大豆皂甙对杂交黄颡鱼生长、免疫及肠道健康的影响_王岳松.pdf
《大豆皂甙对杂交黄颡鱼生长、免疫及肠道健康的影响_王岳松.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《大豆皂甙对杂交黄颡鱼生长、免疫及肠道健康的影响_王岳松.pdf(10页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、doi:10.7541/2023.2022.0414大豆皂甙对杂交黄颡鱼生长、免疫及肠道健康的影响王岳松1 李 鸿2 矣林圆1 刘婧文1 沈志刚1 杨慧君1 袁勇超1(1.华中农业大学水产学院,农业农村部淡水生物繁育重点实验室,武汉 430070;2.湖南省水产科学研究所,长沙 410153)摘要:为探究大豆皂甙对杂交黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidracoPelteobagrus vachelli)生长、免疫及肠道健康的影响,在鱼粉、虾粉及玉米浓缩蛋白为蛋白源的基础饲料中分别添加0、0.20%、0.40%、0.80%、1.60%和4.00%的大豆皂甙,配制成6种等氮等脂的饲料饲
2、喂初始质量为(1.00.17)g的杂交黄颡鱼,分别记为D0、D0.2、D0.4、D0.8、D1.6和D4.0等处理组,每组设3个重复,每个重复30尾鱼。60d饲养试验结束后测定生长指标、体组成、血清免疫、抗氧化酶活性和肠道炎症因子表达量等变化。结果显示:(1)与D0组相比,添加大豆皂甙的处理组增重率和特定生长率均显著性降低(P0.05),饲料系数显著性升高(P0.05)。试验鱼体蛋白含量和肌肉脂肪含量先降低后升高,体脂含量和肌肉蛋白含量先上升后下降。(2)随着饲料皂甙水平的提高,血清T-AOC持续降低,AKP、NO和CAT活性先升高后降低,ACP活性先降低后升高。(3)D0.8、D1.6和D4
3、.0组试验鱼肝脏ACP活性显著高于其他组(P0.05);D0和D4.0组试验鱼肝脏CAT活性显著低于其他组(P0.05);肝脏T-AOC活性表现出先升高后降低的趋势;肝脏MDA含量随皂甙水平升高逐渐降低,添加皂甙的处理组均显著低于D0组(P0.05);肝脏T-SOD表现出先降低后升高的趋势。(4)随着日粮皂甙水平的不断提高,远端肠道TGF-和IL-10 mRNA表达不断下调,IL-1、IL-8、IL-15和TNF-mRNA表达先上调后下调。综上所述,在饲料中添加一定水平的大豆皂甙对杂交黄颡鱼的生长性能、免疫及抗氧化能力和肠道健康产生了明显的负面影响,当大豆皂甙水平超过0.40%后,杂交黄颡鱼生
4、长和免疫均受到抑制,出现了典型的肠炎现象。因此在黄颡鱼商业养殖中选择饲料需要控制皂甙含量不超过0.40%。关键词:大豆皂甙;生长;免疫;肠道健康;杂交黄颡鱼中图分类号:S965.1 文献标识码:A 文章编号:1000-3207(2023)09-1386-10 蛋白质是水产动物生长过程中所需的重要营养与能源物质1,而鱼粉产量日益下降2,大豆蛋白成为鱼粉的主要替代原料之一。豆粕是大豆提取豆油后得到的一种副产品,价格低廉,蛋白质含量高3,不过相较于鱼粉,豆粕中存在的抗营养因子会给鱼类带来危害,降低生长性能46,是影响大豆蛋白高效利用的主要原因。大豆蛋白源主要含有大豆抗原蛋白、大豆皂甙、植物凝集素、低
5、聚糖和蛋白酶抑制因子等抗营养因子7。目前生产上已经可以运用热处理、生物发酵和膨化处理等技术大幅度降低各类抗营养因子含量,而大豆皂甙热稳定性好,有效的祛除方法为乙醇抽提,成本较高,不易达成。不经处理的豆粕中大豆皂甙占1.9%2.5%8,会使鱼类肠道黏膜上皮细胞渗透性增强,影响其肠道上皮细胞功能的正常发挥,阻碍物质运输9,从而导致被动摄取抗原类物质10,可引起牙鲆(Paralich-thys olivaceus)11、大西洋鲑(Salmo salar)12、大菱鲆(Scophthalmus maximus)13、虹鳟(Oncorhynchusmykiss)14、黄鳝(Monopterus albu
6、s)15和异育银鲫(Carassius auratus gibelio)16等鱼类出现肠炎病。黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)是我国一种优质的淡水养殖品种,其肉质鲜美,且无肌间刺,深受消费者的好评。杂交黄颡鱼新品种“黄优1号”(Pel-teobagrus fulvidracoPelteobagrus vachelli)是本团队历经多年培育而出,相比于普通黄颡鱼苗种,“黄优一号”成活率更高、生长更快、耐低氧能力第 47 卷 第 9 期水 生 生 物 学 报Vol.47,No.9 2023 年 9 月ACTA HYDROBIOLOGICA SINICAS e p.,2 0
