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基因工程基本操作程序习题
一、选取题（每小题3分，共39分）
1.下列关于基因工程论述，错误是( )
A．目基因和受体细胞均可来自动物、植物或微生物
B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类惯用工具酶
C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达胰岛素原无生物活性
D．载体上抗性基因有助于筛选含重组DNA细胞和增进目基因表达
2.下列关于基因工程中限制性核酸内切酶描述，错误是(　　)。　　　　　
A．一种限制性核酸内切酶只能辨认一种特定脱氧核苷酸序列
B．限制性核酸内切酶活性受温度影响
C．限制性核酸内切酶能辨认和切割RNA
D．限制性核酸内切酶可从原核生物中提取
3.如图是运用基因工程技术哺育转基因植物，生产可食用疫苗某些过程示意图，其中Pst Ⅰ、Sma Ⅰ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限制性核酸内切酶。下列说法错误是(　　)。

A．图示过程是基因工程核心环节
B．表达载体构建时需要用到限制酶 SmaⅠ
C．抗卡那霉素基因存在有助于将具有抗原基因细胞筛选出来
D．除图示构成外，表达载体中还应当具有启动子和终结子等构造
4.下图是获取转基因抗冻番茄植株过程示意图，关于论述对的是(　　)

A．过程①获取目基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序
B．将各种抗冻基因编码区依次相连成能表达新基因，不能得到抗冻性增强抗冻蛋白
C．过程②构成重组质粒缺少标记基因，需要转入农杆菌才干进行筛选
D．应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目基因存在及其完全表达
5．下图为DNA分子在不同酶作用下所发生变化，图中依次表达限制酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用对的顺序是(　　)

A．①②③④ B．①②④③ C．①④②③ D．①④③②
6．下列关于基因工程论述，不对的是(多选)(　　)
A．基因工程经常以抗菌素抗性基由于目基因
B．细菌质粒是基因工程惯用运载体
C．通惯用一种限制性核酸内切酶解决含目基因DNA，用另一种解决运载体DNA
D．为哺育成抗除草剂作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体
7．天然玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成基因B，而开蓝色花矮牵牛中存在序列已知基因B。现用基因工程技术哺育蓝玫瑰，下列操作对的是（ ）
A.提取矮牵牛蓝色花mRNA，经逆转录获得互补DNA，再扩增基因B
B.运用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛基因文库中获取基因B
C.运用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞
D.将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞
8．北极比目鱼中有抗冻基因，其编码抗冻蛋白具备11个氨基酸重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强。下图是获取转基因抗冻番茄植株过程示意图，关于论述对的是(　　)。

A．过程①获取目基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序
B．将各种抗冻基因编码区依次相连成能表达新基因，不能得到抗冻性增强抗冻蛋白
C．过程②构成重组质粒缺少标记基因，需要转入农杆菌才干进行筛选
D．应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目基因存在及其完全表达
9.将ada（腺苷酸脫氨酶基因）通过质粒pET28b导人大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列论述错误是（　）
A．每个大肠杆菌细胞至少含一种重组质粒
B．每个重组质粒至少含一种限制性核酸内切酶辨认位点
C．每个限制性核酸内切酶辨认位点至少插入一种ada
D．每个插入ada至少表达一种腺苷酸脱氨酶分子
10．下列论述符合基因工程概念是(　　)。
A．B淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中具有B淋巴细胞中抗体基因
B．将人干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得能产生人干扰素菌株
C．用紫外线照射青霉菌，使其DNA发生变化，通过筛选获得青霉素高产菌株
D．自然界中天然存在噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌DNA上
11．在用基因工程技术构建抗除草剂转基因烟草过程中，下列操作错误是(　　)。
A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒核酸
B．用DNA连接酶连接经切割抗除草剂基因和载体
C．将重组DNA分子导入烟草原生质体
D．用含除草剂培养基筛选转基因烟草细胞
12．下列关于转基因植物论述，对的是(　　)。
A．转入到油菜抗除草剂基因，也许通过花粉传入环境中
B．转抗虫基因植物，不会导致昆虫群体抗性基因频率增长
C．动物生长激素基因转入植物后不能表达
D．如转基因植物外源基因来源于自然界，则不存在安全性问题
13．下列关于基因工程论述，错误是(　　)。
A．目基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物
B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类惯用工具酶
C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达胰岛素原无生物活性
D．载体上抗性基因有助于筛选含重组DNA细胞和增进目基因表达
二、填空题（共51分）
1.科学家将动物体内可以合成胰岛素基因与大肠杆菌DNA分子重组，并且在大肠杆菌体内表达到功。请依照图回答问题:

