基因综合项目工程试题.doc

基因工程试题A
一、名词解释（每题2分，共20分）
1、转染：

2、质粒不亲和性:

3、cDNA 文库:

4、RACE:

5、基因工程:

6、RT-PCR

7、插入失活:

8、S-D 序列:

9、穿梭质粒载体:

10、多克隆位点:

二、选取题（每题1分，共15分）
1（ ）基因工程操作三大基本元件是:(I 供体 II 受体 III 载体 IV 抗体 V 配体)
Ａ I + II + III
Ｂ I + III + IV
Ｃ II + III + IV
Ｄ II + IV + V
Ｅ III + IV + V
2（ ）基因工程单元操作顺序是
Ａ 增，转，检，切，接
Ｂ 切，接，转，增，检
Ｃ 接，转，增，检，切
Ｄ 检，切，接，增，转
Ｅ 切，接，增，转，检
3 ( )生物工程上游技术是
Ａ 基因工程及分离工程
Ｂ 基因工程及发酵工程
Ｃ 基因工程及酶工程
Ｄ 基因工程及细胞工程
Ｅ 基因工程及蛋白质工程
4 ( )下列对逆转录酶描述对的是：
A 依赖于RNADNA聚合酶或称为RNA指引DNA聚合酶
B 依赖于cDNADNA聚合酶或称为cDNA指引DNA聚合酶
C 依赖于DNADNA聚合酶或称为DNA指引DNA聚合酶
D 依赖于RNARNA聚合酶或称为rNA指引RNA聚合酶
5( )下列对限制性内切酶描述对的是
Ａ 限制性内切酶可辨认任一DNA序列
Ｂ 使用限制性内切酶时，有时可浮现星活性
Ｃ 限制性内切酶可辨认碱基数不超过5个
Ｄ 限制性内切酶切割碱基序列产生都是黏性末端
6 ( )T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其底物核心基团是
Ａ 2' -OH 和 5' -P
Ｂ 2' -OH 和 3' -P
Ｃ 3' -OH 和 2' -P
Ｄ 3' -OH 和 5' -P
Ｅ 5' -OH 和 3' -P
7 ( )下列关于连接反映论述，错误是
Ａ 连接反映最佳温度为 12—16℃
Ｂ 连接反映缓冲体系甘油浓度应低于 10%
Ｃ 连接反映缓冲体系 ATP 浓度不能高于 1mM
Ｄ 连接酶普通应过量 2-5 倍
Ｅ DTT 在反映中可加也可不加
8（ ）下列哪种克隆载体对外源DNA容载量最大?
A质粒
B黏粒
C酵母人工染色体(YAC)
Dλ噬菌体

9 （ ）载体功能是(I 运送外源基因高效进入受体细胞 II 为外源基因提供复制能力 III 为外源基因提供整合能力)
Ａ I
Ｂ I + II
Ｃ I + III
Ｄ II + III
Ｅ I + II + III
10 ( )考斯质粒（cosmid）是一种
Ａ 天然质粒载体
Ｂ 由 入-DNA cos 区与一质粒重组而成载体
Ｃ 能裂解受体细胞烈性载体
Ｄ 具备溶原性质载体
Ｅ 能在受体细胞内复制并包装载体
11( )下列关于基因描述，错误是
Ａ 蛋白质是基因表达唯一产物
Ｂ 基因是DNA链上具备编码功能片段
Ｃ 基因也可以是RNA
Ｄ 基因突变不一定导致其表达产物变化构造
12（ ）关于cDNA最对的提法是：
A 同mRNA互补单链DNA B 同mRNA互补双链DNA
C 以mRNA为模板合成双链DNA D以上都对的

