微电泳吗啡和纳洛酮对大鼠腹侧苍白球神经元自发放电活动的影响.pdf

222024,14(1)医师在线 第 14 卷 第 1 期论著微电泳吗啡和纳洛酮对大鼠腹侧苍白球神经元自发放电活动的影响罗绍钧，刘馥宁，杜悦嫣，贾媛媛*（沈阳医学院，沈阳 110034）【摘要】目的 通过微电泳法探讨吗啡和纳洛酮对大鼠腹侧苍白球（VP）神经元自发放电活动的影响。方法 采用微电泳的方法，对 30只大鼠 VP 神经元进行微电泳吗啡和纳洛酮，观察并记录 VP 神经元的自发放电情况。结果 吗啡增加 VP 神经元的放电频率，纳洛酮降低VP 神经元的放电频率（P 0.05）。在微电泳吗啡的基础上进行 130 Hz 高频电刺激伏隔核（NAc），大部分神经元出现抑制反应。结论 吗啡增加 VP 神经元的放电频率，纳洛酮降低 VP 神经元的放电频率；在微电泳吗啡的基础上高频电刺激 NAC，大多数 VP 神经元出现抑制反应，可为临床治疗药物成瘾提供实验依据。【关键词】微电泳；吗啡；纳洛酮；药物成瘾；腹侧苍白球Effect of microelectrophoresis of morphine and naloxone on the spontaneous firing activity of ventral globus pallidus neurons in ratsLUO Shao-jun,LIU Fu-ning,DU Yue-yan,et al.Shenyang Medical College,Shenyang 110034,China.【Abstract】Objective To investigate the effects of morphine and naloxone on the spontaneous firing activity of ventral globus pallidus(VP)neurons in rats by microelectrophoresis.Methods Microelectrophoresis of morphine and naloxone was performed on VP neurons of 30 rats,and the spontaneous discharge of VP neurons was observed and recorded.Results Morphine increased the discharge frequency of VP neurons,and naloxone decreased the discharge frequency of VP neurons(P0.05).The nucleus accumbens(NAc)was stimulated by 130 Hz high-frequency electrical stimulation based on microelectrophoretic morphine,and most neurons showed inhibitory response.Conclusion Morphine increased the discharge frequency of VP neurons,and naloxone decreased the discharge frequency of VP neurons.High frequency electrical stimulation of NAc was performed on the basis of morphine microelectrophoresis,and most VP neurons showed inhibition response,which could provide experimental basis for clinical treatment of drug addiction.【Key words】Microelectrophoresis;Morphine;Naloxone;Drug addiction;Ventral globus pallidus药物成瘾是指药物与机体相互作用所引起的一种精神状态，有时也包括身体状态，表现为一种强迫性连续或定期使用该药的行为和其他反应。目前认为，药物成瘾是由成瘾药物引起的一种慢性脑病1，主要可分为生理依赖和心理依赖两类，生理依赖性药物成瘾在国内外已有较好的解决方案，但对心理依赖性药物成瘾的治疗尚无彻底解决的方案。有研究表明，中脑边缘奖赏系统在阿片类药物成瘾中发挥重要作用2。腹侧苍白球（Ventral pallidum，VP）是中脑边缘奖赏系统中的重要位点3。其作为基底节结构，与边缘结构联系非常密切4，在药物依赖的形成机制中发挥重要作用，并直接或间接地参与中枢神经系统对运动功能和边缘认知的调节。