肺炎链球菌的实验活动生物危害评估报告.doc

肺炎链球菌的实验活动生物危害评估报告

一、细菌的传播与致病
肺炎链球菌在自然界中分布广泛，常生活在正常人的鼻腔中，多数不致病或致病力很弱，少数致病力较强。
肺炎链球菌主要引起大叶性肺炎以及气管炎、中耳炎、脑膜炎、胸膜炎、心内膜炎、败血症等疾病。典型的大叶性肺炎起病急骤，病人有高烧、寒颤，开始时有阵发性干咳，不久有少量粘液痰，随后痰变黄色，呈粘脓性，一般病程1～2周。
二、细菌的生物学特性
肺炎链球菌 (S.pneumoniae)属链球菌科，链球菌属。为革兰氏阳性球菌，呈矛尖状，成双排列，标本或液体培养中可连成链状。有荚膜，无鞭毛，不形成芽胞。
本菌营养要求较高，需在含血液或血清的培养基中生长。兼性厌氧，C02 5-10%生长最好，且生成的菌落周围有草绿色溶血环。若于液体培养基中培养24h，呈均匀混浊，后期可因产生自溶而变得澄清。
该菌可分解多种糖类，产酸不产气。胆汁溶解试验阳性Optochin敏感试验阳性。其抗原结构包括：荚膜多糖抗原：多糖抗原，型特异性，共85型，Ⅰ~Ⅲ型引起大叶性肺炎；菌体种属特异性抗原为多糖抗原，存在于细胞壁，称C多糖。在钙离子存在时,C多糖可与正常人血清中称为C-反应蛋白(C reactive protein,CRP)的β球蛋白结合，发生沉淀。
该菌抵抗力较弱，加热56℃ ，20min即死亡。而且它对一般消毒剂敏感，对干燥抵抗力较强。
肺炎链球菌可能发生的变异有荚膜变异：即从有荚膜有毒力的光滑（S）型菌变异为失去荚膜毒力减低或消失的粗糙（R）型。

三、细菌的实验室检查
1、标本采集 包括痰、脓液、血液等标本。
2. 涂片染色镜检 革兰氏色染色呈阳性球菌，呈矛头状成双排列，坦面相邻，尖端向外。若标本可见大量炎性细胞同时存在时有重要的参考价值。
3、荚膜染色 阳性。
4、分离培养 常采用羊血平板，有助于其溶血特征的识别和进一步鉴定，而且初代分离应置5%~10%CO2的环境下培养。在血平板上，肺炎链球菌的菌落直径0.5~1.5mm，灰白色、半透明、表面光滑（有些菌株可表现为粘液状）扁平，周围环绕着草绿色溶血环。培养或放置24h以上的培养物还会由于肺炎链球菌的自溶作用而致菌落中央塌陷而边缘隆起，而呈脐窝状。
5、鉴定试验
①胆汁溶菌试验：本试验的原理基于胆盐能够通过活化肺炎链球菌的自溶酶而溶解肺炎链球菌，但不能溶解草绿色链球菌。常用的方法包括快速平板法和标准试管法。前者取一接种环2%去氧胆酸钠溶液加于血平板待鉴定菌的菌落上，置35℃孵育15~30min，菌落溶解消失为阳性。而后者则是在1ml待鉴定菌18~24h培养液中加入2滴10%去氧胆酸钠溶液，35℃孵育5-10min后鉴定菌管由混浊变为透明者为阳性。
②Optochin试验 用以与其他草绿色链球菌相鉴别。用接种环将单个待鉴定菌落均匀涂于血平板上，用含量为5μg的optochin纸片贴于接种区中央，35℃需氧培养过夜，抑菌圈 >18mm的为阳性。本菌为阳性。
6、小鼠毒力试验 若用有毒力的菌株接种小鼠，接种后12-36h，小鼠死亡。
四、细菌的防治
肺炎链球菌感染关键在于养成良好的卫生习惯，保持环境卫生。必要时对体弱儿童及老年人可用疫苗进行预防注射，如用细菌荚膜多糖制备的多糖疫苗进行预防，效果较好。

病人在发热期间，应卧床休息，吃容易消化的食物，多喝水。磺胺类药物、青霉素等对肺炎等疾病的治疗较为有效。
五、细菌的生物安全防护
根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定，人间传播的微生物名录（待颁布）肺炎链球菌属于三类，BSL-2。相关的防护事宜包括：
（1）操作要求
1、实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。
2、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。
3、所有的操作过程应尽量细心，避免产生和溅出气溶胶。
4、对于污染的锐器，必须时刻保持高度的警惕，包括针、注射器、玻片、加样器等。
5、注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器（即注射器和针头是一体的）。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。
6、打碎的器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在倒掉前，应按照相关的规定进行消毒。
7、所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。离开该系统进行消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关的法规。
8、溅出或偶然事件中，明显暴露于传染源时，要立即向实验室主任报告。进行适当的医学评估、观察、治疗，保留书面记录。

9、按日常程序、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。污染的设备在送去修理、维护前，要按照相关的规定消毒；在离开设施转移前，要按照相关的规定打包运输。
（2）安全设备
1、正确使用和保养生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其他合适的人员防护设施、或物理遏制装置。
2、确定可能形成传染性气溶胶或溅出物的实验过程，包括离心、研磨、匀浆、剧烈震荡或混匀、超声波破裂、开启装有传染源的容器、采集感染标本等。
3、涉及高浓度或大体积的传染源时，若选用密封转头或带安全罩的离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放实验室内离心。
4、当必须在生物安全柜外处理标本时，需采取面部保护措施（跟镜、口罩、面罩、或其他防溅装置），以免传染源或其他有害物溅或洒到面上。
5、在实验室内，必须使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非实验室区域时，防护服必须留在实验室内。防护服可以在实验室内处理，也可以在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。
6、可能接触潜在传染源、被污染的表面或设备时，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重复使用，不能用于接触“洁净”的表面（键盘、电话等），也不应当戴着到实验室外。要备有带滑石粉的乳胶手套。脱掉手套后，要洗手。