肺腺癌组织中piR-30636的表达、临床意义及对迁移的影响.pdf
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1、 年第卷第期医学理论与实践肺腺癌组织中 的表达、临床意义及对迁移的影响张小丹 王喻烨 严雪冰 王成海 扬州大学医学院江苏省扬州市 东台市中医院摘要 目目的的:研究 在肺腺癌()中的表达水平探讨其与肺腺癌临床病理资料的相关性以及对肺腺癌细胞迁移的影响 方方法法:实时荧光定量聚合酶链反应()检测 对 组织中 的表达水平 原位杂交()检测 在 组织中的阳性表达并分析 表达与临床病理资料的相关性 实验检测 对肺癌细胞 的迁移影响 结结果果:检测发现在 组织中 的表达水平明显高于癌旁正常肺组织两组间差异有统计学意义(.)检测结果显示在 组织中 主要为阳性表达阳性细胞胞浆中显现棕黄色 阳性率为.(/)明显
2、高于邻近正常组织的.(/)两组间差异有统计学意义(.)表达水平与临床病理资料关系分析表明:阳性表达与肿瘤分级、淋巴结转移密切相关(.)实验结果提示过表达 促进了癌株 的迁移而沉默 表达则阻碍了癌株 的迁移与对照组相比两组间差异有统计学意义(均 .)结结论论:在 组织表达水平上调其表达水平与患者的淋巴结转移和肿瘤分化密切相关能促进肺癌细胞的迁移 本次实验为进一步研究肺腺癌伴有淋巴结转移机制提供了一定的理论依据 有可能成为治疗转移性肺腺癌的新靶点 江苏省卫生健康委科研项目()通信作者:王成海关键词 肺腺癌 临床意义 迁移中图分类号:.文献标识码:/.:().:().().:(.).(/).(/)(
3、.).(.).(个月患者具有良好的器官功能()排除标准:合并其他部位恶性肿瘤者合并脑转移药物不可控制的高血压收缩压(.)舒张压心、肝、肾功能不全自身免疫性疾病、感染性疾病患者有出血倾向或正接受抗凝治疗者 收集 例配对的 组织和邻近的正常肺组织以及相关病理资料 本实验经扬州大学医学院伦理委员会批准并与患者签署知情同意书.质 粒 和 细 胞 和 质粒合成于南京金斯瑞生物科技公司 肺上皮细胞系 和人肺腺癌细胞系 购自上海中科院细胞库 通过 细胞转染试剂盒将 和 质粒转染至 宫颈癌细胞株并将细胞株均放置在含 胎牛血清 培养基的培养瓶中然后放置在 含有 浓度细胞培养箱内进行培育.实时荧光定量 实验肺腺癌
4、总 的抽提是通过 试剂裂解萃取并通过分光光度计测定 浓度 然后通过 公 司 的 合成 试 剂 盒 合 成 实 时 荧 光 定 量 运 用 试 剂 盒(公 司)并 按 试 剂 说 明 书 进 行 的 上 游 引 物 为 下游引物为 将包含反应体系的检测样本在 进行 实验实验步骤包括:()预变性:时间为 ()反应:重复:个循环 时间为 时间为.原位杂交检测 的表达 例新鲜标本进行组织切片 在室温下过氧化氢处理可消除内源性过氧化物酶 使用胃蛋白酶消化组织切片 用预杂交液在培养箱中孵育组织切片然后加入杂交液孵育 清洗后加入密封液 加入生物素化地高辛 组织中加入 加入生物素化过氧化物酶 组织进行 染色、
5、苏木精复染、洗涤、脱水、透明、封闭 用预杂交液代替含有探针的杂交液作为空白对照 寡核苷酸探针序列为:()()每个样本取 个高倍视野计算阳性细胞比例:阳性细胞数/总细胞数.迁移实验首先将细胞在无血清的培养液饥饿 胰酶消化后制备无血清培养液重悬细胞(/)取细胞悬液 加到 小室中央中下室加入.的 培养液将小室放进 、培养箱中培养 取出 小室 清洗后甲醇固定 将 小室适当风干.结晶紫染色 左右用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞用 洗 次 倍光学显微镜下随即挑选 个视野观察迁移的细胞并计数穿膜的 细胞个数并拍照 分组包括过表达 组、沉默表达()组和正常 细胞()组.统计学方法使用.和 .软件分析数据和编辑图片
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