7、2 3 收稿日期:2022-10-11;修订日期:2023-01-03基金项目:国家自然科学基金面上项目(32273167);湖北省大学生创新创业训练计划(S202210504191)资助 Supported by the NationalNatural Science Foundation of China(32273167);Provincial Innovation and Entrepreneurship Training Program for Undergraduate(S202210504191)作者简介:王岳松(1998),男,硕士研究生;研究方向为名特优水产种苗繁育与健康养殖
8、。E-mail:通信作者:袁勇超,E-mail:更强17,逐渐成为养殖行业普遍接受的黄颡鱼品种之一,但其相关营养研究目前较少。本研究旨在探究饲料中不同水平的大豆皂甙对杂交黄颡鱼生长、免疫及抗氧化性能和肠道健康的影响,研究其抗营养性,为豆粕在杂交黄颡鱼饲料中的应用提供理论依据。1 1 材料与方法 1.11.1 试验饲料饲料以鱼粉、虾粉和玉米浓缩蛋白为蛋白质源,麦麸粉作为碳水化合物来源,鱼油作为脂肪源来源制备基础饲料。在不同组别饲料中分别添加0、0.20%、0.40%、0.80%、1.60%和4.00%的大豆皂甙(纯度80%),记为D0、D0.2、D0.4、D0.8、D1.6和D4.0等处理组。所
9、有原料过60目筛,按照逐级预混原则将维生素和矿物质预混料与鱼粉等原材料混合在一起。加入鱼油后混合均匀,油状颗粒物手工搓散,添加适量蒸馏水混匀,倒入制粒机中制成粒径为2 mm的小颗粒。经过65烘箱烘干,称得初始重量,于20下保存。饲料配方及营养组成见表 1。1.21.2 养殖试验实验鱼为湖北黄优源渔业发展有限公司提供的杂交黄颡鱼“黄优1号”(Pelteobagrus fulvidracoPelteobagrus vachelli)苗种,养殖于华中农业大学水产学院实验基地室内循环养殖系统。驯养14d后,选取体格健康,无畸形、平均体重约为1 g的幼鱼540尾,随机投放于18个实验缸中,每个实验缸30
10、尾。日投喂量为鱼体重的2.0%5.0%,具体投喂量根据摄食情况、气温及天气情况调整,每天投喂两次,投喂时间分别为08:00和18:00。每次投饵2h后清理食物残渣和粪便,将未摄食完的饲料烘干至恒重,用于记录饲料消耗量,在实验过程中记录试验鱼存活情况,有试验鱼死亡及时捞出,养殖试验周期为60d。1.31.3 样品采集在养殖试验结束后,停食24h,用MS-222麻醉。称取每条黄颡鱼体重,每个平行取3条10 g左右实验鱼测量体长,称量内脏团、肝脏和肠系膜脂肪。每个平行取15尾实验鱼从尾静脉处取血液,表 1 饲料配方及营养组成(%干物质)Tab.1 Formulation and proximate
11、composition of the experimental diets(%dry matter)成分Ingredient不同饲料皂甙含量的处理组Different dietary soyasaponins treectments(%)D0D0.2D0.4D0.8D1.6D4.0白鱼粉White fish meal35.0035.0035.0035.0035.0035.00虾壳粉Shrimp shell meal18.0018.0018.0018.0018.0018.00玉米浓缩蛋白Corn gluten meal15.0015.0015.0015.0015.0015.00鱼油Fish oi
12、l4.004.004.004.004.004.00麦麸粉Wheat bran powder19.3019.1018.9018.5017.7015.30大豆皂甙Soyasaponins0.000.200.400.801.604.00维生素预混物Vitamin premix12.002.002.002.002.002.00矿物质预混物Mineral premix22.002.002.002.002.002.00磷酸二氢钙Ca(H2PO4)20.500.500.500.500.500.50食盐Sodium chloride1.001.001.001.001.001.00羟甲基纤维素钠CMC3.003
