生物物证常见技术省公共课一等奖全国赛课获奖课件.pptx
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1、第三章第三章 生物物证常见技术生物物证常见技术第一节第一节 电泳技术电泳技术第二节第二节 层析法层析法第三节第三节 比色分析技术比色分析技术第四节第四节 离心技术离心技术第五节第五节 显微镜技术显微镜技术第1页第一节第一节 电泳技术电泳技术电泳是指在电场中带电粒子向电泳是指在电场中带电粒子向电性相反方向发生位移现象。是蛋电性相反方向发生位移现象。是蛋白质、核酸分析判定主要技术之一。白质、核酸分析判定主要技术之一。第2页电泳原理电泳原理 在同一电泳条件下,不一样带电颗粒因其分子大小和带电量不一样含有不一样泳动速度。所以电泳一定时间,就能相互分开。第3页电泳分类电泳分类 v自由界面电泳:电泳能够直
2、接将样品放在缓冲液中进行。v区 带 电 泳:将样品放在固体支持物上进行电泳,因待测样品各组分泳动率不一样被分离成不一样区带。第4页区带电泳分类区带电泳分类v(一)据电场强度分:高压;常压;低压。v(二)据支持物种类分:滤纸;醋酸纤维薄膜;琼脂糖凝胶;聚丙烯酰胺凝胶。v(三)据支持物形状分:水平板;垂直板;柱状;圆盘;U形管;毛细管。v(四)据原理分:等速;免疫;等电聚焦。v(五)据方向分:单向;双向。v(六)据目分:分析;制备。v(七)据缓冲液pH分:连续pH;非连续pH。第5页电泳槽电泳槽电泳仪第6页第7页第8页电泳步骤电泳步骤v电泳普通操作程序包含支持物准备、加电泳普通操作程序包含支持物准
3、备、加样、电泳、固定、染色、脱色、定性观样、电泳、固定、染色、脱色、定性观察及定量测定等过程。察及定量测定等过程。请观看视频请观看视频第9页v1、高压电极槽与进样机构 2、填灌清洗机构 3、毛细管 4、检测器 5、铂丝电极 6、低压电极槽 7、恒温机构 8、统计/数据处理 第10页第11页第二节第二节 层析法层析法 全部层析系统都由两个相组成:一是固全部层析系统都由两个相组成:一是固定相,另一是流动相。当待分离混合物随流定相,另一是流动相。当待分离混合物随流动相经过固定相时,因为各组分理化性质存动相经过固定相时,因为各组分理化性质存在差异,与两相发生相互作用(吸附、溶解、在差异,与两相发生相互
4、作用(吸附、溶解、结合等)能力不一样,在两相中分配(含量结合等)能力不一样,在两相中分配(含量比)不一样,且随流动相向前移动,各组分比)不一样,且随流动相向前移动,各组分不停地在两相中进行再分配。分部搜集流出不停地在两相中进行再分配。分部搜集流出液,可得到样品中所含各单一组分,从而到液,可得到样品中所含各单一组分,从而到达将各组分分离目标。达将各组分分离目标。第12页第13页第14页层析操作层析操作第15页第16页第17页第18页第19页第20页第三节第三节比色技术比色技术v分光光度法是经过测定被测物质在分光光度法是经过测定被测物质在特定波优点或一定波长范围内光吸特定波优点或一定波长范围内光吸
5、光度或发光强度,对该物质进行定光度或发光强度,对该物质进行定性和定量分析方法。性和定量分析方法。第21页比色技术分类比色技术分类v光谱分析技术可分为发射光谱、吸收光谱和光谱分析技术可分为发射光谱、吸收光谱和散射光谱三大类。基于发射光谱分析方法有散射光谱三大类。基于发射光谱分析方法有火焰光度法、原子发射光谱法和荧光光谱法,火焰光度法、原子发射光谱法和荧光光谱法,基于吸收光谱分析方法有紫外基于吸收光谱分析方法有紫外-可见光分光可见光分光光度法,原子吸收分光光度法和红外光谱法;光度法,原子吸收分光光度法和红外光谱法;基于散射光谱分析方法有比浊法。基于散射光谱分析方法有比浊法。第22页vA=abcv式
