆到载体上扩增体上扩增2 2、受体、受体细胞培养:细胞培养:如植物愈如植物愈伤组织等伤组织等3 3、目的、目的基因导入基因导入受体细胞受体细胞4 4、培养、培养转化细胞转化细胞5 5、筛选、筛选、培植、鉴培植、鉴定定第第32页页转基因植物技术流程转基因植物技术流程第第33页页苏云金芽孢杆菌苏云
14、金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因杀虫晶体蛋白基因表示载体表示载体花粉管通花粉管通道导入道导入第第34页页转基因动物技术流程转基因动物技术流程转人乳铁蛋白基因转人乳铁蛋白基因奶牛奶牛第第35页页转基因微生物技术流程转基因微生物技术流程转人胰岛转人胰岛素基因大素基因大肠杆菌肠杆菌第第36页页基因工程菌构建过程基因工程菌构建过程第第37页页(二)转基因受体系统(二)转基因受体系统组织受体系统组织受体系统(如:受(如:受伤的的细胞容易受到病毒或胞容易受到病毒或质粒的感粒的感染,并形成愈染,并形成愈伤组织,可,可诱导分化出完整植株)分化出完整植株)原生质体系统原生质体系统(便于体外(便于体外细胞和胞和遗传操作
15、)操作)生殖细胞受体系统生殖细胞受体系统(1、单倍体培养倍体培养诱导愈愈伤组织、转化;化;2、利用花粉和卵、利用花粉和卵细胞的受精胞的受精过程程转化)化)叶绿体转化系统叶绿体转化系统(能直接表达原核基因)(能直接表达原核基因)第第38页页(三)外源基因导入植物受体方法(三)外源基因导入植物受体方法直接转化法直接转化法(略)(略)农杆菌介导转农杆菌介导转化法(化法(19741974年)年)基因枪法基因枪法(19871987年)年)植物病毒介植物病毒介导法导法细胞核移植细胞核移植第第39页页农杆菌介导基因转移:农杆菌介导基因转移:Tumor-inducing plasmid转移转移DNA(tran
16、sfer DNA,T-DNA)Ti plasmid:双链共价闭合:双链共价闭合环状环状DNA分子,约分子,约150200Kb根瘤农杆菌根瘤农杆菌(Agrobactertium)tumef-aciens)菌株)菌株中含有中含有Ti质粒,其特质粒,其特定部位与植物核内定部位与植物核内DNA组合来表示信息,组合来表示信息,使植物细胞肿瘤化。使植物细胞肿瘤化。即此质粒现有在细菌即此质粒现有在细菌中表示基因,又有在中表示基因,又有在高等植物中表示基因。高等植物中表示基因。第第40页页发根农发根农杆菌杆菌(Ri plasmidRi plasmidRi plasmidRi plasmid)发根农杆菌(发根农
17、杆菌(Agrobacterium rhizogenes):土壤细菌,能:土壤细菌,能侵染大多数双子叶植物和少数侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物单子叶植物 Ri质粒质粒(root-inducing plasmid):T-DNA区、区、Vir区两个功效区区两个功效区T-DNA区插入到寄主植物基因组中,区插入到寄主植物基因组中,表示决定发根生长和冠瘿碱合成基表示决定发根生长和冠瘿碱合成基因,冠瘿碱检测是评价植物转化是因,冠瘿碱检测是评价植物转化是否成功证据之一否成功证据之一 Vir区不插入寄主植物基因组区不插入寄主植物基因组DNA中,但与中,但与T-DNA转移相关,其缺失转移相关,其缺失或突变不
18、能使感染植物出现发根或突变不能使感染植物出现发根 LBRBviroriABGCDEopinecatabolismHairy root genesand opine synthaseT-DNARiRi质粒质粒第第41页页脓杆菌介导转基因过程脓杆菌介导转基因过程第第42页页TiTi质粒衍生克隆转化载体质粒衍生克隆转化载体TiTi质粒衍生克隆转化载体必须具备以下结构特点质粒衍生克隆转化载体必须具备以下结构特点1 1)含有选择标识基因)含有选择标识基因2 2)DNADNA复制起始位点复制起始位点3 3)T-DNAT-DNA右边缘序列右边缘序列4 4)单克隆位点)单克隆位点5 5)virvir区域,利用
19、双元载体系统和共整合载体系区域,利用双元载体系统和共整合载体系统处理。统处理。第第43页页共整合载体共整合载体和农杆菌和农杆菌质粒重组过程质粒重组过程第第44页页共共整合整合载体载体(Cointegration vector)第第45页页双元载体双元载体 标记基因标记基因 启动子启动子 外外源目基因源目基因 终止序列终止序列第第46页页双元载体(双元载体(1 1)第第47页页双元载体(双元载体(2 2)第第48页页农杆菌共培养侵染农杆菌共培养侵染诱导愈伤组织诱导愈伤组织分化生芽分化生芽生根生根叶盘转化法叶盘转化法叶盘法叶盘法叶盘法叶盘法 双子叶植物较为惯用、简单有效方法。双子叶植物较为惯用、简
