支原体-立克次体.ppt
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1、支原体 立克次体概念:支原体是一类概念:支原体是一类缺乏细胞壁缺乏细胞壁的原核细的原核细胞型微生物,也是在胞型微生物,也是在无生命培养基上生长无生命培养基上生长繁殖的繁殖的最小最小微生物微生物。其特点为细胞膜含固。其特点为细胞膜含固醇,能通过细菌滤器;高度多形性、形成醇,能通过细菌滤器;高度多形性、形成分枝的长丝;含分枝的长丝;含DNADNA和和RNARNA,二分裂繁殖等。,二分裂繁殖等。柔膜体纲支原体目支原体科 无胆甾原体科 螺原体科支原体属 脲原体属主要病原性支原体主要病原性支原体n肺炎支原体肺炎支原体 M.pneumoniaeM.pneumoniaen人型支原体人型支原体 M.Nomin
2、isM.Nominisn生殖器支原体生殖器支原体 M.genitaliumM.genitaliumn穿透支原体穿透支原体 M.penetrausM.penetrausn溶脲脲原体溶脲脲原体 U.urealyticumU.urealyticum第一节第一节 概概 述述一、生物学性状一、生物学性状1.1.形态结构形态结构最小的原核细胞生物;最小的原核细胞生物;球形、球杆形、长丝球形、球杆形、长丝状及分枝状等状及分枝状等多多种形态;种形态;G-,着色困难,常,着色困难,常用用Giemsa染色法染染色法染成淡紫色。成淡紫色。细胞膜由细胞膜由蛋白质和脂质蛋白质和脂质(固醇固醇)组成)组成三层结构三层结构
3、 特殊的顶端结构:粘附宿主上皮 细胞表面,与支原 体的致病有关。2.2.培养特性培养特性:荷包蛋样菌落荷包蛋样菌落培养基中含人或动培养基中含人或动物的血清物的血清(1020%)及酵母浸液。及酵母浸液。多数支原体能在鸡多数支原体能在鸡胚绒毛尿囊膜或细胚绒毛尿囊膜或细胞培养中生长。胞培养中生长。固体培养基:固体培养基:27天天长长出出直直径径约约10600m的的典典型型的的“荷荷包包蛋蛋样样”菌菌落落:低低倍倍镜镜下下见见菌菌落落呈呈圆圆形形,心心致致密密隆隆起起,深深入入琼琼脂脂,外周由颗粒包绕。外周由颗粒包绕。液体培养基:液体培养基:清亮清亮需需需需用用用用放放放放大大大大镜镜镜镜/低低低低倍
4、显微镜观察倍显微镜观察倍显微镜观察倍显微镜观察支原体是污染细胞培养的重要原因之一支原体是污染细胞培养的重要原因之一 鉴别点 支原体 细菌L型细胞壁缺失原因 在遗传上与细菌无关 与原菌相关,可以回复细胞膜 含高浓度固醇 细胞膜不含固醇 培养特性 需要胆固醇 大多需要高渗培养 菌落大小 生长慢,菌落小 菌落稍大(0.61.0)液体培养 液体培养混浊度极低 一定混浊度,可附壁支原体与细菌L型的异同点n 不同点缺乏细胞壁,形态多样,能通过滤菌器。缺乏细胞壁,形态多样,能通过滤菌器。缺乏细胞壁,形态多样,能通过滤菌器。缺乏细胞壁,形态多样,能通过滤菌器。固体培养固体培养固体培养固体培养菌落呈荷包蛋样或颗
5、粒状。菌落呈荷包蛋样或颗粒状。菌落呈荷包蛋样或颗粒状。菌落呈荷包蛋样或颗粒状。临床表现相似临床表现相似临床表现相似临床表现相似间质性肺炎、泌尿生殖道感染、不育等间质性肺炎、泌尿生殖道感染、不育等间质性肺炎、泌尿生殖道感染、不育等间质性肺炎、泌尿生殖道感染、不育等n 相同点 支原体支原体 葡萄糖葡萄糖 精氨酸精氨酸 尿素尿素 吸附细胞吸附细胞 致病性致病性 肺炎支原体肺炎支原体 +红细胞红细胞 肺炎、支气管炎肺炎、支气管炎人型支原体人型支原体 +泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染生殖器支原体生殖器支原体 +泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染穿透支原体穿透支原体 +红细胞红细胞 条件感染条件感染 CD4+T细
