结肠癌患者血清miR-370-3p、ANO1表达变化及其临床意义.pdf
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1、山东医药2023 年第 63 卷第 31 期结肠癌患者血清miR-370-3p、ANO1表达变化及其临床意义张乐,李昊泽,刘凯东,白月奎北京市海淀医院普外科,北京100091摘要:目的探讨血清微小RNA-370-3p(miR-370-3p)、茴香胺1(ANO1)表达与结肠癌病理特征及术后复发的关系。方法选取94例接受腹腔镜手术治疗的结肠癌患者为结肠癌组、50例结肠息肉患者为良性病变组、50名健康体检者为对照组。用实时荧光定量PCR法检测各组血清miR-370-3p、ANO1表达。术后随访3年,复发31例(复发组)、未复发63例(未复发组)。在线网站TargetScan预测miR-370-3p与
2、ANO1的靶向关系,用Pearson相关法分析结肠癌患者血清miR-370-3p与ANO1 mRNA表达的相关性;多因素Logistic回归分析结肠癌患者术后复发的影响因素;用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-370-3p、ANO1 mRNA对结肠癌患者术后复发的预测价值。结果结肠癌组血清miR-370-3p表达低于良性病变组、对照组(P均0.05),ANO1 mRNA表达高于良性病变组、对照组(P均0.05)。在线网站TargetScan预测miR-370-3p与ANO1在649655和676682处有结合位点,结肠癌患者血清miR-370-3p与ANO1 mRNA中表达呈负相关(
3、r=-0.609,P0.05)。血清miR-370-3p、ANO1 mRNA表达在不同分化程度、TNM分期、侵犯浆膜、淋巴结转移结肠癌患者中差异有统计学意义(P均0.05)。TNM分期期、侵犯浆膜、淋巴结转移和ANO1 mRNA1.64为术后复发的独立危险因素,miR-370-3p0.74为独立保护因素(P均0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-370-3p、ANO1 mRNA联合预测结肠癌患者术后复发的曲线下面积(0.876)大于二者单独预测的曲线下面积(0.786、0.783),比较差异有统计学意义(P均0.05)。结论结肠癌患者血清miR-370-3p低表达、ANO1 mRNA高表
4、达,与肿瘤分化程度、TNM分期、侵犯浆膜、淋巴结转移和术后复发有关,二者联合预测结肠癌患者术后复发的价值较高。关键词:结肠癌;微小RNA-370-3p;茴香胺1;临床病理特征;复发doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2023.31.005 中图分类号:R735.3 文献标志码:A 文章编号:1002-266X(2023)31-0019-05Expression changes of serum miR-370-3p and ANO1 in colon cancer patients and the clinical significanceZHANG Le,LI Haoz
5、e,LIU Kaidong,BAI YuekuiDepartment of General Surgery,Beijing Haidian Hospital,Beijing 100091,ChinaAbstract:Objective To investigate the relationships between serum microRNA-370-3p(miR-370-3p)and anoctamin 1(ANO1)expression and the pathological characteristics of colon cancer and recurrence after la
6、paroscopic surgery.Methods Ninety-four cases of colon cancer patients undergoing laparoscopic surgery(the colon cancer group),50 cases of colon polyp patients(the benign lesion group),and 50 cases of healthy individuals(the control group)were selected.Real-time fluorescence quantitative polymerase c
7、hain reaction was used to detect serum miR-370-3p and ANO1 mRNA expression of each group.Patients were followed up for 3 years after laparoscopic surgery;there were 31 cases of recurrence(recurrence group)and 63 cases of non-recurrence(non recurrence group).Online website TargetScan was used to pred
8、ict the targeting relationship between miR-370-3p and ANO1,and Pearson correlation method was used to analyze the correlation between serum miR-370-3p and ANO1 mRNA expression in colon cancer patients.Multivariate Logistic regression analysis was used to analyze the influencing factors for postopera
9、tive recurrence in colon cancer patients after laparoscopic surgery.The value of serum miR-370-3p and ANO1 mRNA in predicting postoperative recurrence in colon cancer patients was ana基金项目:北京市外籍高层次人才资助计划项目(J202011)。第一作者简介:张乐(1983-),男,博士研究生,副主任医师,主要研究方向为减重手术,疝、胃食管反流的临床诊治。E-mail:通信作者简介:白月奎(1967-),男,博士研
10、究生,主任医师,主要研究方向为胃肠道肿瘤、普外科疾病的临床诊治。E-mail:开放科学(资源服务)标识码(OSID)19山东医药2023 年第 63 卷第 31 期lyzed using receiver operating characteristic(ROC)curves.Results The expression of serum miR-370-3p in the colon cancer group was lower than that in the benign lesion group and control group(both P0.05),and the express