(1)此图表达是采用 　 合成基因办法获取 　　　　　　　 基因过程。
(2)图中①DNA是以 　　　　　　　　 为模板， 　　　　　　 形成单链DNA，在酶作用下合成双链DNA，从而获得了所需要基因。
(3)图中③代表 　　　 DNA，含 　　　　　　　 基因。
(4)图中④表达 　 。
2.下图表达运用基因工程哺育抗虫棉过程，请据图回答下列关于问题。

(1)若限制酶Ⅰ辨认序列和切点是—↓GATC—，限制酶Ⅱ辨认序列和切点是—G↓GATCC—，那么在①过程中，应用限制酶________切割质粒，用限制酶________切割抗虫基因。
(2)将通过②过程得到大肠杆菌涂布在具有________培养基上，若可以生长阐明已导入了普通质粒或重组质粒，反之则阐明没有导入。
(3)要拟定抗虫基因导入后，与否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，则在个体水平上鉴定过程可简述为：________。经筛选分析，该植株细胞中具有一种携带抗虫基因DNA片段，因而可以把它看作是杂合子。理论上，该转基因植株自交产生F1代中，仍具备抗虫特性植株占总数________。
(4)⑤过程所用当代生物技术称为________，从遗传学角度来看，据细胞通过⑤过程，能形成棉植株主线因素是细胞具备____________________。
3．干扰素是病毒侵入人体后由淋巴细胞产生一种免疫活性物质，它具备广谱抗病毒作用。运用当代生物技术生产干扰素流程如下：

(1)过程①产生物质A是______，cDNA文库______(不不大于/不大于)人基因组文库。
(2)过程④用到工具酶是______________，过程⑤需先用____________________解决受体细胞，过程⑥普通采用________技术。
(3)过程⑧和⑨核心技术分别是________、________。
(4)基因工程核心环节是图中________________(填标号)。
4.(·安徽理综31)家蚕细胞具备高效表达外源基因能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可提取干扰素用于制药。
(1)进行转基因操作前，需用________酶短时解决幼蚕组织，以便获得单个细胞。
(2)为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库干扰素基因片段对的插入表达载体________和________之间。
(3)采用PCR技术可验证干扰素基因与否已经导入家蚕细胞。该PCR反映体系重要成分应包括：扩增缓冲液(含Mg2＋)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、________和________。
(4)运用生物反映器培养家蚕细胞时，贴壁生长细胞会产生接触抑制。普通将多孔中空薄壁小玻璃珠放入反映器中，这样可以________，增长培养细胞数量，也有助于空气互换。
5．(·天津理综，7Ⅰ)下图是哺育表达人乳铁蛋白乳腺生物反映器技术路线。图中tetR表达四环素抗性基因，ampR表达氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶酶切位点。

据图回答问题。
(1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用________________限制酶同步酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选具有重组载体大肠杆菌一方面需要在含________培养基上进行。
(2)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达调控序列是________(填字母代号)。
A．启动子 B．tetR C．复制原点 D．ampR
(3)过程①可采用操作办法是________(填字母代号)。
A．农杆菌转化 B．大肠杆菌转化
C．显微注射 D．细胞融合
(4)过程②采用生物技术是________________。
(5)对初期胚胎进行切割，通过程②可获得各种新个体。这运用了细胞________性。
(6)为检测人乳铁蛋白与否成功表达，可采用________(填字母代号)技术。
A．核酸分子杂交 B．基因序列分析
C．抗原—抗体杂交 D．PCR
6．(·上海卷)人体细胞内具有抑制癌症发生P53基因，生物技术可对此类基因变化进行检测。

