老年重症肺炎并发ARDS患者血清miR-27a、FOXO3与疾病严重程度及预后的关系.pdf
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1、302疑难病杂志 2 0 2 4年3月第2 3卷第3期Chin J Diffic and Compl Cas,March 2024,Vol.23,No.3D01】10.396 9/j.i s s n,16 7 1-6 450.2 0 2 4.0 3.0 0 9老年重症肺炎并发 ARDS患者血清miR-27a、FO X O 3与疾病严重程度及预后的关系论著临床金娴,邵振华,何梅,姜俊,王志安,任蕾基金项目:国家重点研发计划“重点慢性非传染性疾病防控研究”项目(2 0 18 YFC1311902);上海市静安区卫生科研课题计划(2022MS01)作者单位:2 0 0 0 40 上海市静安区中心医院
2、重症医学科(金娴、邵振华、姜俊、王志安);2 0 0 0 6 5上海市同济医院呼吸与危重症科(何梅);2 0 0 0 40 上海市第四康复医院呼吸康复科(任蕾)通信作者:任蕾,E-mail:JALNRL【摘要】目的分析老年重症肺炎并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者血清微小核糖核酸(miRNA)-27a、叉头框蛋白0 3(F0X03)与疾病严重程度及预后的关系。方法选取2 0 2 2 年10 月一2 0 2 3年9月上海市静安区中心医院重症医学科收治老年重症肺炎并发ARDS患者10 8 例(ARDS组)和老年重症肺炎未并发ARDS患者7 2 例(非ARDS组),ARDS组患者再根据氧合指数分
3、为轻度亚组2 6 例、中度亚组34例、重度亚组48 例,并根据2 8 d预后情况分为死亡亚组33例、存活亚组7 5例;另选取同期体检健康志愿者6 0 例为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清miR-27a、FO X 0 3水平,TargetScan数据库预测miR-27a与FOX03的结合位点。通过Pearson/Spearman 相关性分析血清 miR-27a与FOX03mRNA水平的相关性,多因素 Logistic 回归分析老年重症肺炎并发 ARDS患者预后的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-27a、FO X O 3 m RNA 水平对老年重症肺炎并发 A
4、RDS患者死亡的预测价值。结果健康对照组、非ARDS组、ARDS组血清miR-27a水平依次降低,FOXO3mRNA水平依次升高(F/P=77.352/0.001、6 2.956/0.0 0 1);轻度亚组、中度亚组、重度亚组血清miR-27a水平依次降低,F0X03mRNA水平依次升高(F/P=83.597/0.001、111.8 33/0.0 0 1);m iR-2 7 a 与F0X03的3-非翻译区32 57 32 6 4处存在结合位点。老年重症肺炎并发ARDS患者血清miR-27a与FOX03mRNA水平呈负相关(r/P=-0.736/0.001),氧合指数与血清miR-27a水平呈正
5、相关,与F0X03mRNA水平呈负相关(r/P=0.751/0.001、-0.7 8 5/0.0 0 1)。老年重症肺炎并发ARDS患者2 8 d死亡率为30.56%(33/10 8)。年龄增加、机械通气时间延长、FOX03mRNA升高为影响老年重症肺炎并发ARDS患者预后的独立危险因素0 R(95%C I)=1.199(1.0 33 1.393)、1.547(1.0 0 92.373)、1.10 8(1.0 40 1.18 0),氧合指数升高、miR-27a升高为独立保护因素0 R(95%CI)=0.97 3(0.958 0.989)、0.90 3(0.8 44 0.96 5);血清miR-
6、27a、FO X 0 3m RNA 水平及二者联合预测老年重症肺炎并发ARDS患者死亡的曲线下面积分别为0.7 8 4、0.7 8 6、0.8 7 9,二者联合的AUC大于血清miR-27a、FO X 0 3m RNA 水平单独预测(Z/P=2.550/0.011、2.96 3/0.0 0 3)。结论老年重症肺炎并发ARDS患者血清miR-27a水平降低,FOX03mRNA水平升高,与疾病加重和预后不良密切相关,二者联合预测老年重症肺炎并发ARDS患者死亡的价值较高。【关键词】重症肺炎;急性呼吸窘迫综合征;微小核糖核酸-2 7 a;叉头框蛋白0 3;疾病严重程度;预后;老年人【中图分类号】R5
7、63.1Relationship between serum miR-27a and FOXO3 and disease severity and prognosis in elderly patients with severepneumonia complicating ARDS Jin Xian,Shao Zhenhua,He Mei,Jiang Jun,Wang Zhian,Ren Lei.*Department ofCritical Care Medicine,Jingan District Central Hospital,Shanghai 200040,ChinaFunding
8、program:National Key Research and Development Program Research on Prevention and Control of Key Chronic Non-communicable Diseases(2018YFC1311902);Shanghai Jingan District Health Research Project Program(2022MS01)Corresponding author:Ren Lei,E-mail:JALNRL928 Abstract Objective To analyze the relation
