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细菌芽孢染色.doc
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1、 . 姓名: 学号: 班级:12级生物基地4组别:周三第六大组时间:2013.10.18细菌芽孢染色一实验目的 1. 学习掌握芽孢染色法,了解芽孢的形态特征。 2. 巩固显微操作技术及无菌操作技术。 二实验原理 细菌芽孢染色的基本原理:芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构,也被称为内生孢子,通常呈圆形或椭圆形。细菌能否形成芽孢及芽孢的形状,着生位置、芽孢囊是否膨大等特征都是鉴定细菌的重要指标。与正常细胞或菌体相比,芽孢壁厚、透性低而不易着色,但是芽孢一旦着色就很难被脱色。利用这一特点,首先用着色能力较强的染料,如孔雀绿,在加热条件下进行染色时,此染料不仅可
2、以进入菌体,而且也可以进入芽孢,进入菌体的染料可经水洗脱色,而进入芽孢的染料则难以透出。再用对比度大的复染剂(如番红液)染色后,菌体染上复染剂颜色,而芽孢仍为原来的颜色,这样就可以将两者区别开来。 在不同细菌中,芽孢所处的位置不同,有的在中部,有的在偏端,有的在顶端。芽孢一般呈圆形、椭圆形、圆柱形。常见的细菌芽孢形态和着生位置如下图所示:三实验器材1、菌种:枯草芽孢杆菌,梭状芽孢杆菌,牛肉膏培养基。 2、溶液和试剂:a) 5%孔雀绿水溶液,0.5%番红水溶液,95%乙醇,蒸馏水等。b) 香柏油、二甲苯。 3、仪器及其它用品:普通光学显微镜、电子天平、擦镜纸、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿、锥形
3、瓶等。四操作步骤1. 实验流程图:涂片加热干燥固定孔雀绿覆盖微热5min冷却水洗番红复染水洗干燥镜检2. 详细步骤: a) 涂片,加热干燥及固定:在洁净盖玻片接近中部两处分别滴一滴无菌水,分别接种枯草芽孢杆菌及梭状芽孢杆菌。然后按照常规方法加热干燥及固定;b) 孔雀绿加热染色:用木夹夹住载玻片,向载玻片上滴加5%孔雀绿水溶液使之完全覆盖涂菌部位,然后在酒精灯上微微加热(孔雀绿着色能力强,加热可使较难染色的芽孢染成绿色,且再难洗脱)至染液冒蒸汽开始计时并维持5min,注意加热时应以有蒸汽微微冒出为宜,过热或加热不足均会影响观察效果,且加热时在载玻片上随时补加染液,切勿让涂片干涸; c) 水洗:水
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