(1)目基因获取办法普通涉及________和________。
(2)上图表达从正常人和患者体内获取P53基因某些区域。与正常人相比，患者在该区域碱基会发生变化，在上图中用方框圈出发生变化碱基对，这种变异被称为________。
(3)已知限制酶E辨认序列为CCGG，若用限制酶E分别完全切割正常人和患者P53基因某些区域(见上图)，那么正常人会被切成________个片段，而患者则被切割成长度为________对碱基和________对碱基两种片段。
(4)如果某人P53基因某些区域经限制酶E完全切割后，共浮现170、220、290和460个碱基对四种片段，那么该人基因型是________(以P＋表达正常基因，P－表达异常基因)。
7．(·福建卷)转基因抗病香蕉哺育过程如图所示。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四种限制酶切割位点。请回答下列问题。

(1)构建含抗病基因表达载体A时，应选用限制酶________，对________进行切割。
(2)培养板中卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞生长，欲运用该培养基筛选已导入抗病基因香蕉细胞，应使基因表达载体A中具有________，作为标记基因。
(3)香蕉组织细胞具备________，因而，可以运用组织培养技术将导入抗病基因香蕉组织细胞哺育成植株。图中①、②依次表达组织培养过程中香蕉组织细胞________。
8 (高考全国新课标卷40)依照基因工程关于知识，回答下列问题：
（1）限制性内切酶切割ＤＮＡ分子后产生片段，其末端类型有　　　和　　　。
（2）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生片段如下：

为使运载体与目基因相连，具有目基因DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必要具备特点是　　　。
（3）按其来源不同，基因工程中所使用DNA连接酶有两类，即　　　　　DNA连接酶和　　　　　　　DNA连接酶。
（4）反转录作用模板是　　　，产物是　　　。若要在体外获得大量反转录产物，常采用　　　技术。
（5）基因工程中除质粒外，　　　　　和　　　　　　也可作为运载体。
（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，普通状况下，不能直接用未解决大肠杆菌作为受体细胞，因素是　　　　　　　。
9.(福建高考３２)当代生物科技专项。肺细胞中let-7基因表达削弱，癌基因RAS表达增强，会引起肺癌。研究人员运用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图１。

请回答：
（１）进行过程①时，需用 酶切开载体以插入let-7基因。载体应用RNA聚合酶辨认和结合部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为 。
（２）进行过程②时，需用 酶解决贴附在培养皿壁上细胞，以利于传代培养。
（３）研究发现，let-7基因能影响RAS表达，其影响机理如图２。据图分析，可从细胞提取 进行分子杂交，以直接检测let-7基因与否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，也许是由于细胞中 （RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起。
10. (天津高考7)生物分子间特异性结合性质广泛用于生命科学研究。如下实例为体外解决“蛋白质-DNA复合体”获得DNA片段信息过程图。

据图回答：
（1）过程①酶作用部位是 键，此过程只发生在非结合区DNA，过程②酶作用部位是 键。
（2）①、②两过程运用了酶 特性。
（3）若将得到DNA片段用于构建重组质粒，需要过程③测序成果与 酶辨认序列进行对比，以拟定选用何种酶。
（4）如果复合体中蛋白质为RNA酶聚合，则其辨认、结合DNA序列位基因
。
（5）如下研究运用了生物分子间特异性结合有 （多选）
A.分离得到核糖体，用蛋白酶酶解后提取rRNA
B.用无水乙醇解决菠菜叶片，提取叶绿体基粒膜上光合色素
C．通过度子杂交手段，用荧光物质标记目基因进行染色体定位
D．将抑制成熟基因导入番茄，其mRNA与催化成熟酶基因mRNA互补结合，终结后者翻译，延迟果实成熟。
11. (江苏高考32)图1表达具有目基因DDNA片段长度（bp即碱基对）和某些碱基序列，图2表达一种质粒构造和某些碱基序列。既有Msp I、BamH I、Mbo I、Sma I4种限制性核酸内切酶，它们辨认碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题