13（ ）某一重组 DNA （ 6.2 kb ） 载体某些有两个 SmaI 酶切位点。用 SmaI 酶切后凝胶电泳上浮现四条长度不同带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上 SmaI 酶切位点共有
Ａ 5 个
Ｂ 4 个
Ｃ 3 个
Ｄ 2 个
14（ ） 同一种质粒DNA，以三种不同形式存在，电泳时，它们迁移速率是：
A OC DNA>SC DNP>LDNA B SC DNA>L DNA>OC DNA
C L DNA>OC DNA>SC DNA D SC DNA>OC DNA>L DNA

15（ ） cDNA 法获得目基因长处是
Ａ 成功率高
Ｂ 不含内含子
Ｃ 操作简便
Ｄ 表达产物可以分泌
Ｅ 能纠正密码子偏爱性
三、简答题（每题5分，共25分）
1、什么是包涵体？

2、PCR反映体系涉及哪些内容？基本反映过程是什么？

3、限制性核酸内切酶活性受哪些因素影响？

4、作为基因工程载体必要具备基本条件是什么？

5、基因工程诞生理论基本是什么？

四、阐述题（每题10分，共40分）
1简述载体构建普通过程

2大肠杆菌作为基因工程受体菌长处和缺陷是什么？

3如何有效地提高外源基因表达效率？

4试述3′RACE技术原理和办法

基因工程试题原则答案及评分原则A
一、选取题（每题1分，共15分）
1、A 2、A 3、A 4、A 5 、B 6 、D 7 、E 8 、C 9、E 10 、B
11 、A 12、C 13 、D 14 、B 15、B
二、名词解释（每题2分，共20分）
1、转染：专指感受态大肠杆菌细胞捕获和表达噬菌体DNA分子生命过程。
2、质粒不亲和性：在没有选取压力状况下，两种不同质粒不可以在同一宿主细胞系中稳定地共存现象。
3、cDNA文库：是指某生物某一发育时期所转录形成cDNA片段与某种载体连接而成克隆集合。
4、RACE：是一种通过PCR进行cDNA末端迅速克隆技术，是以mRNA为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到3，或5，端之间未知序列办法。
5、基因工程:在分子水平上进行遗传操作，指将一种或各种微生物基因或基因组提取出来，或人工合成基因，按着人们愿望，进行严密设计，通过体外加工重组，转移到另一种生物体细胞内，使之能在受体细胞遗传并获得新遗传性状技术。
6、RT-PCR:先用逆转录酶作用于mRNA，以寡聚dT为引物合成cDNA第一链，然后用已知一对引物，扩增嵌合分子，这种办法称为逆转录PCR
7、Insert inaction:即插入失活，基因工程载体上某些选取标记基因经常含某种或某几种限制性内切酶单一酶切位点，在该位点用相应限制性内切酶解决，并将外源DNA片段插入该位点，则插入外源DNA片段将破坏原有基因读码框，往往导致原有选取标记基因无法翻译表达，或虽然翻译表达，形成也是丧失了原有生物活性蛋白质，这一现象称为插入失活。。
8、S-D序列：在大肠杆菌mRNA核糖体结合位点上，具有一种转译起始密码子及同16S核糖体RNA 3，末端碱基互补序列，该序列最初由Shine 、Dalgarno发现，故日后命名为Shine—Dalgarno 序列，简称S-D序列。
9、穿梭质粒载体：指一类由人工构建具备两种不同复制起点选取标记，因而可在两种不同宿主细胞中存活和复制质粒载体。
10、MCS：指载体上人工合成具有紧密排列各种限制核酸内切酶酶切位点DNA片段。
三、简答题（共25分，每题5分）
1、什么是包涵体？