本实验旨在通过微电泳吗啡和纳洛酮，以及高频电刺激伏隔核（Nucleus accumbens，NAc），微电泳吗啡的同时进行高频电刺激 NAc，观察 VP 神经元放电活动的影响，探讨 VP 在药物成瘾机制中的电生理作用及特点，为临床手术治疗药物依赖提供实验依据。1 材料和方法1.1 实验材料本实验采用成年雄性 SD 大鼠 30 只（由沈阳医学院实验动物中心提供），体重 220 250 g，分笼饲养，通风良好，自由饮食、饮水；自制多管玻璃微电极（电极尖端4 8 m，中心管电阻 5 10 M，外周管电阻 20 100 M）、含 1%滂胺天蓝（美国 Sigma 公司）的 3.0 mol/L 氯化钠（NaCl）溶液、盐酸吗啡注射液（东北制药集团沈阳第一制药有限公司，国药准字 H21022436，规格：1 ml 10 mg）、盐酸纳洛酮注射液（河北爱尔海泰制药有限公司，国药准字 H20093459，规格 10 ml 4 mg）。1.2 实验方法1.2.1 核团定位基金项目：2022年沈阳医学院大学生科研课题（20229047）*通信作者：贾媛媛，Email：232024,14(1)医师在线 第 14 卷 第 1 期论著根据 Paxion&Watson 大鼠脑图谱，确定 NAc、VP的位置。NAc：前囟后 2.2 mm，中线旁开 1.6 mm，硬膜下 6.6 mm；VP：前囟后 0.26 mm，中线旁开 2.2 2.8 mm，硬膜下 7.4 8.38 mm。用自制多管玻璃微电极（中心管内灌注含 1%滂胺天蓝的 3.0 mol/L NaCl 溶液）进行细胞外记录。外周管按需要分别灌注 NaCl、吗啡、纳洛酮等试剂，具体浓度及 pH值见表 1。1.2.2 实验步骤实验于 2020 年 9 月 2021 年 6 月进行。通过腹腔注射方式使用 20%氨基甲酸乙酯（沈阳化学试剂厂）对大鼠进行麻醉,把大鼠置于脑立体定位仪上，对其进行开颅手术，并拨除硬脑膜。实验中使用微电泳仪对 30 只大鼠微电泳吗啡、纳洛酮，电泳吗啡的电流为 20 nA、40 nA、60 nA，电泳纳洛酮的电流为 50 nA，滞流的电流为 5 10 nA，采用正电流泳入。将刺激电极（同心圆电极 NEX100，外径0.25 mm，直流输出阻抗 3 6 M）置于右侧 NAc 中，为避免刺激电极与记录电极发生冲撞，刺激电极由右向左倾斜 10。高频电刺激由 A320 隔离电刺激器产生，经同心圆电极输出，刺激参数：方波脉冲，频率 130 Hz，波宽 0.06 ms、刺激强度 0.4 mA，刺激时程 5 s。神经元放电用微电极放大器进行采集与滤波，采用 Spike 2 的生物信号进行数据处理，并记录实验结果。实验结束后，采用微电泳滂胺天蓝对VP进行染色标记。用多聚甲醛磷酸缓冲液（沈阳化学试剂厂）进行灌流，取出大鼠完整的脑组织，放入固定液中固定，并对脑组织进行冰冻切片、焦油紫（美国 Sigma 公司）染色。光镜下观察进行组织学鉴定，只对刺激和记录部位正确的数据进行统计学处理。1.2.3 观察指标观察 VP 神经元自发放电情况，微电泳吗啡、纳洛酮后 VP 神经元自发放电情况（自发放电效应和频率），高频电刺激 130 Hz 后 VP 神经元自发放电情况，微电泳吗啡的同时给予高频电刺激 130 Hz VP 神经元自发放电的情况。1.3 统计学方法应用 SPSS 19.0 统计软件进行数据处理，VP 神经元自发放电情况用 n（%）表示，VP神经元自发放电频率用（s）表示，并采用t检验对大鼠 VP 神经元给药前后的变化进行比较。以P 0.05 表示差异有统计学意义。2 结果2.1 VP 神经元自发放电情况本实验记录了 30 只大鼠共 150 个 VP 神经元自发放电活动，其自发放电频率较快，平均为（12.423.66）Hz。VP 神经元的自发放电包括规则放电、不规则放电、爆发式放电 3 种形式。大多数 VP 神经元为不规则放电，其次是规则放电，爆发式放电所占比例最小。详见表 2。2.2 微电泳吗啡和纳洛酮后 VP 神经元自发放电情况随机选取 40 个定位准确的 VP 神经元，观察微电泳吗啡 40 nA 后的神经元自发放电情况，结果发现放电效应分为兴奋、抑制和无反应 3 种，25 个（62.50%）VP 神经元出现兴奋反应。本实验同时观察了对 40 个 VP 神经元进行微电泳纳洛酮 50 nA 的自发放电情况，结果发现放电效应也分为兴奋、抑制和无反应 3 种，19 个（47.50%）VP 神经元出现抑制反应。详见表 3。观察 VP 神经元微电泳吗啡、纳洛酮后的自发放电频率发现，微电泳吗啡后，25 个（62.50%）VP 神经元出现兴奋反应，放电频率由（12.272.40）Hz增加到（16.633.56）Hz（P 0.05）；微电泳纳洛酮后，19 个（47.50%）VP神经元的反应被抑制，放电频率由（11.534.12）Hz 减少到（8.132.88）Hz（P 0.05）。