上皮跨膜电阻仪EVOM使用基础手册.doc
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1、 使用手册目录手册说明 1介绍 1快速参考指南 2电阻测量 2电压测量 2产品概述 3配置清单 3启封 3调试 3校准电阻仪 3STX2 电极 4仪表 4设备诊疗 5测试 EVOM2 仪表 5电压测量前电极调整 5操作说明 7设备维护 11电极 11抛光/清洗STX2电极 11STX2电极消毒 12经典消毒方案 12电极储存 12EVOM2 充电器及电池 13电池充电 13附件 16故障诊疗 18EVOM2 仪表 18STX2 电极 18断开和统计仪链接进行诊疗 19规格 22附录 A: 电阻计算 23电阻 23插入“blank”电阻 23单位面积电阻 23附录 B: 直径24 mm(6孔)插
2、入皿和STX电极 25附录 C: 精度及可反复性性能提升 26索引 27符合说明 29质量确保 30退换货 30手册说明本手册中以下标志:小心!操作可能造成仪器损坏。请仔细阅读相关说明警告!操作可能造成人身伤害或威胁人身安全。请仔细阅读相关说明。注释或提醒包含帮助信息。介绍EVOM是第一代专门测量常规组织培养跨上皮电阻设备。EVOM2是其新一代产品,新设计更易于操作。EVOM2不仅能够定量测量细胞单层健康,而且能够定量测量细胞汇合。独创电路及STX2电极探测细胞单层汇合。当结合使用WPIendohm腔室,EVOM2还能够用来更正确地测量跨内皮电阻。EVOM2产生交流电流,这么能够避免由直流电流
3、产生电极金属沉积和对组织副作用,另外,阻抗测量不受膜电容和膜电压影响。EVOM2内置可充电镍-氢电池,电流为2200毫安时。电池由外源电池充电器充电,完全充满电后能够使用8小时。当电池电量低于正常工作水平时,仪器会自动关闭。当插入交流电源时要使仪器安全工作,WPI提议在测量时将仪器和充电器断开。之所以这么做,是为了提供最大电子隔离以避免干扰,同时降低噪音以确保读数正确。相关TEER自动测量,请考虑WPIs REMS 自动进样器(WPI# REMS),它包含机械取样器,数据获取板,底座,基于windows软件和24孔或96孔用电极。快速参考指南相关使用EVOM2具体测量步骤请参阅第7页”操作说明
4、”电阻测量1. 将EVOM2和充电器断开而且打开电源(I)2. 将功效开关调至OHMs3. 连接电极.4. 测量.电压测量1. 将电极连接至EVOM22. 关闭电源,平衡电极 注意:电极必需浸入在溶液中进行平衡。3. 将EVOM2和充电器断开而且打开电源(I)。.4. 将功效开关调至MILLIVOLTS 。5. 测量安装校准电阻器图1为 1000W 电阻器 (WPI #91750)请阅读以下EVOM2检测说明STX2 电极STX2电极(图2)只能用于电阻测量,能够直接从干燥储存环境拿来使用而不需要预处理。STX2电极由一对宽4毫米厚1毫米电极组成。每个电极包含一个外电极和一个内电极。(第8页图
5、4)外电极是小银板,用来传输样品膜上电流,它们被称为电流电极。内电极是小银/氯化银成份组成电压传感器,它们被称为电压电极。仪表在利用一个螺丝起子(需自购)校准R ADJ 螺口以后,EVOM2就能够使用了。注意:要延长仪器使用寿命,请勿长时间将仪器置于阳光下,不然屏幕会变黑造成无法读数。1. LCD显示器 2. 电源开关 3. 功效开关 4. 模拟输出5. R ADJ 校准6. 输入7. 充电接口Fig. 3EVOM2 meter数字液晶显示器:数字液晶显示器上能够显示4位半数值,在测量电压时,它显示两个电极之间电势差,以毫伏表示最高999.9毫伏;在测量电阻时,它显示两电极之间阻抗即欧姆。尽管
6、仪器能够显示13000W,但额定精度只到10000W.电源开关 I/O:棒状开关能够将仪器打开(I)或关闭(O)功效开关 (Ohms/Millivolts): 调拨到 Ohms 档, 仪器处于电阻测量模式;调拨到Millivolts 档, 仪器则处于电压测量模式.模拟输出:标准BNC连接许可将模拟数据输出到统计仪器.R ADJ 校准旋钮: 将1000W 电阻器接入到输入接口时,在电阻测量模式下,旋钮能够用来校准仪器显示到1000量程.输入: 将测试电阻器、STX2、STX3 或Endohm腔室电话线插头(RJ-11)插入到该口以连接到测量仪器.充电接口: 接入充电器插头,而且将充电器另一头接电
