环孢素A和他克莫司的高效液相色谱-串联质谱检测及其室内质控评价.pdf
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1、环孢素 和他克莫司的高效液相色谱串联质谱检测及其室内质控评价钟里科米秀芳舒琦许高奇何超能朱俊峰(浙江省肿瘤医院药剂科中国科学院杭州医学研究所杭州)摘 要 目的 建立环孢素 和他克莫司治疗药物监测的高效液相色谱串联质谱(/)质控方法应用 多规则理论对质控样品进行评估 方法利用/建立人全血中环孢素 和他克莫司的血药浓度检测方法 对治疗药物监测过程中低、中、高 个浓度水平的质控样品进行统计分析绘制 和 分数质控图应用 多规则理论进行室内质控评估 结果环孢素 和他克莫司的线性范围分别为.和.定量下限分别为.和.提取回收率分别为.和.内标归一化的基质因子分别为.和.日内和日间的准确度及精密度均小于.其他
2、参数也均符合生物样本定量分析要求 和 分数质控图显示 年第三季度 组质控样品的检测结果提出警告 次(违反 规则)未出现失控现象 结论 建立的环孢素 和他克莫司治疗药物监测室内质控体系能够有效保障血药浓度检测的准确性关键词 环孢素 他克莫司高效液相色谱串联质谱治疗药物监测 多规则理论质控图中图分类号.文献标识码 文章编号()./.开放科学(资源服务)标识码()()/./.().治疗药物监测()是个体化医疗的重要组成部分可以帮助患者在正确的时间接受最佳剂量的药物提高药物的有效性和安全性改善患者的预后 环孢素 和他克莫司是临床上应用最广泛的 种免疫抑制剂常用于治疗移植排斥反应和自身免疫性疾病 然而这
3、 种药物的治疗窗狭窄药动学个体差异大因此用药期间需要进行 高效液相色谱串联质谱(/)法是一种强大的分析技术已被广泛用于生物样品等复杂基质中药物的定量测定/具有高选择性、高灵敏度和高精确度的特点已成为环孢素 和他克莫司 的理想方法其准确性和精确度受到几个因素的影响包括基质效应、离子抑制和校准曲线拟合等 因此有必要建立和评估室内质量控制系统以确保方法的可靠性和重复性本研究旨在利用/建立一种快速、可 靠的环孢素 和他克莫司 方法并应用 多规则质控体系对 年第 季度环孢素 和他克莫司 过程中的随行质控样品测定值进行 和 分数质控图分析以期完善环孢素 和他克莫司治疗药物监测的室内质量控制体系提高血药浓度
4、监测的准确性为临床提供参考 仪器与试剂.仪器 液相色谱串联质谱检测系统(美国 公司)低温离心机(美国 公司)电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司感量:.)多管漩涡混合仪(杭州米欧仪器有限公司)超纯水制备仪(美国 公司).试剂 环孢素 对照品(批号:含量)他 克 莫 司 对 照 品(批 号:含 量)环孢素(作为环孢素 的内标)对照品(批号:含量)子囊霉素(作为他克莫司的内标)对照品(批号:含量)均购自美国 公司 甲酸和乙酸铵均为色谱纯购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司甲醇和乙腈均为色谱纯购自德国 公司 方法与结果.溶液的配制.储备液的配制分别精密称取环孢素.和他克莫司.于不同 量瓶用甲醇溶解并
5、定容制得.的环孢素 标准储备液和.的他克莫司标准储备液各 份同法分别制备.的环孢素 质控储备液和.的他克莫司质控储备液各 份同法分别制备.的环孢素 内标储备液和.的子囊霉素内标储备液各 份 储备液于 保存.工作液的配制精密吸取环孢素 标准储备液 和他克莫司标准储备液 于同一个 量瓶用 甲醇稀释至刻度制得环孢素 和他克收稿日期 修回日期 作者简介 钟里科()男畲族浙江永康人主管药师硕士研究方向:治疗药物监测:电话:.通信作者 朱俊峰()男浙江东阳人副主任药师博士硕士生导师研究方向:治疗药物监测:电话:.莫司浓度分别为.和.的混标工作液同法用质控储备液制得环孢素 和他克莫司浓度分别为.和.的质控工
6、作液同法用内标储备液制得环孢素 和子囊霉素浓度分别为.和.的内标工作液.校正样品及质控样品的制备将人空白全血与混标工作液按 混合制得环孢素 和他克莫司浓度分别为.和.的定量上限样品之后用空白全血逐级稀释制得一系列浓度梯度的校正样品其中环孢素 的浓度梯度为:.、.、.、.、.、.、.他克莫司的浓度梯度为:.、.、.、.、.、.、.同法用质控工作液制得 个浓度水平的质控样品其中环孢素 的浓度为.、.、.他克莫司的浓度为.、.、.样品前处理精密吸取全血 于.管加入内标工作液 混匀然后加入浓度为 的硫酸锌溶液 涡旋 静置 之后加入乙腈 沉淀蛋白 涡旋 后以 离心 离心后取上清液进样分析.色谱条件 色谱
7、柱为 (.)流动相为 乙酸铵.甲酸溶液():乙酸铵.甲酸甲醇溶液()梯度洗脱:.分析时间.流速.柱温 进样量.质谱条件采用电喷雾离子源()离子源正离子模式多反应监测模式()扫描 优化后的离子源参数:气帘气为 离子化电压为 温度()为 喷雾气为 辅助加热气为 碰撞气为 各化合物的子离子扫描图见图 优化后的 参数见表.方法学评价.专属性 在上述条件下环孢素 及其内标环孢素 的保留时间分别为.和.他克莫司及其内标子囊霉素的保留时间均为.同时定量下限样品中待测物的响应值为空白全血的 倍以上全血中的内源性成分对待测物及内标无干扰表明本方法专属性良好见图 医药导报 年 月第 卷第 期图 环孢素()、环孢素
8、()、他克莫司()及子囊霉素()的离子扫描图.()()()()表 优化后的化合物 参数.化合物母离子子离子(/)驻留时间/去簇电压射入电压射出电压碰撞能量/环孢素 .他克莫司.环孢素 .子囊霉素.图 环孢素、他克莫司、环孢素 和子囊霉素在空白全血()、零点样品()及定量下限样品()中的色谱图.()()().线性及定量下限 环孢素 在.范围内线性关系良好线性方程为.(.)他克莫司在.范围内线性关系良好线性方程为.(.)环孢素 及他克莫司的定量下限分别为.和.其定量下限的准确度及精密度见表 偏差()及变异系数()均.满足生物样品定量分析要求.准确度和精密度不同浓度环孢素 及他克莫司的日内和日间准确
9、度 均在.以内精密度.满足生物样品定量分析要求见表.提取回收率不同浓度环孢素 的提取回收率为.他克莫司的提取回收率为.见表.基质效应不同浓度环孢素 的基质因子()为.其内标归一化的基质因子为.他克莫司的基质因子为.其内标归一化的基质因子为.均符合生物样本定量分析要求见表.稳定性实验不同浓度环孢素 及他克莫司在室温不避光放置 、在 放置 、在处理后放置于自动进样器 的 为.为.表明环孢素 及他克莫司在相应条件下基本稳定.进样残留在连续进样 针定量上限样品后的空白样品中未检测到待测物和内标的残留.稀释倍数为了应对临床上可能遇到的极高浓度样品本研究将 倍定量上限样品用空白全血稀释 倍后分析环孢素 的
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