半抗原与蛋白质偶联技术.ppt
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1、半抗原与蛋白质偶联技术目录抗原与半抗原偶联蛋白人工抗原合成的方法影响人工抗原质量的因素人工抗原的质量评定抗原与半抗原抗原抗原抗原 能与淋巴细胞抗原受体能与淋巴细胞抗原受体(TCR/BCR)特异性结合,刺激机体产)特异性结合,刺激机体产生特异性免疫应答,并与相应免疫应答产生特异性免疫应答,并与相应免疫应答产物(指抗体或致敏淋巴细胞)在体内、外物(指抗体或致敏淋巴细胞)在体内、外发生特异性结合反应的物质。发生特异性结合反应的物质。抗原的分类天然抗原天然抗原 如:细菌、病毒、真菌、寄生虫等。如:细菌、病毒、真菌、寄生虫等。人工抗原人工抗原 如:人工结合抗原、人工合成抗原、如:人工结合抗原、人工合成抗
2、原、基因工程抗原基因工程抗原常见的天然抗原-细菌链球菌链球菌链球菌链球菌痢疾杆菌痢疾杆菌痢疾杆菌痢疾杆菌霍乱弧菌霍乱弧菌霍乱弧菌霍乱弧菌伤寒杆菌伤寒杆菌伤寒杆菌伤寒杆菌常见的天然抗原-病毒狂犬病病毒狂犬病病毒狂犬病病毒狂犬病病毒腺病毒腺病毒腺病毒腺病毒口蹄疫病毒口蹄疫病毒口蹄疫病毒口蹄疫病毒流感病毒流感病毒流感病毒流感病毒常见的其他天然抗原真菌真菌真菌真菌白色念珠菌白色念珠菌白色念珠菌白色念珠菌(1,000X oil)(1,000X oil)疟原虫疟原虫疟原虫疟原虫常见的其他天然抗原 异种动物血清异种动物血清 异嗜性抗原异嗜性抗原 血型抗原血型抗原 主要组织相容性抗原主要组织相容性抗原 肿瘤抗
3、原肿瘤抗原超抗原超抗原人工抗原人工抗原 人工结合抗原人工结合抗原 将无免疫原性的简单将无免疫原性的简单化学基团化学基团与与蛋白质载体蛋白质载体偶联,或将无免疫原性的有机偶联,或将无免疫原性的有机分子与蛋白质载体结合,形成分子与蛋白质载体结合,形成载体载体-半抗原半抗原结合物结合物,均属人,均属人工结合抗原工结合抗原。人工抗原人工抗原 人工合成抗原人工合成抗原 用化学方法将用化学方法将活化氨基酸活化氨基酸聚合,聚合,使之成为使之成为合成多肽合成多肽。(应用这种人工合成。(应用这种人工合成多肽可研究氨基酸多肽可研究氨基酸种类、序列种类、序列与蛋白质抗与蛋白质抗原性及免疫原性的关系。)原性及免疫原性
4、的关系。)人工抗原人工抗原基因工程抗原基因工程抗原通过基因重组、再表达制备的抗原物质。通过基因重组、再表达制备的抗原物质。如:目的基因(如:目的基因(编码编码抗原)抗原)+载体(质粒等)载体(质粒等)重组重组DNA DNA 细胞(真核或原核)细胞(真核或原核)表表达达 纯化纯化 基因工程疫苗基因工程疫苗抗原的性质1.1.免疫原性:免疫原性:抗原刺激机体产生特异性抗原刺激机体产生特异性免疫应答免疫应答,诱生相应诱生相应抗体抗体和和效应淋巴细胞效应淋巴细胞的能力。的能力。2.2.抗原性抗原性:抗原可在体内、外与相应的抗体抗原可在体内、外与相应的抗体/效应效应淋巴细胞发生特异性结合,产生淋巴细胞发生
5、特异性结合,产生免疫应答免疫应答的特性。的特性。抗原抗原(按照免疫原性及免疫反应性)(按照免疫原性及免疫反应性)分类1 1、完全抗原、完全抗原 :既有免疫原性又有抗原性的既有免疫原性又有抗原性的物质,如多数蛋白质分子。物质,如多数蛋白质分子。2 2、半抗原、半抗原:又称不完全抗原,单独存在时只又称不完全抗原,单独存在时只具有抗原性而无免疫原性的物质,如二硝具有抗原性而无免疫原性的物质,如二硝基酚、青霉素。基酚、青霉素。完全抗原半抗原与载体结合后可使其具有免疫原性。半抗原与载体结合后可使其具有免疫原性。半抗原半抗原+载体载体 完全抗原完全抗原半抗原+载体载体抗体抗体BT完全抗原完全抗原BBBT常
6、见的偶联蛋白常见的偶联蛋白常用来作为合成人工抗原的载体蛋白质有:常用来作为合成人工抗原的载体蛋白质有:牛血清白蛋白牛血清白蛋白(BSA)(BSA)、卵清蛋白卵清蛋白(OA)(OA)、钥孔血蓝蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)(KLH)、人血清白蛋白人血清白蛋白(HSA)(HSA)人工合成的多聚赖氨酸人工合成的多聚赖氨酸(PLL)(PLL)等。等。常见的偶联蛋白牛血清白蛋白牛血清白蛋白(BSABSA)包含包含583583个氨基酸残基,个氨基酸残基,分子量为分子量为66.43kDa66.43kDa,等电点为等电点为4.74.7。BSABSA结构结构常见的偶联蛋白卵清蛋卵清蛋ovalbvminovalbvm
7、in 是一种糖蛋白。是一种糖蛋白。含有微量的磷。含有微量的磷。是卵清中蛋白质是卵清中蛋白质的主要成分,约的主要成分,约占占6565。鸡的卵清蛋白分鸡的卵清蛋白分子量约子量约45kDa45kDa。a.牛血清白蛋白b.磷酸酪氨酸血清白蛋白c.卵清蛋白d.磷酸酪氨酸卵清蛋白常见的偶联蛋白钥孔血蓝蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)(KLH)由于由于KLHKLH质量大,质量大,复杂性高,与其他载复杂性高,与其他载体蛋白相比体蛋白相比KLHKLH会引起会引起更强的免疫应答。更强的免疫应答。来源于软体动物,来源于软体动物,它在系统发生上远离它在系统发生上远离哺乳动物物种,在测哺乳动物物种,在测定过程中产生会与定过程
8、中产生会与典典型靶点型靶点样品发生交叉样品发生交叉反应的抗体的可能性反应的抗体的可能性较小。较小。常见的偶联蛋白 人血清白蛋白人血清白蛋白(简称(简称HSAHSA),是),是人血浆中的蛋白人血浆中的蛋白质,其非糖基化质,其非糖基化的单链多肽包含的单链多肽包含585585个氨基酸,分个氨基酸,分子量为子量为66kD66kD。在。在血浆中其浓度为血浆中其浓度为42g/L42g/L,约占血浆,约占血浆总蛋白的总蛋白的60%60%。常见的偶联蛋白 -多聚赖氨酸是多聚赖氨酸是目前天然防腐剂中目前天然防腐剂中具有优良防腐性能具有优良防腐性能的微生物类食品防的微生物类食品防腐剂。它是由腐剂。它是由2530赖
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