（1）图1一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由 连接。
（2）若用限制酶SmaI完全切割图1中DNA片段，产生末端是 末端，其产物长度为 。
（3）若图1中虚线方框内碱基对被T-A碱基对替代，那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1及其相应DNA片段，用限制酶Sma I完全切割，产物中共有 种不同长度DNA片段。
（4）若将图2中质粒和目基因D通过同种限制酶解决后进行连接，形成重组质粒，那么应选用限制酶是 。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒大肠杆菌，普通需要用添加 培养基进行培养。经检测，某些具有重组质粒大肠杆菌菌株中目基因D不能对的表达，其最也许因素是 。
答案
1.【解析】①基因工程中有3种工具，但工具酶只有2种。②工具酶本质为蛋白质，载体本质为小型DNA分子，但不一定是环状。③标记基因作用——筛选、检测目基因与否导入受体细胞，常用有抗生素抗性基因、发光基因，表达产物为带颜色物质等。④受体细胞中惯用植物受精卵或体细胞（经组织培养）、动物受精卵（普通不用体细胞）、微生物——大肠杆菌、酵母菌等。普通不用支原体，因素是它营寄生生活；一定能用哺乳动物成熟红细胞，因素是它无细胞核，不能合成蛋白质。
【答案】D
2.解析　考查基因工程中工具酶关于知识。限制性核酸内切酶化学成分是蛋白质，它活性受到温度和pH影响；限制性核酸内切酶特点是能辨认双链DNA中特定核苷酸序列，可在特定位点进行切割，但不能辨认和切割RNA；限制性核酸内切酶重要是从原核生物体内分离出来。
答案　C
解析　图示过程为基因表达载体构建过程，是基因工程中核心环节。构建过程中需要将目基因完整切割下来，此时要用到限制酶PstⅠ、EcoRⅠ。抗卡那霉素基因是标记基因，目是便于鉴定和筛选具有目基因细胞。基因表达载体涉及启动子、目基因、终结子和标记基因等。
答案　B
4.【解析】过程①中通过逆转录法获得目基因，可用于基因工程，但该目基因中不存在内含子和非编码序列，因而不能用于比目鱼基因组测序；将各种抗冻基因编码区相连形成能表达新基因也许不再是抗冻基因；运用农杆菌目是将重组质粒导入受体细胞，而不是筛选重组质粒；应用DNA探针技术，可以检测受体细胞中与否成功导入了目基因，但不能检测目基因与否完全表达。
【答案】B
5．C　[限制酶可在特定位点对DNA分子进行切割；DNA聚合酶在DNA分子复制时将脱氧核苷酸连接成脱氧核苷酸链；DNA连接酶可将限制酶切开磷酸二酯键连接在一起；解旋酶作用是将DNA双链解开螺旋，为复制或转录提供模板。]
6．ACD　[基因工程经常以抗菌素抗性基由于标记基因；质粒是基因工程惯用运载体；通惯用同一种限制酶切割目基因和运载体，以获得相似黏性末端；受体细胞可以是受精卵，也可以是体细胞。D．为哺育成抗除草剂作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体
7．【答案】A