13、.003.003.003.003.00甜菜碱Betaine0.200.200.200.200.200.20营养水平Nutrient level粗脂肪Crude lipid6.736.606.856.486.276.13粗蛋白Crude protein41.4841.5540.9040.8640.2140.19灰分Ash11.9512.1812.0311.7812.0411.86注:1维生素预混料(mg或g/kg):维生素B1,15 g;维生素B2,25 g;维生素B6,20 g;维生素B12,50 mg;纤维糖,180 g;维生素B3,30 g;维生素B5,40 g;叶酸,5 g;维生素B7,
14、1 mg;维生素A,5 million IU;维生素D3,3 million IU;维生素K3,10 g;维生素C,150 g;维生素E,60 g;纤维素,415 g;2矿物质预混料(g/kg):NaF,1.5 g;KI,2.5 g;CoCl26H2O,0.1 g;CuSO45H2O,10 g;FeSO47H2O,40 g;ZnSO47H2O,6.0 g;MnSO4H2O,2 g;MgSO47H2O,25 g;Ca(H2PO4)2H2O,12.5 g;NaCl,2.5 g;CaCO3,27.8 g;沸石粉,870.1 gNote:1The vitamin premix(mg or g/kg):
15、Vitamin B1,15 g;Vitamin B2,25 g;Vitamin B6,20 g;Vitamin B12,50 mg;Inositol,180 g;Vitamin B3,30 g;Vitamin B5,40 g;Folic acid,5 g;Vitamin B7,1 mg;Vitamin A,5 million IU;Vitamin D3,3 million IU;Vitamin K3,10 g;Vitamin C,150 g;Vitamin E,60 g;Cellulose,415 g;2The mineral premix(g/kg):NaF,1.5 g;KI,2.5 g;C
16、oCl26H2O,0.1 g;CuSO45H2O,10 g;FeSO47H2O,40 g;ZnSO47H2O,6.0 g;MnSO4H2O,2 g;MgSO47H2O,25 g;Ca(H2PO4)2H2O,12.5 g;NaCl,2.5 g;CaCO3,27.8 g;Zeolite powder,870.1 g9 期王岳松等:大豆皂甙对杂交黄颡鱼生长、免疫及肠道健康的影响13873500 r/min,4恒温离心取上清液,用于测定血清酶活性;用医用剪刀剪开腹腔,暴露肝脏,用镊子取出肝脏,用生理盐水冲洗,用滤纸吸去多余水分称重;每个平行取5尾鱼,取远端肠道(肠道“U”形底部,约中间1/3段),用于
17、实时荧光定量PCR(qPCR);每个平行留存约50 g全鱼样品,采集约35 g肌肉,用于营养成分测定;以上所得样品置于80条件下保存。1.41.4 生长指标计算存活率(SR,%)=100末期鱼存活数/初期鱼存活数增重率(WGR,%)=100(末期鱼体重初期鱼体重)/初期鱼体重特定生长率(SGR,%/d)=100(ln末期鱼体重ln初期鱼体重)/实验周期饲料系数(FCR)=100摄食量/(末期鱼体重初期鱼体重)肠系膜脂肪指数(MFI100肠系膜脂肪重/末期鱼体重肝体比(HSI)=100肝脏重/末期鱼体重脏体比(VSI)=100内脏重/末期鱼体重肥满度(CF,g/cm3)=100末期鱼体重/末期鱼
18、体长3 1.51.5 常规营养成分的测定通过105烘干法测定样品水分含量,用Kjel-tec 8400(FOSS,丹麦)测定样品粗蛋白含量,通过索氏抽提法测定样品粗脂质含量,在马弗炉中550高温烧灼测定样品灰分含量。1.61.6 酶活性测定按照南京建成生物工程研究所商品化试剂盒的说明书分别测定血清和肝脏T-AOC(A015-1-2)、SOD(A001-1-2)、MDA(A003-1-2)、CAT(A007-1-1)、NO(A013-2-1)、ACP(A060-2-2)、AKP(A059-2-2)、GOT(C010-1-1)和GPT(C009-1-1)活性。1.71.7 实时荧光定量PCR在qP
19、CR反应中,将远端肠道样品在80的TRIzol试剂中保存。通过RNA提取逆转录试剂盒(GM2005,Servicebio)提取总RNA,使用NanoDrop1000(Thermo Fisher Scientific,美国)测定样品RNA浓度,再反转录为cDNA。引物序列参考Liu等18和Xie等19,在Primer Premier 5软件上设计特异性引物,并于生工生物工程股份有限公司(上海)合成。使用QuantStudio 6 Flex实时荧光定量PCR系统(Thermo Fisher Scientific,美国)进行荧光定量PCR检测。20 L反应体系包括10 L 2SYBR GreenqP
