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生物化学实验市公开课一等奖百校联赛特等奖课件.pptx
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1、生生 物物 化化 学学 实实 验验第1页第2页四、试验室规则1.穿工作服。2.严格按操作规程使用仪器设备。3.试验完成后,洗净所用器材。4.每次一个试验小组(轮番)做清洁卫生。第3页五、试验汇报书写实 验 名 称1.目要求 日期2.实验原理3.主要方法及仪器4.基本操作过程5.现象与绘图6.计算或结果7.意义8.注意事项9.讨论与小结10.思考题第4页试验一试验一 分光光度法分光光度法第5页一、实验目:一、实验目:l掌握掌握分光光度法概念、基本原理和应用;并经过分光光度法概念、基本原理和应用;并经过试验试验了解了解分光光度计操作方法和步骤以及分光光度计操作方法和步骤以及了解了解分分光光度计主要
2、组成部件与工作原理。光光度计主要组成部件与工作原理。第6页单色光与复色光单色光与复色光单色光单色光:仅含有某一波长光,由含有相同能量光子所组成。仅含有某一波长光,由含有相同能量光子所组成。复色光复色光:与上相反,各种人眼可见色光都属复色光。与上相反,各种人眼可见色光都属复色光。第7页射线射线x射射线线真空紫外真空紫外近紫外近紫外可见可见近红外近红外红外红外远红外远红外无线电波无线电波380760nm10m200380nm第8页二、分光光度法概念二、分光光度法概念l分分光光光光度度法法是是基基于于被被测测物物质质分分子子对对光光含含有有选选择择性性吸吸收收特特征征而而建建立立起起来来分分析析方方
3、法法(也也称为吸光光度法)。称为吸光光度法)。第9页l在在分分光光光光度度计计中中,将将不不一一样样波波长长光光连连续续照照射射到到一一定定浓浓度度样样品品溶溶液液时时,便便可可得得出出与与不不一一样样波波长长相相对对应应吸吸收收强强度度。如如以以波波长长()为为横横坐坐标标,吸吸收收强强度度(A)为为纵纵坐坐标标,就就可可绘绘出出该该物物质质吸吸收收光光谱谱曲曲线。利用该曲线能够进行物质定性、定量分析。线。利用该曲线能够进行物质定性、定量分析。第10页特点特点灵敏度高灵敏度高:测定下限可达:测定下限可达105106mol/L,10-4%10-5%准确度准确度能够满足微量组分测定要求:能够满足
4、微量组分测定要求:相对误差相对误差25(12)操作简便快速操作简便快速应用广泛应用广泛第11页三、三、分光光度法基本原理分光光度法基本原理第12页1.物质对光选择性吸收 吸收吸收(absorption):一一个个物物质质展展现现何何种种颜颜色色,是是与与入入射射光光组组成成和和物物质质本本身身结结构构相相关关。溶溶液液展展现现不不一一样样颜颜色色是是由由溶溶液液中中质质点点(离离子子或或分分子子)对对不不一一样样波波长长光光含含有有选选择择性性吸收而引发。吸收而引发。第13页 当依次将各种波长单色光经过某一有色溶液当依次将各种波长单色光经过某一有色溶液,测测量每一波长下有色溶液对该波长光吸收程
5、度量每一波长下有色溶液对该波长光吸收程度(吸吸光度光度A),然后以,然后以波长波长为横坐标,为横坐标,吸光度吸光度为纵坐为纵坐标作图,得到一条曲线,称为该溶液标作图,得到一条曲线,称为该溶液吸收光谱吸收光谱。吸收光谱吸收光谱第14页可见、紫外吸收光谱示意图可见、紫外吸收光谱示意图第15页 物质对不一样色光能有选择性吸收物质对不一样色光能有选择性吸收,即一定物即一定物质主要吸收一定波长光质主要吸收一定波长光(互补吸收互补吸收),是因为物质,是因为物质本身分子、原子都处于一定能级运动状态,当物本身分子、原子都处于一定能级运动状态,当物质吸收了光辐射能以后,会产生能级跃迁,产生质吸收了光辐射能以后,
6、会产生能级跃迁,产生吸收光谱。吸收光谱。吸收光谱产生吸收光谱产生第16页2.光吸收基本定律 依据吸收光谱特征和形状可作该物质判别、纯度依据吸收光谱特征和形状可作该物质判别、纯度检验和初步结构分析等。不过可见紫外吸收光检验和初步结构分析等。不过可见紫外吸收光谱主要应用在定量分析方面,其定量基础即为谱主要应用在定量分析方面,其定量基础即为Lamber-Beer定律,是说明吸光物质对单色光定律,是说明吸光物质对单色光吸收强弱与该物质浓度与厚度间关系定律。吸收强弱与该物质浓度与厚度间关系定律。第17页透光度透光度T(%)与吸光度与吸光度A第18页 透光度透光度 T(%)当一束平行单色光经过一浓度为当一
7、束平行单色光经过一浓度为C,液层厚,液层厚度为度为L溶液时,该溶液将对此入射光进行吸收,溶液时,该溶液将对此入射光进行吸收,使透过光强减弱。透光度则为入射前后光强使透过光强减弱。透光度则为入射前后光强比值。比值。CL入射光强透射光强I0ItT(%)ItI0第19页透光度与吸光度相互关系透光度与吸光度相互关系溶液透光度与吸光度呈负相关。溶液透光度与吸光度呈负相关。AlgI0ItlglgT1T吸光度吸光度A吸光度吸光度A是透光度负对数是透光度负对数第20页 1.Lamber定律定律吸光度与液层厚度关系吸光度与液层厚度关系 1760年,年,Lamber指出,当单色光经过浓指出,当单色光经过浓度一定、
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