【解析】提取矮牵牛蓝色花mRNA，逆转录得到DNA，然后扩增，可获得大量基因B，A对的；从基因文库中获取目基因，只要依照目基因有关信息和基因文库中信息进行筛选对比即可，不需要用限制酶进行切割，B错误；目基因与质粒连接需要用DNA连接酶，而不是DNA聚合酶，C错误；目基因需要和运载体连接后形成重组质粒再导入，并且应当用农杆菌进行感染，而不是大肠杆菌，D错误。
8.解析　将各种抗冻基因编码区相连成能表达新基因，合成蛋白质为新蛋白质，不能得到抗冻性增强抗冻蛋白，故选项B对的；过程①是运用反转录法合成目基因，由于没有非编码区和编码区中内含子，不能用于比目鱼基因组测序；用作载体质粒，必要具备标记基因才干便于检测和筛选；应用DNA探针技术，可检测转基因抗冻番茄中目基因存在和转录，但不能检测与否成功表达，故选项A、C、D错误。
答案　B
9.【解析】受体大肠杆菌成功表达腺苷酸脱氨酶，阐明每个大肠杆菌细胞至少具有一种重组质粒，且每个ada至少指引合成一种腺苷酸脱氨酶分子。重组质粒形成需先用限制性核酸内切酶切割目基因和质粒形成相似黏性末端，再在DNA连接酶作用下连接起来，连接起来序列中会 具有限制性核酸内切酶辨认位点。不同限制性核酸内切酶辨认位点不同，不是每个限制性核酸内切酶辨认位点都能插入ada，C项错误。
【答案】C
10.解析　基因工程是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要基因产物。因此B为基因工程，而A为动物细胞工程，C为诱变育种，D无人为因素不属于基因工程。
答案　B
11.解析　限制性核酸内切酶用于提取目基因和切割载体，烟草花叶病毒遗传物质是RNA，不能用限制性核酸内切酶切割，A项错误；DNA连接酶可以连接具备相似黏性末端目基因和载体，B项对的；受体细胞可以是受精卵和体细胞，也可以是去除细胞壁原生质体，C项对的；目基由于抗除草剂基因，因此未成功导入目基因细胞不具备抗除草剂能力，筛选时应当用含除草剂培养基筛选转基因细胞，D项对的。
答案　A
12.解析　抗除草剂基因导入到油菜染色体后则可以通过花粉传入环境中；转抗虫基因植物可杀死无抗性昆虫，对昆虫抗性具备选取作用，因此会导致昆虫群体抗性基因频率增长；转基因技术打破了生殖隔离，动物生长激素基因转入植物后可以表达；来源于自然界目基因导入植物体后，也许破坏原有基因构造，具备不拟定性，外源基因也也许通过花粉传播，使其她植物成为“超级植物”等，因此转基因技术存在着安全性问题。
答案　A
13.解析　载体上抗性基因有助于筛选含重组DNA细胞，但由于它和目基因是互相独立，并不能增进目基因表达。
答案　D
二、填空题
1．答案：(1)人工　胰岛素原目 (2)胰岛素原信使RNA 　逆转录 (3)重组 胰岛素原 (4)将重组DNA分子导入受体细胞
解析:本题是对基因工程操作程序考查。操作时，一方面要获取目基因，然后让目基因与载体结合构建成重组DNA分子，再通过一定办法把重组DNA分子导入受体细胞使其扩增和表达
2.解析　本题极易出错某些有：在第(1)小题中没有看清目基因插入位置，从而不能拟定用限制酶Ⅰ还是Ⅱ来切割质粒还是切割抗虫基因。第(3)小题检测抗虫性状在个体水平上与否表达，应当让害虫吞食转基因棉花叶片，观测害虫存活状况，这个地方也有出错，重要没有看清是在哪个水平上进行检测。