20、单有效方法。双子叶植物较为惯用、简单有效方法。双子叶植物较为惯用、简单有效方法。第第49页页基因枪介导基因枪介导DNADNA转移法转移法 基因枪法(基因枪法(Gene Gene gunsguns)最早是由美国康奈尔)最早是由美国康奈尔大学大学SanfordSanford最先提出。它最先提出。它经过高速飞行金属颗粒将包经过高速飞行金属颗粒将包被其外目标基因直接导入到被其外目标基因直接导入到受体细胞内,从而实现基因受体细胞内,从而实现基因转化方法。转化方法。19921992年,世界首年,世界首例转基因小鼠就是经过该法例转基因小鼠就是经过该法取得。取得。第第50页页Gene Gun Gene gun
21、s and electric shocks transfer DNA into plant cells基因枪基因枪第第51页页第第52页页第第53页页决定基因枪使用成功原因决定基因枪使用成功原因第一原因是第一原因是动力系统动力系统。依据动力系统,基因枪分为三大类:依据动力系统,基因枪分为三大类:第一类是以火药爆炸力作为动力加速微弹;第一类是以火药爆炸力作为动力加速微弹;第二类是以电弧放电蒸发浪作为动力;第二类是以电弧放电蒸发浪作为动力;第三类是以高压气体作为动力。第三类是以高压气体作为动力。第二原因是第二原因是微弹制备过程微弹制备过程 。用微载体有两类:一是钨粉,另一个是金粉,直径用微载体有两
22、类:一是钨粉,另一个是金粉,直径普通为普通为0.6-4m0.6-4m。惯用将惯用将DNADNA包被到微载体上所用沉淀试剂有亚精胺、包被到微载体上所用沉淀试剂有亚精胺、氯化钙、乙醇、聚乙二醇、异丙醇等。氯化钙、乙醇、聚乙二醇、异丙醇等。第三个原因是第三个原因是受体材料选择受体材料选择。第第54页页microinjectioncell-to-cell infection植物病毒介导法植物病毒介导法(Viruses can be used as vectors for whole plants)第第55页页转基因植物筛选与检测转基因植物筛选与检测 汇报基因汇报基因(如:抗生素抗性、抗除草剂、显(如:
23、抗生素抗性、抗除草剂、显色或发光汇报基因等)色或发光汇报基因等)分子生物学方法分子生物学方法(ELISAELISA、PCRPCR、分子杂、分子杂交等)交等)第第56页页五、五、转基因风险转基因风险及安全控制及安全控制第第57页页转基因作物生产现实状况转基因作物生产现实状况 全球共有全球共有28个国家种植个国家种植转基因作物,种植面积到转基因作物,种植面积到达约达约1.7亿公顷。中国种植亿公顷。中国种植面积约面积约400万公顷,居世界万公顷,居世界第第6位,其中绝大部分是转位,其中绝大部分是转基因抗虫棉。基因抗虫棉。第第58页页 -世界主要国家转基因作物生产面积(百万公顷)中国排名第六第第59页
24、页转基因作物同意情况转基因作物同意情况(1996199619961996年至今)年至今)年至今)年至今)国家国家国家国家事件(个)事件(个)事件(个)事件(个)美国196日本182加拿大131墨西哥122澳大利亚92韩国86新西兰81欧盟67菲律宾64台湾地域52南非49作物作物国家国家事件事件玉米23121棉花1948马铃薯 1031油菜1230大豆2422第第60页页主要品种主要品种品种名称品种名称同意国家同意国家特征特征玉米NK60322国+欧盟27国 耐除草剂大豆GTS40-3-2 22国+欧盟27国 耐除草剂玉米MON81022国+欧盟27国 抗虫玉米Bt1120国+欧盟27国 抗虫
25、棉花MON53117国+欧盟27国 抗虫棉花MON1445 14国+欧盟27国 抗虫第第61页页美国已商业化主要美国已商业化主要转基因转基因作物作物 大规模商业化种植主要作物:大豆、玉米、油菜、棉花、南大规模商业化种植主要作物:大豆、玉米、油菜、棉花、南瓜、番木瓜、苜蓿等瓜、番木瓜、苜蓿等7 7种作物种作物 当前已同意种植或食用转基因作物当前已同意种植或食用转基因作物1818类,转化体超出类,转化体超出100100个,个,其中允许种植作物有其中允许种植作物有1414种,还未允许种植作物有剪股颖、甜瓜等。种,还未允许种植作物有剪股颖、甜瓜等。剪股颖(剪股颖(1个)个)甜菜(甜菜(3个)个)油菜(
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