11、ion of ANO1 mRNA was higher than that in the benign lesion group and control group(both P0.05).The online website TargetScan predicted that there were binding sites between miR-370-3p and ANO1 at 649-655 and 676-682,and there was a negative correlation between the expression of miR-370-3p and ANO1 m
12、RNA in the colon cancer patients(r=0.609,P0.05).There were significant differences in serum miR-370-3p and ANO1 mRNA expression levels among patients with different degrees of differentiation,TNM stage,plasma membrane invasion,and lymph node metastasis(all P0.05).TNM stage III-IV,plasma membrane inv
13、asion,lymph node metastasis,and ANO1 mRNA1.64 were independent risk factors for recurrence after laparoscopy,and miR-370-3p0.74 was an independent protective factor(all P0.05).ROC curve showed that the area under the curve of serum miR-370-3p combined with ANO1 mRNA(0.876)in predicting the recurrenc
14、e after laparoscopy in patients with colon cancer was greater than that of miR-370-3p and ANO1 mRNA alone(0.786,0.783)(both P0.05).Conclusion Serum miR-370-3p and ANO1 mRNA expression in colon cancer patients was associated with the degree of differentiation,TNM stage,plasma membrane invasion,lymph
15、node metastasis and post-laparoscopic recurrence,and the combined serum miR-370-3p and ANO1 mRNA expression was of high value in predicting post-laparoscopic recurrence in colon cancer patients.Key words:colon carcinoma;microRNA-370-3p;anoctamin 1;clinicopathologic features;recurrence近年来,结肠癌发病率较直肠癌有
16、增多趋势,尤其在4165岁人群中1-2。腹腔镜手术是治疗结肠癌的有效手段,但仍有部分患者术后复发,严重影响患者预后3。术后残留肿瘤细胞恶性进展是结肠癌复发的重要原因4。研究表明,微小RNA(miRNA)能 调 控 多 种 靶 基 因 参 与 结 肠 癌 发 生、发 展5。miR-370-3p是一种与肿瘤相关miRNA,其异常表达与结肠癌细胞增殖、分化、迁移和侵袭有关6。有研究证实,miR-370-3p与急性髓系白血病复发有关7。茴香胺1(ANO1)是一种钙激活氯通道蛋白,能通过激活多条信号通路促进结肠癌恶性进展8,且与非小细胞肺癌复发有关9。本研究探讨血清miR-370-3p、ANO1表达与结
17、肠癌临床病理特征及术后复发的关系,以期为改善患者预后提供参考。1 资料与方法 1.1临床资料选取2018年1月2019年12月本院收治的94例结肠癌患者为结肠癌组,均接受腹腔镜手术治疗,男55例、女39例;年龄4275(59.75 8.42)岁;肿瘤最大径5 cm 26例、5 cm 68例;肿瘤分化程度:低分化 41 例、中高分化 53 例;TNM 分期10:期25例、期16例、期42例、期13例;侵犯浆膜36例、淋巴结转移39例。纳入标准:经病理检查确诊为结肠癌,符合相关诊断标准10;初次确诊;具备腹腔镜术适应证(TNM分期期根治性切除手术、期局部根治性手术)11。排除标准:入院前已接受抗肿
18、瘤治疗患者;年龄0.05)。各组患者或家属知情同意,且签署知情同意书;本研究经医院伦理委员会批准。1.2血清miR-370-3p、ANO1表达检测采用实时荧光PCR法。收集结肠癌组术前和良性病变组、对照组体检时空腹静脉血3 mL,3 000 r/min离心10 min(半径10 cm),留取血清,TRIzol试剂盒(沈阳万类生物科技有限公司)提取血清总RNA,微量分光光度计(武汉艾维斯特科技有限公司)鉴定RNA浓度和纯度合格后,用逆转录试剂盒(广州东盛生物科技有限公司)合成cDNA。逆转录条件:37 1 h、80 5 s。用实时荧光定量试剂盒(南京诺唯赞生物科技股份有限公司)进行实时荧光定量聚
19、合酶链反应。反应体系 20 L:cDNA 1 L、上下游引物各 0.5 L、2TransStartTop Green qPCR SurperMix 10 L、无核酸酶水8.5 L;反应条件:95 90 s,95 30 s、63 30 s、72 15 s循环40次。分别以U6和GAPDH为内参,2-CT法计算血清miR-370-3p、ANO1相对表达量。miR-370-3p上游引物序列5-GCCTGCTGGGGT20山东医药2023 年第 63 卷第 31 期GGAACCTGGT-3,下游引物序列 5-GCAGGGTCCGAGGTATTC-3;U6上游引物序列5-CGCAAGGATGACACGC
20、AAAT-3,下游引物序列5-GCAGGGTCCGAGGTATTC-3;ANO1上游引物序列5-CAGGCGGTGCCTATGTCTCA-3,下 游 引 物 序 列 5-GCTCCTCCACTTGGTGGTTT-3;GAPDH 上 游 引 物 序 列5-GACCTGACCTGCCGTCTAG-3,下游引物序列5-AGGAGTGGGTGTCGCTGT-3。1.3术后复发统计及分组结肠癌患者入院后均参 考腹 腔 镜 结 直 肠 癌 根 治 术 操 作 指 南(2018版)11接受腹腔镜手术治疗,术后通过门诊复查或电话进行定期随访,以手术时间为起点随访3年(第1 年 3 个月/次,后 2 年 6 个
21、月/次),随访至复发或2022年12月。术后复发定义为术后出现新的肿瘤,包括腹腔、盆腔、淋巴结等局部复发和肝、脑、骨、肺等远处复发,经病理检查或增强CT、磁共振成像、超声等影像学检查确诊。随访3年,97例结肠癌患者复发31例(复发组)、未复发63例(未复发组)。1.4统计学方法采用SPSS28.0统计软件。符合正态分布的计量资料以-x s表示,两组比较采用t检验;在线网站TargetScan(https:/www.targetscan.org/vert_80/)预测 miR-370-3p 与 ANO1 的靶向关系;Pearson相关法分析结肠癌患者血清miR-370-3p与ANO1 mRNA表
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