病毒的接种.pptx

病毒的接种病毒的接种概述n病毒结构简单，缺乏完整的酶系统缺乏完整的酶系统，不能在无生命的人工培养基中生长，必须必须在活的组织细胞中才能增殖在活的组织细胞中才能增殖。动物接种法鸡胚培养法组织细胞培养法常用的分离、培养、鉴定病毒的方法动物接种动物接种动物接种动物接种（Animal inoculation）是最早应用的病毒培养法，在病毒学研究中主要有三方面用途：分离鉴定病毒、通过传代增殖或减弱病毒毒力、分离鉴定病毒、通过传代增殖或减弱病毒毒力、制备免疫血清。制备免疫血清。在分离病毒时由于动物自身可能带有病毒，而且许多病毒没有敏感动物，因而目前多被组织培养所代替。常用的动物有小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、家兔、羊和猴等。接种的途径有鼻内、皮内、脑内、腹腔内和静脉注射等。小鼠脑内接种小鼠脑内接种1、以无菌0.25ml注射器抽取流行性乙型脑炎病毒悬液0.1ml，去除注射器内的气泡。2、取出小鼠，左手将小鼠固定（固定时用大拇指和食指握住小鼠的头部，左手手掌轻轻按住小鼠的体部）。3、右手用棉签蘸以碘酒，消毒小鼠的右侧颞部皮毛（不碰到眼）。4、右手拿注射器在小鼠颞部（眼与耳根联线的中点略偏耳朵的方向）注入，进入颅腔即可（一般进针23mm），不要插得太深，注射量为0.020.03ml。5、注射完毕，将用过的注射器放入煮沸消毒器内，煮沸消毒。实验动物置于防蚊设备的室内饲养，逐日观察动物发病情况。鸡胚接种鸡胚接种n接种途径接种途径n可根据病毒种类选择适宜接种部位，如分离流感病毒常用羊水囊和尿囊同时接种法，而痘病毒常采用绒毛尿囊膜接种法 n尿囊腔接种法n卵黄囊接种法n绒毛尿囊膜接种法n羊膜囊接种法 气室鸡胚卵黄囊尿囊腔羊膜腔绒毛尿囊膜卵白卵膜判断鸡胚是否存活判断鸡胚是否存活 在检卵灯下观察能否看到清晰的血管能否看到清晰的血管；胚胎是否移动是否移动；若胚龄过长，则需观察其胎盘部分，胎盘部分变苍白说明胚胎死亡，正常时胎正常时胎盘发暗盘发暗，蛋白部分透亮。绒毛尿囊膜接种法绒毛尿囊膜接种法n定位：将胎盘部分及自然气室部分用铅笔画出，在胎盘与蛋在胎盘与蛋白交界处（无血管区）白交界处（无血管区）画一直径约画一直径约1cm的的等等边三角形边三角形。卵窗气室鸡胚卵黄囊尿囊腔羊膜腔绒毛尿囊膜卵白卵膜n取卵壳：消毒后取下所画三角形区域的卵壳，注意卵膜不要碰破，于卵膜中央刺一小口（不要伤及绒毛尿囊膜），n造人工气室：在自然气室部分用大注射器针头钻一孔，用橡皮头自气室端小孔将气室中空气吸出，使绒毛尿囊膜下陷形成一“人工气室”n接种：去除卵膜，于绒毛尿囊膜上滴上病毒0.10.2ml。n封口：用胶布封口，胶布事先用碘酒消毒，并通过火焰烧去余碘。n培养：放入温箱培育4天，然后收获病毒。真菌菌落的观察真菌菌落的观察（示教）（示教）n真菌培养营养要求不高，在一般培养基真菌培养营养要求不高，在一般培养基上能生长上能生长n常用常用沙保弱（沙保弱（Sabouraud）培养基）培养基（含（含4%葡萄糖、葡萄糖、10%蛋白胨、琼脂），真蛋白胨、琼脂），真菌的最适酸碱度是菌的最适酸碱度是pH4.06.0，最适生，最适生长温度浅部真菌长温度浅部真菌2228，深部真菌，深部真菌37。真菌菌落类型n酵母型菌落酵母型菌落（yeast colony）n菌落光滑、湿润。无菌丝n隐球菌菌落n类酵母型菌落类酵母型菌落（yeast-like colony）n外观和酵母型菌落相似，显微镜下可看到假菌丝假菌丝n白色念株菌菌落n丝状型菌落丝状型菌落（filamentous colony）n菌落系由多细胞菌丝体所组成n大多数丝状真菌或霉菌的菌落n新型隐球菌：新型隐球菌：菌落属酵母型菌落，圆形、菌落属酵母型菌落，圆形、较大、白色、边缘整齐，表面湿润光滑，较大、白色、边缘整齐，表面湿润光滑，与一般细菌菌落相似与一般细菌菌落相似。n白色念珠菌：白色念珠菌：菌落属类酵母样菌落，圆菌落属类酵母样菌落，圆形、较大、白色、形、较大、白色、菌落底层有假菌丝长菌落底层有假菌丝长入培养基内入培养基内。n絮状表皮癣菌：絮状表皮癣菌：菌落属丝状菌落，在沙菌落属丝状菌落，在沙保琼脂斜面培养基上菌落开始为白色，保琼脂斜面培养基上菌落开始为白色，颗粒状，以后变为绒毛样甚至粉末状，颗粒状，以后变为绒毛样甚至粉末状，有许多辐射状沟，呈草绿色，且培养基有许多辐射状沟，呈草绿色，且培养基常有皱裂常有皱裂。n石膏样小孢子菌：石膏样小孢子菌：菌落属丝状菌落，在菌落属丝状菌落，在沙保培养基上菌落为棉絮状、羊毛状或沙保培养基上菌落为棉絮状、羊毛状或粉末状。粉末状。注意事项注意事项n消毒小白鼠时不要碰到眼睛n注射时不要扎的太深以免刺伤对侧手指n磨卵壳及钻孔时力量要适中n看过的鸡胚不要倒入水池，倒入指定的大烧杯中谢谢！谢谢！