重组蛋白在胞内表达时，经常以不溶性蛋白汇集成晶状物形式存在，这种晶状体即包涵体。包涵体形成是外源蛋白高效表达时普遍现象，这是由于肽链折叠过程中某些折叠中间态发生了错误聚合，而不是形成成熟天然态或完全解链蛋白。
2、PCR反映体系涉及哪些内容？基本反映过程是什么？
PCR反映体系所规定条件：a、被分离目基因两条链各一端序列互相补 DNA引物（约20个碱基左右）。b、具备热稳定性酶如：TagDNA聚合酶。c、dNTP。d、作为模板目DNA序列，E 无菌水，F，缓冲液
PCR反映体系基本反映过程：预变性、变性、退火、延伸、复延伸。
3、限制性核酸内切酶活性受哪些因素影响？
⑴酶纯度。
⑵DNA样品纯度。
⑶DNA甲基化限度。
⑷酶切反映温度与时间。
⑸DNA分子构型。
⑹限制性核酸内切酶反映缓冲液。
4、作为基因工程载体必要具备基本条件是什么？
①能在宿主细胞内进行独立和稳定自我复制
②具备适当限制内切酶位点
③具备适当选取标记基因
5、基因工程诞生理论基本是什么？
是当代分子生物学领域理论上三大发现和技术上三大创造。
理论上三大发现：
①证明了DNA是遗传物质
②揭示了DNA分子双螺旋构造模型和半保存复制机理
③遗传密码破译和遗传信息传递方式拟定
技术上三大创造：
①限制核酸内切酶发现与DNA切割
②DNA连接酶发现与DNA片段连接
③基因工程载体研究与应用
四、问答题（每题10分，共40分）
1简述载体构建普通过程
A 目基因分析（1）ORF 分析（2）酶切位点分析
B 载体选取与分析（1）多克隆位点分析（2）抗性标记分析（3）启动子与其她筛选标记分析
C 连接体系与连接时间拟定
2大肠杆菌作为基因工程受体菌长处和缺陷是什么？
长处：大肠杆菌培养以便、操作简朴、成本低廉，基本生物学、分子遗传学等方面背景知识清晰，对其基因表达调控分子机理也比较理解，并且历经二十年基因工程实践，大肠杆菌已发展成为一种安全基因工程实验体系，有各种合用寄主菌株和载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。
缺陷：在普通状况下，细菌RNA聚合酶不能辨认真核启动子；许多真核基因蛋白质产物需要通过翻译后加工修饰，如对的折叠和组装，而细菌中普通并没有这样修饰机制，从而也许导致真核基因在大肠杆菌中翻译产物无法产生有活性蛋白；外源真核基因所表达蛋白质分子往往可以被细菌蛋白酶辨认，并被当做“异已分子”降解掉。
3如何有效地提高外源基因表达效率？
⑴提高启动子强度 ⑵缩短启动子同克隆基因间距离 ⑶高效翻译起始序列 ⑷高效转录终结区 ⑸提高质粒拷贝数及稳定性 ⑹用如下办法提高翻译水平：①调节SD序列与AUG间距离②用点突变办法变化某些碱基③增长mRNA稳定性 ⑺减轻细胞代谢负荷：①诱导表达②表达载体诱导复制 ⑻提高表达蛋白稳定性，防止其降解：①克隆一段原核序列，表达融合蛋白②采用某种突变菌株③表达分泌蛋白质
4试述3′RACE技术原理和办法
PCR用于扩增代表mRNA转录物某一单位点与其3′或5′末端之间区域某些cDNA称为迅速扩增cDNA末端技术。如果已敿目mRNA一片段链内短序列，据此或设计基因特异引物，用原先存在poly(A)尾（3′末端）或附加同聚尾（5′末端）互补序列做末端引物，就可以获得从未知末端直到已知区域某些cDNA序列。为获得3′末端cDNA克隆，mRNA反转录时需用杂合引物（QT）。QT由17个核苷酸长olig(dT)及特定35个核苷酸序列（QI-QO）构成，前者被命名为锚定引物。为获得5′末端某些cDNA克隆需用基因特异引物，产物第一链产物，可用末端脱氧核苷酸转移酶及dATP加poly(A)尾。通过QT引物和反转录使用上游基因特异引物生成第二链cDNA。