9、ship between serum micro ribonucleic acid(miRNA)-27a,forkheadframing protein 03(FOX03),and the severity of the disease and the prognosis of elderly patients with severe pneumoniacomplicated by acute respiratory distress syndrome(ARDS).Methods One hundred and eight elderly patients with severe【文献标识码】
10、A疑难病杂志 2 0 2 4 年3月第2 3卷第3期Chin J Dific and Compl Cas,March 2024,Vol.23,No.3pneumonia complicating ARDS(ARDS group)and 72 elderly patients with severe pneumonia not complicating ARDS(non-ARDS group)admitted to the Department of Intensive Care Medicine,Jingan District Central Hospital,Shanghai,China,f
11、irom October 2022 to September 2023 were selected,and the patients in the ARDS group were divided into a mild subgroupof 26 cases and a moderate subgroup of34 cases according to the oxygenation index The patients in the ARDS group werefurther divided into 26 cases in the mild subgroup,34 cases in th
12、e moderate subgroup,and 48 cases in the severe subgroupaccording to the oxygenation index,and were divided into 33 cases in the death subgroup and 75 cases in the survival sub-group according to the prognosis at 28 d.In addition,60 healthy volunteers who had medical checkups during the same pe-riod
13、were selected as the healthy control group.Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction was used todetect serum miR-27a and FOXO3 levels,and TargetScan database predicted the binding sites of miR-27a and FOXO3.Thecorrelation between serum miR-27a and FOXO3 mRNA levels was analyzed b
14、y Pearson/Spearman correlation,mulifactoriallogistic regression was used to analyze the prognostic factors of elderly patients with severe pneumonia complicated byARDS,and the subject work characteristics(ROC)curves were used to analyze the effects of serum miR-27a and FOXO3mRNA levels on the progno
15、sis of elderly patients with severe pneumonia complicated by The predictive value of death inpatients with ARDS.Results Serum miR-27a level decreased and FOXO3 mRNA level increased in healthy control group,non-ARDS group and ARDS group(F/P=77.352/0.001,62.956/0.001);serum miR-27a level decreased and
16、 FOX03 mR-NA level increased in mild,moderate and severe subgroups,and serum miR-27a level decreased and FOXO3 mRNA level in-creased in mild,moderate and severe subgroups.subgroups serum miR-27a level decreased and FOXO3 mRNA level in-creased sequentialy(F/P=83.597/0.001,111.833/0.001);there was a b
17、inding site between miR-27a and the 3-untranslatedregion of FOX03 from 3257 3264 Sites.Serum miR-27a was negatively correlated with FOX03 mRNA levels in elderly pa-tients with severe pneumonia complicating ARDS(r/P=-0.736/0.001),and oxygenation index was positively correlatedwith serum miR-27a level