在切割质粒时应遵循一种原则：不能同步将两个标记基因切开，至少保存一种，因此只能用酶Ⅱ切割，而从目基因两侧碱基序列可知，只能用酶Ⅰ才得到含目基因DNA片段。如果导入了重组质粒，此时重组质粒中四环素抗性基因能正常表达，而氨苄青霉素抗性基因已被破坏，因此涂布在具有四环素培养基上，可以生长话，阐明导入了重组质粒(普通质粒)。如果把携带一种抗虫基因DNA片段看作杂合子，可以以为是Aa，自交产生F1中仍具备抗虫特性植株占总数比例为。把一种细胞培养成一种植株技术称为植物组织培养。
答案　(1)Ⅱ　Ⅰ　(2)四环素　(3)让害虫吞食转基因棉花叶片，观测害虫存活状况，以拟定其与否具备抗虫性状　　(4)植物组织培养　发育成完整个体所有遗传物质
解析　(1)cDNA来自mRNA逆转录或依照mRNA碱基序列人工合成，cDNA文库不大于基因组文库。(2)构建基因表达载体用到限制酶和DNA连接酶。将目基因导入大肠杆菌须用Ca2＋解决受体细胞；导入动物细胞用显微注射法。(3)过程⑧核心技术是胚胎移植，过程⑨核心技术是细胞核移植。(4)基因工程核心环节是基因表达载体构建，即④。
3.解析　本题综合考查基因工程、细胞工程和PCR技术，旨在考查考生对基本知识理解。胰蛋白酶或胶原蛋白酶解决可以将动物组织分解成单个细胞；基因表达载体涉及启动子、目基因、终结子、标记基因等，其中启动子和终结子有助于目基因表达，标记基因有助于目基因检测；PCR技术中需要原料(4种脱氧核苷酸)、缓冲液、模板DNA、引物和耐热DNA聚合酶等；在生物反映器中放入多孔中空薄壁小玻璃珠目：一方面有助于细胞贴壁生长，避免接触抑制；另一方面有助于气体互换。
答案　(1)胰蛋白(或胶原蛋白)　(2)启动子　终结子
(3)对干扰素基因特异DNA引物对　TaqDNA聚合酶　(4)扩大细胞贴壁生长附着面积
4.解析　(1)由图示可知：需用HindⅢ和BamHⅠ限制酶同步酶切载体和人乳铁蛋白基因，因酶切后tetR四环素抗性基因构造被破坏而ampR氨苄青霉素抗性基因构造完好，故用含氨苄青霉素选取培养基可筛选具有重组载体大肠杆菌。(2)启动子是一段特殊DNA序列，是RNA聚合酶辨认和结合位点，可调控基因特异性表达。(3)过程①表达把重组载体导入受体细胞过程，当受体细胞为动物细胞时，常采用显微注射法。(4)过程②表达把初期胚胎移植到代孕母牛子宫过程，属于胚胎移植技术。(5)通过程②得到新个体是细胞全能性体现。(6)人乳铁蛋白基因与否成功表达，核心看与否有其表达产物即人乳铁蛋白，可用抗原—抗体杂交法检测该蛋白与否存在。
答案　(1)HindⅢ和BamHⅠ　氨苄青霉素　(2)A　(3)C
(4)胚胎移植技术　(5)全能　(6)C
5.解析　本题重要考查基因工程有关知识。
(1)目基因获取办法有直接分离和化学办法人工合成两种；(2)仔细对比正常人与患者基因序列可知是CG碱基对变为了TA碱基对，这种变化属于基因突变；(3)正常人P53基因有两个限制酶E辨认序列，完全切割后可产生三个片段，患者P53基因中有一种限制酶E辨认序列发生突变，且突变点位于辨认位点内，这样患者就只有一种限制酶E辨认序列，切割后产生两个片段，分别为290＋170＝460对碱基，220对碱基；(4)正常人P53基因经限制酶E完全切割后产生三个片段，290对碱基、170对碱基和220对碱基，患者产生两个片段460对碱基和220对碱基，则该人基因型应为P＋P－。
答案　(1)从细胞中分离　通过化学办法人工合成　(2)见下图