6、胞细胞 多见于艾滋病多见于艾滋病 巨噬细胞巨噬细胞 溶脲脲原体溶脲脲原体 +泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染 流产及不孕不育流产及不孕不育 3、生化反应溶脲脲原体分解尿素产氨,是酚红变红,液体清亮,为阳性(右)(四)抗原结构抗原结构 来自细胞膜,胞膜外层蛋白质是主要抗原,来自细胞膜,胞膜外层蛋白质是主要抗原,常用生长抑制试验常用生长抑制试验(GIT)与代谢抑制试验与代谢抑制试验 (MIT)鉴定。鉴定。GIT是将吸有型特异性抗血清的滤纸片置于接种有是将吸有型特异性抗血清的滤纸片置于接种有支原体的固体培养基上,支原体的固体培养基上,经孵育出现同型血清抑制经孵育出现同型血清抑制该型支原体生长现象。该型支
7、原体生长现象。MIT是将支原体接种在含有抗血清培养基中,若抗是将支原体接种在含有抗血清培养基中,若抗体与支原体型一致,则抑制该支原体不能分解葡萄体与支原体型一致,则抑制该支原体不能分解葡萄糖产酸。此两种方法可将支原体分成若干血清型。糖产酸。此两种方法可将支原体分成若干血清型。(五)抵抗力(五)抵抗力 对对对对脂溶剂化学消毒剂敏感,对结脂溶剂化学消毒剂敏感,对结脂溶剂化学消毒剂敏感,对结脂溶剂化学消毒剂敏感,对结 晶紫、醋酸铊、亚碲酸钾有抵抗力;晶紫、醋酸铊、亚碲酸钾有抵抗力;晶紫、醋酸铊、亚碲酸钾有抵抗力;晶紫、醋酸铊、亚碲酸钾有抵抗力;对影响细胞壁合成的抗生素如青对影响细胞壁合成的抗生素如青
8、对影响细胞壁合成的抗生素如青对影响细胞壁合成的抗生素如青 霉素类天然耐受,但对干扰蛋白霉素类天然耐受,但对干扰蛋白霉素类天然耐受,但对干扰蛋白霉素类天然耐受,但对干扰蛋白 质合成的抗生素如强力霉素等敏感。质合成的抗生素如强力霉素等敏感。质合成的抗生素如强力霉素等敏感。质合成的抗生素如强力霉素等敏感。二、致病性与免疫性顶端结构与宿主细胞上受体结合而粘附于细胞上顶端结构与宿主细胞上受体结合而粘附于细胞上荚膜或微荚膜的抗吞噬作用荚膜或微荚膜的抗吞噬作用产生毒性代谢产物产生毒性代谢产物超抗原,刺激炎症细胞分泌大量细胞因子超抗原,刺激炎症细胞分泌大量细胞因子粘附、侵入粘附、侵入CD4 TCD4 T淋巴细
9、胞(穿透支原体)淋巴细胞(穿透支原体)免疫性免疫性 体液免疫:抗膜蛋白的抗体包括体液免疫:抗膜蛋白的抗体包括体液免疫:抗膜蛋白的抗体包括体液免疫:抗膜蛋白的抗体包括 IgMIgM、IgGIgG和和和和SIgASIgA 细胞免疫细胞免疫细胞免疫细胞免疫:主要是特异性:主要是特异性:主要是特异性:主要是特异性CD4CD4Th1Th1 细胞分泌细胞因子细胞分泌细胞因子细胞分泌细胞因子细胞分泌细胞因子 第二节第二节 主要致病性支原体主要致病性支原体一一 肺炎支原体肺炎支原体n是下呼吸道重要的致病性支原体,所引起的人类是下呼吸道重要的致病性支原体,所引起的人类支原体肺炎占细菌性肺炎支原体肺炎占细菌性肺炎