详见表 4。2.3 130 Hz 高频电刺激后 VP 神经元自发放电情况微电泳吗啡 40 nA 和 60 nA 时，VP 神经元自发放电出现兴奋反应；微电泳纳洛酮 50 nA 时，VP 神经元自发放电出现抑制反应；130 Hz 高频电刺激 NAc 时，VP 神经元出现抑制反应。在给予吗啡 40 nA 的过程中对 NAc 进行表 1 实验试剂浓度及 pH 值试剂浓度（mol/L）pHNaCl3.007.0吗啡0.105.5纳洛酮0.206.0表 2 VP 神经元自发放电形式构成比 n（%），n=150放电形式神经元数规则42（28.00）不规则100（66.67）爆发式8（5.33）表 3 微电泳吗啡和纳洛酮对 VP 神经元的自发放电效应 n（%），n=40药物兴奋抑制无反应合计吗啡25（62.50）11（27.50）4（10.00）40（100.00）纳洛酮13（32.50）19（47.50）8（20.00）40（100.00）242024,14(1)医师在线 第 14 卷 第 1 期论著130 Hz 高频电刺激，发现大部分 VP 神经元在吗啡作用的基础上出现了抑制反应。见图 1。3 讨论吗啡是 19 世纪初科学家从阿片类药物中提取的一种生物碱，有良好的镇痛作用，目前临床上广泛应用于治疗各种疼痛，但过量使用吗啡可使患者产生强烈的欣快感，长期使用还会出现精神异常、认知障碍、行为失控等异常，并随着剂量的增加导致成瘾。生理依赖性药物成瘾可以通过药物替代疗法进行治疗，减轻戒断症状，对此，目前我国提出了“梯度戒毒方案”5：戒毒开始23 d使用美沙酮等纯阿片受体激动剂，之后的23 d使用丁丙诺啡等部分激动剂，再用诺非西丁、可乐定以及各种对症药物进行过渡，最后使用纳洛酮等阿片受体拮抗剂防止复发。通过上述方案基本上可以使患者达到生理脱毒的状态，但心理上的依赖仍然不容易消除，在特定环境、应急事件或药物引导下，可导致患者戒毒后屡次复吸。有的患者已戒断数年甚至数十年，但只要回到与成瘾药物相关的环境中或接触相关药物线索，就会产生生理心理的渴求反应6。药物成瘾是一种长久持续的复发性脑疾病7，主要表现为生理和精神上强迫性或持续性的药物渴求，或是要避免戒断药物带来的不适，同时表现出对药物使用的耐受性，停药后出现严重的戒断症状，导致长期甚至终身的身心依赖，使大脑对压力和负面情绪更加敏感，从而诱发抑郁和认知方面的功能障碍等。目前研究认为强化和奖赏是药物成瘾产生的基本机制8，成瘾物质的奖赏效应是机体强迫性用药和觅药行为的始动因素9。个体使用成瘾药物致使中脑边缘多巴胺系统的兴奋性递质增加，多巴胺释放增多，个体产生主观欣快感。这种欣快感强化了药物使用行为，将药物使用与正性奖赏形成连接，而中脑边缘多巴胺系统正是阿片类药物增强作用的主要调节部位，在把情绪转化为意向行为的过程中起着重要作用，NAc 通过其输出纤维表达增强作用，输出部位主要为VP、扣带回、黑质、下丘脑和丘脑。研究表明，VP 的传入纤维 70%是-氨基丁酸（-Aminobu tyric acid，GABA）能神经元投射10，NAc 产生的大量信息活动是通过VP等投射部位来表达的，VP 具有调节认知、运动的功能，其中还包括药物依赖中的奖赏效应11。阿片类药物是一类强效镇痛药，对于治疗手术或创伤后的急性中至重度疼痛效果较好，很多遭受难治性疼痛、长期疼痛的患者，疾病后期常使用阿片类药物减轻疼痛12，包括天然来源的阿片及从植物中提取的有效成分如吗啡、可待因等。吗啡耐受是指长期使用固定剂量的吗啡后，其镇痛作用逐渐减弱、甚至消失的现象，需要不断增加药物剂量才能达到同样的镇痛效果。不同给药途径、不同剂量以及不同给药时间都可能发生吗啡耐受。Martin 等13 发现了、三种阿片受体，吗啡耐受效应与 受体有关，受体与鸟苷酸结合蛋白（G 蛋白）偶联后激活兴奋性 Gs 蛋白，引起环磷酸腺苷（cAMP）浓度增加，对抗了吗啡的镇痛作用。纳洛酮为羟二氢吗啡酮衍生物，化学结构与吗啡类似，伴有激动作用，主要用于阿片类药物过量中毒或用于阿片药成瘾的诊断，在阿片类药物成瘾和复吸过程中有重要作用。纳洛酮是一种阿片类受体的特异性拮抗剂，对外源性和内源性阿片类药物均有特殊的拮抗作用，其通过竞争阿片受体（依次为、）而起作用；受体信号途径是治疗吗啡耐受及成瘾的药理学靶点，纳洛酮主要通过拮抗 受体，参与逆转阿片类药物的镇痛作用，鼻内纳洛酮给药可以迅速结合 受体，从而抑制与 受体相关的成瘾行为14。已有文献表明，受体存在于投射到 VP 的 NAc 神经元 GABA能传入纤维末梢上，而且 VP 的传入纤维主要是 NAc 的GABA 能神经元的投射纤维15。