7、源插座能够为EVOM2电池充电。但在充电时请勿测量电阻或电压.设备诊疗提议第一次使用EVOM2时先对设备进行测试,而且在后续要进行周期性检验。假如担心仪器或电极不能正常工作,能够参考以下内容来判定EVOM2工作状态:测试EVOM2仪表1. 将测试电阻器RJ-11插头插入仪器输入接口2. 将功效开关置于欧姆档3. 将EVOM2和充电器断开并打开电源。仪器将显示1000W 假如不是,用螺丝起子调整R-ADJ旋钮直到仪器显示1000W.调整电极进行电压测量1. 依据第7页“操作说明2-准备电极”操作提醒平衡电极.注意:在测量电压前,必需先将电极浸入溶液中最少12小时进行平衡.2. 将电极头部浸入到试
8、验用培养基或0.1-0.15MKCl或NaCl电解质溶液中.3. 将功效开关置于毫伏.4. 将EVOM2和充电器断开,并打开电源 (I).注意: 在一段时期内数次电压测量后会产生电压漂移.5. 当仪器显示读数为0时,电极能够用来测量电压,假如仪器读数不为0,参考 “故障诊疗”.操作说明EVOM2 用来测量电阻时,电极在使用前不需要被平衡或预处理。假如测量结果出现不一致情况,能够对设备进行调整来赔偿。测量阻抗或电压时,请遵照以下步骤:1. 将EVOM2 和充电器断开.2. 电极和仪器相连,将RJ插头接入到输入接口。.3. 准备STX2 电极.A. 电极预处理.测量电阻时:不需要进行任何预处理,能
9、够直接从干储存环境中取出使用。测量电压时:电极使用前则需要平衡。为了确保电压稳定性和较低电极间电势差,关闭EVOM2电源(O),而且在电极连接到EVOM2时,将电极浸入到电解液中(0.1 0.15M KCl)。当STX2 电压电极连接到设备且关闭电源时,在内部会形成短路。当电压电极回路短路几小时后,电极间不对称电势差就会减小,内部电极直流电势差只有几毫伏甚至更少,同时十分稳定,表1列出了平衡电极所需要时间。表 1: STX2 电极平衡时间电极所处环境 达成平衡时间在干燥环境 24 小时在溶液中 2 小时B. 假如期望消毒话,能够参阅操作说明中“STX2消毒”4. 将电极置于样杯中.STX2 电
10、极设计用来测量组织培养孔中表皮细胞膜电压和电阻。因为电极之间长度有差异,许可外部长电极接触到含有外部培养基盘子底部,这么能够预防内部短电极接触组织培养杯底部。 (图4). 这种结构确保电极和细胞层之间适宜位置。另外,长电极每次全部接触到容器底部,大大提升了反复测量正确性。将电极置于溶液中时,头部刚好接触到容器底部而不会使电极变形。见图5。备注:电极浸入角度不正确(图6)或浸入深度不够(图7)会影响到阻抗测量.注意:要对同一个样品杯中取得可复制性结果,电极位置必需保持不变。要提升可反复性结果和测量稳定性,在测量过程中必需确保电极稳定性。当心: 当把电极从一个样杯移动到另外一个量杯时,最好不要用蒸
11、馏水冲洗银/氯化银电极。假如使用蒸馏水冲洗银/氯化银电极,在从一个样杯移动到另外一个量杯时,会需要几分钟时间进行复位,而在这个过程中会出现电压多个毫伏漂移。假如必需要清洗以避免将一个样本带入到另外一个样本中,电极请用试验用培养基冲洗。提醒: 由Corning Costar生产Transwell 培养皿, 通常在过滤杯底部和培养板之间有较大距离。同时这个距离会因为每批产品不一样而不一样,而这个差异可能会造成短电极接触到细胞层而长电极也接触到培养杯底部。这种情况下,Transwell用户能够使用STX3电极替换STX2。STX3电极是一个可调整电极,或能够用砂纸将短电极上磨掉0.5毫米。见右图。将