18、s and negatively correlated with FOX03 mRNA levels(r/P=0.751/0.001,-0.785/0.05),具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准(2 0 2 2)伦审第39号,受试者或家属知情同意并签署知情同意书。1.2病例选择标准(1)纳人标准:年龄6 0 岁;初次确诊为重症肺炎或重症肺炎并发ARDS;重症肺炎符合中国急诊重症肺炎临床实践专家共识9 诊断标准;ARDS符合急性呼吸窘迫综合征:柏林新定义10 1 诊断标准;临床病历资料完整。(2)排除标准:合并肺结核、慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)、先天性肺发育不良等其他肺疾病;脑卒中、终末期肾
19、病等重大疾病或疾病终末期;恶性肿瘤患者;自身免疫性疾病;哺乳期、妊娠期妇女。1.3观测指标与方法1.3.1资资料收集:性别、年龄、肺炎类型(社区/医院获得性肺炎)、吸烟史、饮酒史、基础疾病、机械通气时间、白细胞计数、血肌酐、血尿素氮、C反应蛋白、降钙素原等资料。1.3.2血清miR-27a、FO X 0 3水平检测:患者于人院时和健康对照组体检时采集空腹肘静脉血4ml,置于EDTA抗凝管中30 min,离心留取上层血清,保存于-80冰箱中待测。按照南京诺唯赞生物科技股份有限公司提供的RNA提取试剂盒(编号RC112-01)说明书提取总RNA,按照南京赛泓瑞生物科技有限公司提供的逆转录试剂盒(编
20、号DV807A)说明书逆转录为cDNA。以 cDNA 为模板,miR-27a 以 U6 为内参,FOXO3以GAPDH为内参,根据翌圣生物科技(上海)股份有限公司提供的实时荧光定量聚合酶链式反应试剂盒(编号112 0 3ES03)说明书进行扩增。反应体系:2 MasterMix10l、上游引物0.5l、下游引物0.5l、cDNA2.0l、加DEPC水至2 0 l;反应条件:预变性9530 s 1次,变性955s40次,退火延伸6 0 40s40次。6 5 95绘制溶解曲线,用2-ACT法表示血清miR-27a、FO X O 3m RNA 水平。引物由武汉金开瑞生物工程有限公司合成,miR-27
21、a上游引物5-AAG-GACCCCCACGAGAAAAA-3,下游引物5-ACCGAACT-TGCATTGATTCC-3;U 6 上游引物 5-CTCGCTTCG-疑难病杂志 2 0 2 4年3月第2 3卷第3期Chin J Diffic and Compl Cas,March 2024,Vol.23,No.3GCAGCACA-3,下游引物5-AACGCTTCACGAATTT-GCGT-3;FO X O 3上游引物5-ACACTCCAGCT-GCGTCCCTGA-3下游引物5=TGTCGTGGAGTCCCCAAT-TC-3;GAPDH上游弓引物5-CTCGCTTCGGCAGCACATATA-3
22、下游引物5=ACGAATTTGCGTGTCATCCT-3。1.3.3miR-27a与FOX03的结合位点预测:通过Tar-getScan 数据库 https:/www.targetscan.org/vert_72/预测miR-27a与FOX03的结合位点。1.3.4老年重症肺炎并发ARDS患者病情和预后分组:老年重症肺炎并发ARDS患者人院后,根据氧合指数(动脉血氧分压/吸人氧浓度)分为轻度亚组(2 0 0mmHg氧合指数30 0 mmHg,26 例)、中度亚组(10 0mmHg氧合指数2 0 0 mmHg,34例)、重度亚组(氧合指数10 0 mmHg,48例)。并根据老年重症肺炎并发ARD
23、S患者2 8 d预后情况分为死亡亚组33例和存活亚组7 5 例。1.4统计学方法选用SPSS28.0统计学软件进行数据处理。计数资料以频数或率(%)表示,比较行x检验;正态分布的计量资料以xs表示,2 组间比较采用t检验,若为偏态分布则以M(Q 1,Q.)表示,采用U检验;相关性采用Pearson/Spearman相关性分析;多因素 Logistic 回归分析预后影响因素;绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清miR-27a、FO X O 3m RNA 水平预测老年重症肺炎并发ARDS患者死亡的价值。P0.05为差异有统计学
24、意义。2结 果2.13组血清miR-27a、FO X 0 3m RNA 水平比较健康对照组、非ARDS组、ARDS组血清miR-27a水平依次降低,FOX03mRNA水平依次升高(P均 0.0 1),见表1。表13组血清miR-27a、FO X 0 3mRNA 水平比较(s)Tab.1(Comparison of serum miR-27a and FOX03 mRNA levelsin the 3groups组别例数健康对照组60非ARDS组72ARDS组108F值P值2.2血清miR-27a、FO X O 3m RNA 水平在不同病情程度老年重症肺炎并发ARDS患者中比较轻度亚组、中度亚组
25、、重度亚组血清miR-27a水平依次降低,FOX03mRNA水平依次升高(P均 0.0 1),见表2。miR-27a1.34 0.181.12 0.250.87 0.1577.3520.001FOXO3 mRNA0.77 0.110.97 0.151.17 0.1962.9560.001疑难病杂志2 0 2 4年3月第2 3卷第3期Chin J Dific and Compl Cas,March 2024,Vol.23,No.3表2 血清miR-27a、FO X 0 3m RNA 水平在不同病情程度老年重症肺炎并发ARDS患者中比较(s)Tab.2 Comparison of serum mi
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