立体定向脑损毁术是指通过立体定向微创技术损毁脑内特定组织结构，从而治疗神经系统疾病的手术方表 4 微电泳吗啡和纳洛酮对 VP 神经元自发放电频率的影响（s，Hz，n=40）药物作用放电频率t值P值给药前给药后吗啡兴奋12.272.4016.633.566.4230.000抑制13.413.588.611.32-7.9560.000无反应11.121.2110.892.32-0.5560.580纳洛酮兴奋10.663.2315.525.684.7040.000抑制11.534.128.132.88-4.27780.000无反应13.724.0812.985.56-0.6790.450横线表示微电泳吗啡和纳洛酮给药和电刺激时间的长短图 1 微电泳吗啡和纳洛酮对 VP 神经元自发放电的影响252024,14(1)医师在线 第 14 卷 第 1 期论著法16，目前国内外以扣带回、NAc 等为靶点治疗药物成瘾。Gao 等17 进行立体定向损毁 NAc 手术后认为，双侧NAc 损毁术是治疗药物成瘾的安全方法。然而，尽管立体定向脑损毁手术对药物的心理依赖有显著的积极影响，但由于涉及伦理道德以及手术的探索性和不可逆性，可能会给成瘾者带来不可预测的后果，因此备受争议。有鉴于此，我国原卫生部于 2004 年 11 月停止脑科手术戒毒项目。20 世纪 80 年代末，脑深部电刺激术（Deep brain stimulation，DBS）逐步发展成熟，旨在将微电极嵌入大脑特定部位，通过外置脑刺激器调整电压、脉宽、刺激频率等参数，改善相应的疾病症状，是一些常见运动障碍疾病的有效治疗方法18，因其不需要破坏神经核团，同时还具有微损伤、可逆性、可调节和减少服药等优点，故已成为治疗神经外科功能性疾病的重要方法之一，DBS 在美国已经被批准用于治疗癫痫、强迫症和帕金森病等运动障碍。徐纪文等19 在前期立体定向射频损毁手术戒断阿片类药物成瘾的临床研究基础上，进行了国内外首例 DBS 戒断阿类片药物精神依赖手术，患者术后即停止吸毒，随访3 个月无复吸现象，未发现有记忆、智力、人格等方面的影响，这为 DBS 治疗吗啡等成瘾药物的心理依赖提供了参考依据。本实验结果显示，微电泳吗啡使大多数的 VP 神经元兴奋，微电泳纳洛酮则抑制了大多数 VP 神经元。Johnson 等20 实验证明，微电泳 GABA 的基础上给予吗啡，VP 的神经元放电增多。推测吗啡与投射到 VP 的NAc 神经元 GABA 能传入纤维末梢的阿片受体结合，减少了末梢 GABA 的释放，从而使 VP 神经元去抑制而放电增多。本实验结果还显示，高频电刺激 NAc 时，VP 神经元出现抑制反应；在给予吗啡的基础上对 NAc 进行高频电刺激，发现大部分 VP 神经元出现了抑制反应。推测高频电刺激 NAc 通过兴奋 NAc 神经元，使其投射到 VP 的神经纤维未梢释放 GABA 增多而抑制 VP 神经元，从而减轻吗啡成瘾大鼠的心理依赖。Martin 等21 实验结果显示，电刺激 NAc 使 VP 神经元的放电减少，与本实验结果相符。高频电刺激 NAc 可能是通过 GABA 能神经元的抑制作用来调节 VP 的异常活动，从而发挥对药物心理依赖的治疗作用。综上，微电泳吗啡可增加 VP 神经元的放电频率，微电泳纳洛酮则降低 VP 神经元的放电频率；在微电泳吗啡的基础上高频电刺激 NAc，大多数 VP 神经元出现抑制反应。这提示 VP 神经元有可能成为吗啡药物成瘾新的治疗靶点，为戒断吗啡和成瘾后复吸的治疗提供新的研究思路。参考文献1蔡惠燕,苗心,王鹏飞,等.长期戒断海洛因成瘾者冲动性相关脑区的结构及功能特征J.心理学报,2021,53(8):861-874.2郭慧明,王昆华.海洛因成瘾的遗传学研究进展J.生命科学研究,2021,25(4):310-317.3闰薇,朱维莉,陆林.腹侧苍白球向基底外侧杏仁核的投射参与可卡因复吸J.中国药物依赖性杂志,2014,23(4):320.4魏勇,廖帅雄.运动对药物成瘾的作用及调控机制研究J.现代预防医学,2022,49(5):935-940.5刘佳宁.药物依赖戒断者心理健康模型建构及运动干预的实证研究D.上海:上海体育学院,2021.6金龙,李强,王磊,等.美沙酮维持治疗的前海洛因成瘾者突显网络特征的静息态fMRI研究J.中国药物依赖性杂志,2021,30(2):123-128.7王玮,陈晶莹.tDCS对海洛因成瘾者慢性渴求及负性情绪的干预效果评价J.中国药物依赖性杂志,2021,30(6):424-427,434.8Oliveira LR,Santos BGD,de Mello Bastos JM,et al.Morphine administered post-trial can induce potent conditioned morphine effectsJ.Pharmacol Biochem Behav,2019,179:134-141.9严万森,刘苏姣,张冉冉,等.强迫性特征在药物成瘾行为中的易感性及其前额叶-反奖赏系统神经基础J.