Th1_Th2平衡对寒凝血...神经生长因子及其受体的影响_翟凤婷.pdf
《Th1_Th2平衡对寒凝血...神经生长因子及其受体的影响_翟凤婷.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《Th1_Th2平衡对寒凝血...神经生长因子及其受体的影响_翟凤婷.pdf(6页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、世界中西医结合杂志 年第 卷第 期 ,.,.博士论坛:基金项目:山东省自然科学基金资助项目();山东省中医药科技项目()作者单位:山东中医药大学附属医院,山东 济南;山东中医药大学,山东 济南 通信作者:王东梅,:平衡对寒凝血瘀证原发性痛经大鼠神经生长因子及其受体的影响翟凤婷 王东梅 王丹丹 杨洁 曹卫平【摘要】目的 探究 型辅助性 细胞 型辅助性 细胞(,)平衡偏移对寒凝血瘀证原发性痛经(,)大鼠子宫组织神经生长因子(,)及其受体的影响,进一步揭示 的发病机制。方法将 只雌性大鼠,按随机数字表法分为空白组、模型组、偏移组、偏移组,每组各 只。建立寒凝血瘀证 大鼠模型,在此模型基础上建立 偏移
2、 模型及 偏移 模型。比较各组大鼠扭体反应,检测各组大鼠子宫组织中神经生长因子(,)、酪氨酸激酶受体(,)及 营养因子受体(,)蛋白含量及 转录水平。结果 扭体潜伏时间:与模型组比较,偏移组和 偏移组,差异无统计学意义();偏移组较 偏移组缩短,差异有统计学意义()。内扭体次数:与模型组比较,偏移组明显减少,差异有统计学意义(),偏移组明显增加,差异有统计学意义()。与空白组比较,模型组大鼠、及 蛋白表达及 水平均升高,差异有统计学意义(,);与模型组比较,偏移组、蛋白表达及 水平降低,差异有统计学意义(,),水平降低,差异有统计学意义();偏移组、及 蛋白表达及 水平均升高,差异有统计学意义
3、(,)。结论 细胞平衡干预 及其受体表达可能是寒凝血瘀证 的发病机制之一。【关键词】原发性痛经;寒凝血瘀证;神经生长因子;酪氨酸激酶受体;营养因子受体【中图分类号】【文献标识码】,(,;,)【】()()(),(),(),(),(),(),(),(,),(,)();,(,)世界中西医结合杂志 年第 卷第 期 ,.,.【】;原发性痛经(,)是指行经前后或月经期出现下腹部疼痛、坠胀,常伴腰酸、恶心、呕吐、腹泻、出汗、疲劳和睡眠障碍等全身症状,而经妇科检查无生殖器官器质性病变的疾病,持续时间一般不超过 ,是最常见的妇科疼痛性疾病。好发于月经初潮后 年的青春期少女或尚未生育的年轻妇女。流行病学调查显示,
4、不同国家 的发病率在 之间,国内 的发病率在 之间,其中中度占,重度占 ,严重影响女性正常的学习与工作,降低生活质量。的发病机制存在多种学说,但多数学者认为 的发病与前列腺素(,)有关。既往研究,证实,寒凝血瘀证 大鼠模型中前列腺素(,)升高,前列腺素(,)降低,同时存在 型辅助性 细胞(,)和 型辅助性 细胞(,)的偏移,说明 平衡偏移参与了寒凝血瘀证 的发生。神经生长因子(,)由传入神经支持细胞产生,对感觉神经元的生长、发育来说是不可或缺的,是导致疼痛敏感化的重要介质之一。等通过研究证实,在兔的子宫组织中,及其受体能够促进 的产生,其机制可能与其调控一氧化氮合酶(,)有关。生理状态下,、处
5、于平衡状态,共同维持 表达处于正常水平,当、任何一方表达异常时,均可导致 表达异常。分泌的白细胞介素 (,)等细胞因子能诱导 的合成与分泌,而 分泌的细胞因子 干扰素(,)能拮抗这种作用。有研究认为 对 本身的表达并无明显影响,但可通过其分泌的白细胞介素(,)增强 受体酪氨酸激酶受体(,)的表达,从而放大 的生物效应。因此,进一步研究 平衡偏移对 影响的具体作用机制可能成为寻找治疗 有效方法的突破口。流行病学调查研究显示,寒凝血瘀证在 的中医证型分布中所占比例最高,因此,本研究以寒凝血瘀证 大鼠研究对象,为通过建立寒凝血瘀证 大鼠模型和、偏移 大鼠模型,法、法检测各组大鼠 及其受体水平,探讨