基因碱基对替代(基因突变)
(3)3　460　220　(4)P＋P－
解析　本题考查基因工程关于知识。(1)从图可看出，只有PstⅠ、EcoRⅠ两种酶能保持抗病基因构造完整性，因此构建含抗病基因表达载体A时，应选用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ两种酶，对抗病基因DNA和质粒进行切割。
(2)卡那霉素能抑制香蕉愈伤组织细胞生长，欲运用该培养基筛选已导入抗病基因香蕉细胞，应使基因表达载体A中具有抗卡那霉素基因，以此作为标记基因。
(3)香蕉组织细胞具备全能性，因而，可以运用组织培养技术将导入抗病基因香蕉组织细胞哺育成植株。图中①、②依次表达组织培养过程中香蕉组织细胞脱分化和再分化。
答案　(1)PstⅠ、EcoRⅠ　含抗病基因DNA、质粒
(2)抗卡那霉素基因
(3)全能性　脱分化、再分化
6.【答案】
（1）黏性末端 平末端
（2）切割产生DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生相似
（3）E·coli T4
（4）mRNA（RNA） cDNA （DNA） PCR
（5）噬菌体 动植物病毒等
（6）未解决大肠杆菌吸取质粒（外源DNA）能力极弱
【解析】（1）当限制酶在它辨认序列中心轴线两侧将DNA两条链分别切开时，产生是黏性末端，而当限制酶在它辨认序列中心轴线处切开时，产生则是平末端。
（2）为使运载体与目基因相连，不同限制酶应切割出相似黏性末端，它们必要要能辨认相似核苷酸序列，并且使每条链中相似两个核苷酸之间磷酸二酯键断开。
（3）DNA连接酶，依照酶来源不同，可以将这些酶分为两类：一类是从大肠杆菌中分离得到，称为E·coli DNA连接酶；另一类是从T4噬菌体中分离出来，称为T4DNA连接酶。
（4）反转录是以RNA为模版来合成DNA过程。可以在体外短时间内大量扩增DNA技术叫PCR（多聚酶链式反映）
（5）基因工程中除质粒外，尚有λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。
（6）大肠杆菌细胞外有细胞壁和细胞膜，能制止其她物质进入，只能通过Ca2+解决细胞，使细胞处在能吸取周边环境中DNA分子生理状态，这种细胞称为感受态细胞。
7.【答案】（10分）
（1）限制性核酸内切酶（或限制） 启动子
（2）胰蛋白
（3）RNA RAS蛋白
【解析】（1）过程①表达基因表达载体构建，在该过程中需要用限制酶对载体进行切割以便于目基因插入（限制性核酸内切酶，简称限制酶，写其她不得分）；启动子是一段特殊DNA序列，是RNA聚合酶结合和辨认位点，RNA聚合酶结合到该位点，可驱动转录过程。
（2）过程②表达动物细胞培养，培养过程中浮现接触抑制后可以用胰蛋白酶解决，使之分散成单个细胞，之后分装到其她培养瓶里面进行传代培养。
（3）判断目基因与否在受体细胞中转录，可用分子杂交技术来进行，从细胞中提取mRNA和用放射性同位素或者荧光标记目基因单链DNA片段进行杂交。依照题中信息“肺组织细胞中let-7基因表达削弱，癌基因RAS表达就增强，引起肺癌”导入let7基因后，肺癌细胞受到抑制，阐明RAS基因表达削弱，导致细胞中RAS蛋白质含量减少进而导致癌细胞受抑制。
8【答案】（1）磷酸二酯键，肽键
（2）专一
（3）限制性核酸内切酶
（4）启动子
（5）ACD
【解析】（1）DNA酶作用部位是DNA磷酸二酯键，蛋白酶作用部位是肽键。
（2）①②过程运用了各种酶催化一种或一类化学反映特性，即专一性。
（3）DNA要构建重组质粒，需要用限制性核酸内切酶切割，再与质粒重组。
（4）RNA聚合酶辨认和结合在基因启动子上，驱动基因转录。
（5）蛋白酶能特异性酶解蛋白质，分子杂交手段也是运用各物质分子结合特异性，抑制成熟基因转录出mRNA与催化成熟酶基因mRNA碱基互补结合，也具备特异性，光和色素易溶于有机溶剂，与酒精并不是特异性溶解，因此选ACD。
9.【答案】（1）脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖
（2）平 537bp、790bp、661bp （3）4
（4）BamH I 抗生素B 同种限制酶切割形成末端相似，某些目基因D与质粒反向链接
【解析】（1）DNA单链中相邻两个碱基之间通过“脱氧核糖—磷酸—脱氧核糖”连接。
（2）Sma I辨认序列为GGGCCC，切割后会产生平末端；图1所示DNA分子中具有两个Sma I辨认位点，第一种辨认位点在左端534bp序列向右三个碱基对位置；第二个辨认位点在右端658bp序列向左三个碱基对位置，从这两个位点切割后产生DNA片段长度分别为534+3，796-3-3，658+3，即得到DNA片段长度分别为537bp、790bp和661bp。
（3）在杂合子体内具有基因D和基因d，基因D序列中具有两个辨认位点，通过SmaI完全切割会产生537bp、790bp和661bp三种不同长度片段，基因d序列中具有一种辨认位点，通过切割后会产生1327bp和 661bp两种长度片段，综上，杂合子中分离到该基因DNA片段通过切割后会产生4种不同长度片段。
（4）可以获取目基因并切开质粒限制酶有辨认序列为GGATCCBamH I和辨认序列为GATCMbo I，若使用Mbo I会同步破坏质粒中抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，因此要用BamH I来切割目基因和质粒，切割后保存了完整抗生素B抗性基因，便于筛选出具有重组质粒大肠杆菌。由于目基因和运载体是用同种限制酶切割，目基因两端末端和质粒切割后两个末端都能进行互补，也许浮现目基因反向连接在运载体上状况，导致基因D不能对的表达。