心理科学进展,2021,29(8):1345-1357.10刘冠英,史文静,宋良欢,等.前边缘皮质中谷氨酸受体在阿片类药物成瘾中的作用J.中国药物依赖性杂志,2019,28(4):249-253.11冯枫,徐杰,孙沛,等.盐酸纳曲酮联合曲唑酮在海洛因成瘾者脱毒后防复吸中的效果研究J.中国基层医药,2021,28(12):1820-1823.12边佳明,吴宁,李锦.吗啡诱导的大鼠条件性位置偏爱中关键脑区PEBP及ERK活性的变化J.中国药理学通报,2017,33(4):542-546.13Martin WR,Eades CG,Thompson JA,et al.The effects of morphine and nalorphine-like drugs in the nondependent and morphine-dependent chronic spinal dogJ.J pharmacol Exp Ther,1976,197(3):517-532.14卢志鹏,白洁.受体在吗啡成瘾及免疫抑制等疾病中的作用和机制J.中国药理学通报,2020,36(12):1636-1639.15Liu Z,Le Q,Lv Y,et al.A distinct D1-MSN subpopulation down-regulates dopamine to promote negative emotional stateJ.Cell Res,2022,32(2):139-156.16尹春宇,宗睿,潘隆盛,等.立体定向脑损毁术治疗帕金森病的研究进展J.解放军医学杂志,2021,46(9):946-953.262024,14(1)医师在线 第 14 卷 第 1 期论著17Gao G,Wang X,He S,et al.Clinical study for alleviating opiate drug psychological dependence by a method of ablating the nucleus accumbens with stereotactic surgeryJ.Sterotact Funct Neurosurg,2003,81(1-4):96-104.18蒋伟,郐国虎,刘魏华,等.双侧丘脑底核脑深部电刺激术治疗帕金森病的疗效分析J.中国临床神经外科杂志,2021,26(10):755-757.19徐纪文,王桂松,周洪语,等.深部脑刺激戒断阿片类药物精神依赖1例临床报道J.立体定向和功能性神经外科杂志,2005,18(3):140-144.20Johnson PI,Napier TC.Morphine modulation of GABA-and Glutamate-induced changes of ventral pallidal neuronal activityJ.Neuroscience,1997,77(1):187-197.21Martin TJ,Coller M,Co C,et al.Mu-Opioid Receptor Alkylation in the Ventral Pallidum and Ventral Tegmental Area,but not in the Nucleus Accumbens,Attenuates the Effects of Heroin on Cocaine Self-Administration in RatsJ.Neuropsychopharmacology,2008,33,1171-1178.CD36 在肝细胞癌组织中的表达及临床意义毛飞宇，吴巍，张立洪，陶立德，凌杰*（扬州大学附属医院普外科，江苏扬州 225012）【摘要】目的 探讨 CD36 在肝细胞癌组织中的表达情况及其临床意义。方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应技术分析来源于我院 69例肝细胞癌患者的癌组织及其癌旁组织样本中 CD36 的表达情况，并收集病例资料及随访信息，研究其与肝细胞癌患者临床病理特征及预后的相关性。结果 在癌组织中，CD36 的表达量为（0.7620.077），与癌旁组织中的表达量（0.4640.051）相比，明显处于较高水平（P0.001）；并与患者血清AFP水平（P=0.011）、CNLC分期（P=0.017）、病理分化等级（P=0.006）及是否合并有微血管侵犯（P=0.007）明显相关，但不受年龄、性别、肿瘤数量、肿瘤直径及乙型肝炎病毒感染等因素影响；CD36 低表达组及高表达组的 1、3 和 5 年总生存率分别为 83%、67.5%及 40.2%，75%、35.9%及 20.5%（2=4.74，P=0.029）；经多因素 Cox 回归分析发现，CD36 高表达量、血清 AFP 400 g/L、肿瘤分化程度高及合并微血管侵犯是影响肝细胞癌患者预后生存的独立危险因素。