10、50%左右,其病理变化以左右,其病理变化以间质性肺炎为主,又称之原发性非典型性肺炎。间质性肺炎为主,又称之原发性非典型性肺炎。症状轻,与胸片严重程度不符症状轻,与胸片严重程度不符(一)致病性 1.主要经飞沫传播,主要经飞沫传播,但大多数发生于夏但大多数发生于夏 末秋初,末秋初,515岁青少年发病率最高岁青少年发病率最高。2.含含特特殊殊的的顶顶端端结结构构:P1表表面面蛋蛋白白(170 kDa)和和P30(32 kDa)为为主主要要的的粘粘附附蛋蛋白白,使使肺肺炎炎支原体黏附于呼吸道上皮。支原体黏附于呼吸道上皮。3.肺肺炎炎支支原原体体具具有有超超抗抗原原作作用用,能能刺刺激激炎炎症症细细胞胞
11、在在感感染染部部位位释释放放大大量量的的淋淋巴巴因因子子(如如TNF-、IL-1、IL-6)引起组织损伤)引起组织损伤。致病性与免疫性致病性与免疫性所致疾病所致疾病-支原体肺炎支原体肺炎n传播途径传播途径 n经飞沫传播经飞沫传播n发病年龄发病年龄 n儿童及青少年多见儿童及青少年多见n潜伏期潜伏期 2 23W3Wn临床表现临床表现n发发热热(约约3939)、头头痛痛、持持续续性性顽顽固固咳咳嗽嗽、胸胸痛痛等等。一一般般经经3 310d10d主主要要症症状状消消失失,但但咳咳嗽可以持续嗽可以持续1 1个月之久。个月之久。免疫性免疫性 血血血血清清清清特特特特异异异异性性性性IgMIgM、IgGIg
12、G及及及及SIgASIgA和和和和致致致致敏敏敏敏的的的的淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞;呼呼呼呼吸吸吸吸道道道道局局局局部部部部黏黏黏黏膜膜膜膜产产产产生生生生的的的的SIgASIgA对对对对防防防防止止止止再再再再感染有较强保护作用感染有较强保护作用感染有较强保护作用感染有较强保护作用;出出出出现现现现IgEIgE介介介介导导导导的的的的I I型型型型超超超超敏敏敏敏反反反反应应应应,促促促促使使使使哮哮哮哮喘病急性发作喘病急性发作喘病急性发作喘病急性发作 (一)分离培养 痰或咽拭子接种在SP-4培养基,挑选可疑菌落,经形态学、糖发酵、溶血性、血细胞吸附试验进行初步鉴定,进一步鉴定需用特
13、异性抗血清做GIT与MIT实验。三、微生物学检查法三、微生物学检查法三、微生物学检查法三、微生物学检查法(二)血清学检查(二)血清学检查 冷凝集试验冷凝集试验冷凝集试验冷凝集试验:即即即即用用用用病病病病人人人人血血血血清清清清与与与与人人人人OO型型型型血血血血红红红红细细细细胞胞胞胞或或或或自自自自身身身身红红红红细细细细胞胞胞胞混混混混合合合合,4 4过过过过夜夜夜夜时时时时可可可可发发发发生生生生凝凝凝凝集集集集,而而而而在在在在3737时时时时这这这这种种种种凝凝凝凝集集集集又又又又分分分分散散散散解解解解离离离离开开开开,但但但但仅仅仅仅5050左左左左右右右右的的的的患患患患者者
14、者者才才才才出出出出现现现现阳阳阳阳性性性性。此此此此反反反反应应应应为非特异性。为非特异性。为非特异性。为非特异性。快速诊断快速诊断快速诊断快速诊断 ELISAELISA:检测检测检测检测P1P1和和和和P30P30蛋白蛋白蛋白蛋白mAbsmAbs PCRPCR:从痰标本中检测从痰标本中检测从痰标本中检测从痰标本中检测16S rRNA16S rRNA或或或或 P1P1蛋白基因蛋白基因蛋白基因蛋白基因ELISA:此此法法敏敏感感,特特异异性性高高,快快速速、经经济济,并并可可检检测测IgM和和IgG抗抗体体,为为目目前前诊诊断断的的可可靠靠方方法法。检检测测分分子子量量190kDa的的P1蛋蛋
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