20、CR Master Mix(None ROX;G3320-15;Service-bio),0.2 L浓度为0.25 mol/L的特异性引物、7.8 L无酶水和2 L cDNA模板。基本反应程序为95预变性30s;95变性15s,60退火10s,72延伸30s,40个循环。以-actin基因为内参,用2Ct法分析肠道炎症因子IL-1、IL-8、IL-15、TNF-、IL-10和TGF-等基因mRNA转录水平的变化。每组中采用3个样品,每个样品进行3次qPCR分析。引物序列见表 2。1.81.8 数据分析实验数据通过齐性检验后使用SPSS Statistics22软件进行单因素方差分析,百分比数据
21、经反正弦变换后再进行分析,通过Duncan检验分析实验结果的显著差异(P0.05)的条件下,各组试验鱼FBW、WGR、SGR、FCR和SR等指标间存在显著性差异(P0.05)。可以发现随着饲料皂甙水平的提高,WGR、SGR和SR均表现出下降趋势,FCR则表现出上升趋势。与D0组相比,添加大豆皂甙的处理组WGR和SGR显著降低(P0.05),FCR显著升高(P0.05)。D0.4组SR显著低于D0组(P0.05),D1.6和D4.0组MFI显著低于D0.4组(P0.05)。2.22.2 大豆皂甙对杂交黄颡鱼体组成和肌肉营养组成的影响不同日粮皂甙水平下试验鱼体组成和肌肉营表 2 远端肠道中目标基因
22、的引物序列Tab.2 Primer sequences of target genes in the distal gut目标基因Target gene引物序列Primer sequence(53)登录号Accession No.IL-1GGCTGGTTTGCTGATGTGTC XM_027139700.1CTCGCTGAACACCTTCGAGTIL-8AACCTGCGCAGTGTCGAAAT XM_017472609.1TCAGAGGGGAATGTGCCAGAIL-10GAAACTCAGGTGCGCAACAA XM_027144360.1GGCAACACGGTCTCCAAGTAIL-15CA
23、ACGTTCTCCGCAAGGATG XM_027145925.2AGATCCTGAGCTTGGTGTCGTNF-TCGACTGGTAGCCTTTGTGT XM_027133763.1TCCGTAACGGCCTCTACTTCTGF-CCAACCACAGAGTGGGAACA XM_027149962.1ACGGCAACTGGTAGTCTTCG-actinCCACTTCCCCCACATCACTG XM_027142941.1AGAACCCCAGGAAAGCTCACG1388水 生 生 物 学 报47 卷养组成见表 4,随饲料皂甙水平的上升,试验鱼体蛋白含量和肌肉脂肪含量先下降后上升,D0.4组体蛋
24、白含量和肌肉脂肪含量显著低于D0组(P0.05),而D1.6和D4.0组体蛋白含量均显著高于D0组(P0.05)。试验鱼体脂含量和肌肉蛋白含量表现出先升高后降低的趋势,D0.4组体脂含量和肌肉蛋白含量显著高于D0组,而D1.6和D4.0组体脂水平显著低于D0组(P0.05)。D0.8和D4.0组肌肉灰分含量显著高于D0组(P0.05)。2.32.3 大豆皂甙对杂交黄颡鱼血清免疫酶、抗氧化酶和转氨酶的影响不同日粮皂甙水平下试验鱼血清生化指标结果见表 5,可以发现随着饲料皂甙水平的提高,T-AOC呈降低趋势,GPT活性呈上升趋势,AKP、NO和CAT活性呈先升高后降低的趋势,ACP活性呈先降低后升
25、高的趋势。与D0组相比,D0.2、D0.4组AKP活性显著升高(P0.05);D0.4组ACP活性显著降低(P0.05);除D0.2组NO水平显著升高外其他各表 3 大豆皂甙对杂交黄颡鱼生长指标的影响Tab.3 Effects of soya saponins on growth indexes of hybrid yellow catfish指标IndexD0D0.2D0.4D0.8D1.6D4.0初始重IBW(g)1.110.071.110.111.110.101.110.091.060.101.110.13终末体重FBW(g)9.860.13a8.460.72a8.760.50a8.59
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 大豆 皂甙 杂交 鱼生 免疫 肠道 健康 影响 王岳松
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。