结论 CD36 在肝细胞癌组织中呈表达上调趋势，且与血清 AFP 水平、病理分化等级、CNLC 分期、是否合并微血管侵犯及预后生存密切相关，提示 CD36 在肝细胞癌的发生和预后中具有重要作用。【关键词】肝细胞癌；CD36 表达；总生存期；预后Expression and clinical significance of CD36 in hepatocellular carcinoma tissuesMAO Fei-yu,WU Wei,ZHANG Li-hong,et al.Department of General Surgery,Affiliated Hospital of Yangzhou University,Yangzhou 225012,China.【Abstract】Objective To analyze the expression and clinical value of CD36 in hepatocellular carcinoma(HCC).Methods The expression of CD36 in cancer tissues and adjacent tissues from 69 patients with HCC in our hospital was detected by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction.The case data and follow-up information were collected to study its correlation with clinicopathological characteristics and prognosis of patients with HCC.Results The relative expression level of CD36 in HCC was(0.7620.077),which was significantly higher than that in adjacent tissues(0.4640.051)(P 0.001).It was significantly correlated with the expression of AFP in serum(P=0.011),CNLC stage(P=0.017),pathological differentiation grade(P=0.006)and microvascular invasion(P=0.007),but not affected by age,gender,number of tumors,tumor diameter and hepatitis B virus status.The total survival rates of the 1,3 and 5 years of CD36 low expression group and high expression group were 83%,67.5%and 40.2%,75%,35.9%and 20.5%,respectively(2=4.74,P=0.029).Multivariate Cox regression analysis indicated that CD36 expression,AFP expression,tumor differentiation grade and microvascular invasion were independent risk factors affecting the prognosis and survival of patients with HCC.Conclusion The expression level of CD36 is up-regulated significantly in HCC tissues,and is significantly related to AFP expression level,pathological differentiation grade,CNLC stage,microvascular invasion and prognosis,suggesting that CD36 plays an important role in the occurrence and prognosis of hepatocellular carcinoma.【Key words】Hepatocellular Carcinoma;CD36 expression；Overall survival;Prognosis