6、调控 表达在寒凝血瘀证 发病中的作用。材料与方法 材 料 动物及饲养条件 周龄、未交配、体质量 雌性 大 鼠 只,动 物 合 格 证 号:(鲁),购于济南朋悦实验动物繁育有限公司,饲养于山东中医药大学附属医院动物实验中心,室温保持 ,相对湿度约 ,日光灯明暗各 模拟昼夜交替。本研究经山东中医药大学附属医院动物伦理委员会审核批准(审批号:)。药 物苯甲酸雌二醇注射液(宁波第二激素厂,规格:支,生产批号:);缩宫素注射液(马鞍山丰原制药有限公司,规格:支,生产批号:);细胞因子 (,规格:包,生产批号:);细胞因子 (,规格:包,生产批号:)。试 剂大鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒(,)、()(,)、
7、(,)、(,)、(,)、(,)、(,),、(北京博奥森生物技术有限公司)。仪 器 型流式细胞仪(美国 公司),型酶标仪(芬兰 公司)。方 法 分组与造模方法世界中西医结合杂志 年第 卷第 期 ,.,.实验大鼠进行 周的适应性饲养,采用按随机数字表法将其分为空白对照组、模型对照组、偏移组和 偏移组,每组各 只,分别用苦味酸标记。寒凝血瘀证 大鼠模型:采用寒冷刺激联合苯甲酸雌二醇以及缩宫素建立。具体方法参照本课题 组 前 期 研 究 造 模 方 法。偏 移 组 模型:自寒凝血瘀证 大鼠造模第 天起,腹腔注射 (),次,次,连续;空白组及模型组大鼠同时间腹腔注射生理盐水,次,次,连 续 。偏 移 组
8、 模型:自寒凝血瘀证 大鼠造模第 天起,腹腔注射 (),次,次,连续。寒凝血瘀证造模验证指标:寒战,蜷缩少动,喜扎堆,呼吸弱,弓背竖毛,爪尾部紫暗,耳色暗红,毛色枯槁,舌质紫暗,舌下脉络增粗增长,粪质不成形。痛经造模验证指标:观察大鼠扭体反应,即大鼠腹部收缩内凹,躯干与后肢伸展,臀部与一侧肢体内旋。、偏移造模验证指标:流式细胞术分别检测各组大鼠脾脏 细胞及 细胞比例,以 细胞比值作为、平衡偏移验证造模指标。取材方法末次给药 后,腹腔注射 水合氯醛 麻醉。肉眼观察大鼠脾脏及子宫组织,摘取大鼠脾脏及子宫组织。观察指标 扭体反应注射缩宫素后,观察各组大鼠扭体反应潜伏时间及 内扭体次数。流式细胞术法检
9、测各组大鼠脾脏 细胞、细胞比例取大鼠脾脏组织块称重后剪成小块,获取脾脏组织研磨液,离心 ,弃上清。样本稀释液调整细胞浓度为 ,加入淋巴细胞分离液获取淋巴细胞,以 细胞培养液调整淋巴细胞浓度为 ,每毫升细胞悬液中加入 ()。将细胞置于 的二氧化碳培养箱中培养,收集活化细胞。加入外标抗体 ,避光放置 。分别用固定液、穿膜液处理后将细胞重悬于 穿膜液中,加入内标抗体 和 ,避光。加入 穿膜液,以离心半径 ,转速离心 ,弃上清,清洗。加 重悬细胞。转管,上机检测。法检测大鼠子宫组织中、营养因子受体(,)蛋白含量取大鼠子宫组织约 ,剪成小块后置于研钵中,加入 及 ,随后加入少量液氮,将其研磨至匀浆状态,
10、冰浴后以离心半径 ,转速离心 ,取上清,即为总蛋白溶液,用 蛋白定量测定法对蛋白总浓度进行测定。电泳、湿法转膜、封闭 ,稀释一抗()孵育过夜。洗 遍,将膜放入稀释的二抗()中,孵育 。用、配制显影液,并将膜浸泡至其中。软件分析灰度值。法检测大鼠子宫组织中、表达水平取大鼠子宫组织 剪成小块,提取子宫组织中总,逆转录为;取 管,配制如下反应体系为 ,基因引物 ,反转录产物 ,双蒸水,每个配制 管;温度预变性,同温变性 ,温度退火 ,温度延伸 ,重复 个循环。法分析数据。引物由武汉赛维尔生物科技有限公司合成。结果见表。表 引物序列信息表引物名称引物序列片段长度上游 下游 上游 下游 上游 下游 上游
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- Th1_Th2 平衡 凝血 神经 生长因子 及其 受体 影响 翟凤婷
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。