蟛蜞菊内酯通过PI3K_Akt_mTOR信号通路对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的影响.pdf
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1、药物研究蟛蜞菊内酯通过/信号通路对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的影响刘素连谢凯叶冬宁李汶静陈杰许静(.南方医科大学皮肤病医院药剂科广州.中山大学附属第一医院药学部广州)摘 要 目的研究蟛蜞菊内酯()对人脐静脉内皮细胞()炎症损伤的保护作用及其分子机制方法 建立过氧化氢()诱导 氧化应激损伤模型给予 处理 实验分组:正常对照组、二甲亚砜()组、组、组()通过噻唑蓝()法检测各组细胞存活率流式细胞术检测细胞内活性氧()水平荧光显微镜观察各分组细胞 蛋白表达情况 测定细胞中、等蛋白表达水平 结果 与 组比较 组 细胞存活率升高(.)细胞内 减少 表达增强自噬体膜上 蛋白聚集增多与 损伤组相比 能明显增加
2、损伤后 的 蛋白表达水平(.)结论 可通过抑制 诱导的 炎症损伤从而抑制 自噬这一作用与 促进、蛋白的磷酸化抑制自噬从而抵抗 细胞氧化应激损伤有关关键词 蟛蜞菊内酯氧化应激/信号通路自噬人脐静脉内皮细胞中图分类号 文献标识码 文章编号()./.开放科学(资源服务)标识码()/(.)()()/.().:()./.(.).(.)(的信号 根据流式细胞仪 和 通道信号分别制作直方图根据直方图荧光信号算数平均值来量化脂质过氧化细胞比例.免疫印迹()法检测蛋白表达水平 提取细胞总蛋白 法定量蛋白含量十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳()电泳转至聚偏氟乙烯()膜上 室温封闭 加入一抗 孵育过夜洗涤 次后加
3、入 二 抗 室 温 孵 育 电 致 化 学 发 光()发光液显影.统计学方法 每组实验重复 次以上所得数据采用 .版及.版进行统计学分析各组实验数据均以均数标准差()表示组间均数比较采用校正 检验多组间均数比较采用 检验以.表示差异有统计学意义 结果.对 细胞氧化应激损伤的影响 与对照组比较组细胞存活率下降差异有统计学意义(.)说明 对 增殖具有抑制作用 与 组比较 小、中、大剂量组细胞存活率明显升高差异有统计学意义(.)说明 对 的氧化损伤有较好的保护作用见图 综合比较选择 进行后续实验.抑制人脐静脉内皮细胞自噬用 腺病毒感染细胞后细胞质和细胞核中通常存在红色点状或较为弥散的斑块状荧光 在自
4、噬被抑制的情况下红色点状或斑块状变大而且数目会变多 荧光检测结果显示与对照组比较 蛋白在 的 诱导 后表达下调红色点状变小且数目明显减少而使用 进行干预后斑块状红色荧光分布增多说明 诱导的 细胞自噬可以被 抑制(图).对 氧化应激指标的影响 流式检测/的平均荧光强度结果显示与对照组比较组 显著增加差异有统计学意义与组比较 组 减少提示 干预可以减少 的产生缓解细胞产生氧化应激反应(图)超氧化物歧化酶()是细胞内天然的抗氧化酶对维持细胞氧化还原平衡具有重要作用 为了确定 对 诱导的 细胞有抗氧化特性检测抗氧化应激保护因子 酶的活性 图 结果表明 处理显著抑制 诱导的 细胞中 活性的降低 显著增强
5、细胞 生成减弱细胞抗氧化能力表现为 蛋白表达降低 处理可以阻断 诱导的 细胞发挥抗氧化作用 .正常对照组.组.组.小剂量组.中剂量组组.大剂量组 与正常对照组比较.与 组比较 .图 组 细胞存活率().().对 凋亡相关蛋白表达的影响 在 的 诱导 后检测凋亡相关蛋白、及 的表达情况结果见图 与对照组比较组 蛋白的表达上调而 蛋白下调与 组比较 组 蛋白表达下调而 蛋白上调且各组之间/的值差异有统计学意义(.)结果提示 能抑制 致 细胞凋亡发挥细胞保护作用.对 刺激的 细胞中、蛋白表达的影响 实验结果见图 与对照组比较组、蛋白表达水平明显减少(.)与 组比较 组中 ()、()、()蛋白表达水平
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