6、中式中A为吸光度,为吸光度,b为溶液层厚度(为溶液层厚度(cm),),c为溶液浓度(为溶液浓度(g/dm3),a为吸光系数。为吸光系数。v当固定溶液层厚度当固定溶液层厚度l和吸光系数和吸光系数a时,吸光时,吸光度度A与溶液浓度成线性关系。与溶液浓度成线性关系。第23页比色仪器比色仪器v紫外分光光度计,可见分光光度计(或紫外分光光度计,可见分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。分光光度计。第24页722第25页第四节第四节离心技术离心技术v离心技术是试验室常采取技术,主要是离心技术是试验室常采取技术,主要是利用离心力将悬浮液中悬浮微粒快速沉
7、利用离心力将悬浮液中悬浮微粒快速沉降,借以分离比重不一样各种物质成份降,借以分离比重不一样各种物质成份方法。方法。第26页vF重力浮力重力浮力VPgVgVg(p)v式中式中:vF下沉力;下沉力;vV微粒体积;微粒体积;vP微粒密度;微粒密度;v介质密度;介质密度;vg重力加速度。重力加速度。v当当P时,微粒下沉;时,微粒下沉;P与与差值差值越大,微粒下沉速度越快。所以,加大离心越大,微粒下沉速度越快。所以,加大离心机转速可加紧离心微粒沉降速度机转速可加紧离心微粒沉降速度第27页离心机分类离心机分类v(一)依据转速 分类v1、常速离心机:转速少于 5000r/min,用于普通液体可沉淀颗粒分离,
8、或制备普通组织匀浆。v2、高速离心机:转速 5000-25000r/min,用于细胞器分离和生物大分子制备。v3、超速离心机:转速超出 25000-85000r/min,多用于亚细胞结构分离和生物大分子制备。v第28页v(二)依据温度 分类v1、常温离心机:室温(25 )下工作。常速离心时使用。v2、低温离心机:在 4 下工作。高速离心时使用。v3、冷冻离心机:在 0 25 工作。超速离心时使用。第29页v(三)依据体积大小和放置方式分类(三)依据体积大小和放置方式分类1 1、台式离心机:体积小,放在操作台上,、台式离心机:体积小,放在操作台上,用于微量物质提取。用于微量物质提取。2 2、落地
9、式离心机:体积大,放在地面上,、落地式离心机:体积大,放在地面上,用于大量物质提取。用于大量物质提取。第30页v(四)依据供能方式(四)依据供能方式 分类分类1 1、自动式离心机:设置程序后,电脑程、自动式离心机:设置程序后,电脑程序控制离心速度和时间。序控制离心速度和时间。2 2、电动式离心机:由操作者接通电源、电动式离心机:由操作者接通电源、利用旋钮控制离心速度和时间离心机。利用旋钮控制离心速度和时间离心机。3 3、手动式离心机:、手动式离心机:第31页第五节显微镜技术第32页一、创造一、创造 最早显微镜是16世纪末期在荷兰制造出来。创造者可能是札恰里亚斯詹森(眼镜商)或汉斯利珀希(科学家
10、),他们用两片透镜制作了简易显微镜,但并没有用于观察。第一个使用者是伽利略。第二个是荷兰商人安东尼凡列文虎克。1931年,恩斯特鲁斯卡研制了电子显微镜,1986年他被授予诺贝尔奖。第33页二、分类二、分类(一)(一)光学显微镜光学显微镜:通常皆由光学部分、照明部分和:通常皆由光学部分、照明部分和机械部分组成。当前光学显微镜主要有机械部分组成。当前光学显微镜主要有明视野显微明视野显微镜镜(普通光学显微镜)、(普通光学显微镜)、暗视野显微镜暗视野显微镜、荧光显微荧光显微镜镜、相差显微镜相差显微镜、激光扫描共聚焦显微镜激光扫描共聚焦显微镜、偏光显偏光显微镜微镜、微分干涉差显微镜微分干涉差显微镜、倒置
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