12、600级砂纸放置在桌子边缘,垂直握住电极使短电极接触砂纸而长电极悬空,拖动电极在砂纸上轻轻滑动,直到得到适宜长度。 图 8打磨 STX2 电极警告: 只有STX2电极绿色部分才能被打磨。请勿打磨或损坏电极任何金属部位5. 电阻测量.A. 功效开关置于欧姆档.B. 断开EVOM2 充电器,打开电源开关(I).C. 将电解液倒入空杯子中。 (比如, 不含细胞细胞培养皿)D. 将电极置于空白培养杯中. 这时会显示溶液电阻读数。这个空白电阻值应该加入到测量组织培养跨膜电阻里进行计算。具体内容参见附录A中电阻计算。注意:空白电阻必需测量,然后从测得跨膜电阻减去,这么能够得到真实跨膜电阻。6. 电压测量A
13、. 将功效开关置于毫伏档B. 断开EVOM2充电器,打开电源开关(I).C. 将平衡好电极插入到细胞培养皿,仪器会显示稳定膜间电压读数。注意:内部短电极将连接到设备地线作为参考电极。假如仪器读数为正,则细胞组织基底面(黏在插入杯底部)相对于顶层(暴露部分)电压为正;相反,假如读数为负,则细胞组织底层对顶层电压为负。注意:操作步骤参考第2页“快速参考指南”。设备维护备件订购请参考表2中零件号。其它附件参考13页表3。表2: 备件WPI 零件号 说明STX2 电极91750 1,000W 电阻器电极电极必需正确清洗、消毒和储存。注意: 请勿灼烧电极,不然会引发金属融化,并使电极质量确保无法确保。清
14、洁STX2电极表面在使用中,电极表面可能被蛋白质或其它物质覆盖。这种堆积或污染,会造成系统效率降低,引发10-20mV电压误差,或读数不稳(电阻测量不受影响)。假如需要处理这个问题,能够按以下步骤重新氯化电极或清洁电极表面。重新氯化 将电极浸入未经稀释家用漂白水3分钟,浸泡后用清水立即冲洗,尽管这将重新氯化电极表面,不过不能纠正误差。当心!确保只有电极尖端置于漂白液中,不能将漂白液接触电极上部。电极表面抛光-用600级砂纸轻轻打磨STX2电压电极顶端内侧银质小球(图9),轻轻除去银质小球表层即可。当心:数次反复打磨最终会除去全部 Ag/AgCl 小球,假如打磨不再改善电压读数时,则需要更换电极
15、。提醒:假如没有600级砂纸,可用橡皮擦替换。对STX2电极消毒STX2 电极是未经消毒。能够用酒精、环氧乙烷、紫外线或杀菌剂如Cidex Plus (WPI #7364) 或 Sporicidin.当心:电极不能用高压灭菌器消毒。经典消毒方案在层流净化罩中:1. 将电极在Cidex Plus (wPI #7364) 浸泡15分钟,然后用15秒风干。当心:电极每次在酒精中浸泡时间不能超出30分钟。 在酒精里长时间浸泡,会破坏电极表面保护层,从 而缩短电极使用寿命。2. 用类似试验细胞培养液消过毒电解液或0.1-0.15M KCl 或 NaCl 溶液冲洗电极。3. 现在电极能够用来测量电阻。4.
16、 测量电压时,在无菌电解质溶液中平衡电极。提醒:电极能够存放在一个UV罩保持无菌状态。注意:当电极暴露在强光或紫外线中时,电极表面会形成一层黑色氧化膜,通常,氧化膜不会影响电极性能。为了避免氧化膜行成,应该避光储存。电极存放短期存放(两周以内):浸泡电极尖端在电解液中。确保电极线缆插头连接到EVOM2设备,方便确保系统内部短路而且确保电极对称性。长久存放(两周以上):长久存放时,电极要用蒸馏水清洗而且放置在干燥、黑暗处。EVOM2 充电器和电池注意: 电池充电时确定EVOM2 电源开关已关闭。EVOM2 充电器接交流电源能够给电池充电。配置通用电源可在多个国家使用。EVOM2 包含有6V 22
17、00mAH 可充电镍氢电池。电池充电电池可进行500次充放电,能够在任何时候,且能够进行连续充电。 图 10镍氢电池警告:请使用EVOM2 充电器。 使用其它充电器能会损坏电池。依据使用情况,电池寿命约1-2年。 镍氢电池在不使用情况下也会放电,放电速度和温度相关,温度越低,放电速度越低。假如电池长久处于放电状态可能会损坏电池。为预防电池损坏,最少每两个月对电池充电一次。假如EVOM2中电池失效,可使用备用电池(WPI #91736)。见16页“附件”更换电池:1.使用螺丝起子取下 EVOM2外箱上4个螺丝钉。 图 11电池固定在EVOM2地盘上2.电池安置在基板底部,使用飞利浦1号螺丝起子卸
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