2021—2023年玉林市部分规模猪场伪狂犬病抗体检测与分析报告.pdf

3820212023 年玉林市部分规模猪场伪狂犬病抗体检测与分析报告刘香林 黄 宇（玉林市动物疫病预防控制中心，广西玉林 537000）摘 要：为了解 20212023 年玉林市规模化猪场伪狂犬病病毒（PRV）野毒抗体和疫苗抗体情况，本研究利用 ELISA 检测方法对 20212023 年玉林市 140 个规模化猪场的 2 903 份血清进行了伪狂犬病毒 gE 抗体（以下简称 PRV gE 抗体）和伪狂病毒抗体（以下简称 PRV 抗体）检测，并对检测结果进行了不同年份和不同生长阶段分析。结果显示：20212023 年 PRV gE抗体场阳性总数为 5 个，近 3 年场阳性率分别为 4.55%、4.44%和 1.96%，平均为 3.57%，连续 3 年 PRV gE 抗体场阳性率呈现下降趋势；PRV gE 抗体个体阳性总数为 65 份，3 年内 PRV gE 抗体个体阳性率分别为 3.56%、2.57%和 0.77%，平均为 2.24%，也呈现逐年下降趋势，说明 PRV 野毒近 3 年在玉林市部分规模猪场得到了良好的控制。PRV 疫苗抗体场阳性率连续 3 年都是 100.00%，个体阳性率 3 年分别为 81.88%、86.39%、83.13%，平均为 83.78%，表明玉林市规模猪场 PRV 疫苗免疫后抽样检测的血清整体表现出较高的免疫合格率，但对不同年度、不同生长阶段猪群免疫血清统计结果中发现，3年期间，育肥猪群和保育猪群 PRV 疫苗抗体都低于该年度猪群平均 PRV 疫苗抗体合格率，提示玉林市规模猪场的育肥猪和保育猪还有提升 PRV 疫苗抗体合格率的空间。PRV gE 抗体还在个别猪场存在，各猪场根据需要灵活监控 PRV gE 抗体和PRV 疫苗抗体免疫情况并及时补免，对 PRV gE 抗体阳性猪只及时隔离或剔除。关键词:猪伪狂犬病；抗体检测；酶联免疫吸附试验（ELISA）伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，简称 PRV）属疱疹病毒 I 型、甲型疱疹病毒亚科、水痘病毒属，又称猪疱疹病毒I型，也称为奥叶兹基氏病（Aujeszky disease，AD）1，病毒基因组为线状双股 DNA，病毒颗粒为球形 20 面体对称，有囊膜，只有一个血清型。PRV 呈世界性分布，在动物的外周神经内定植，为多种动物共患病，除猪以外，其他动物（包含马、牛、羊、犬、猫、家兔、小鼠、狐狸、浣熊等）感染后表现为发热、奇痒和脑脊髓炎等典型症状，均为致死性感染，病例多呈散发性。猪为该病的储存宿主和传染源，感染后可终生带毒、排毒2-3。在猪群中可水平传播，也可垂直传播，通常因日龄而表现不同症状：2 周龄内仔猪病死率可高达 100%，以中枢神经系统障碍为主要表现症状，高热、呼吸困难、流涎、呕吐、腹泻、神经症状、运动失调、四肢划水状、间歇性抽搐、昏迷，最后衰竭而亡；断乳仔猪发病率为 20%40%，病死率为 10%20%；成年猪感染后症状轻微，轻度体温升高或不表现任何症状的隐性感染，种猪表现不育，睾丸肿胀萎缩等，影响种用性能；怀孕母猪可发生流产、木乃伊胎儿或死胎4。1813 年美国首次报道牛感染 PR 的发病症状5，1947 年我国首次报道 PR 病例，20 世纪 80 年代后 PR 在中国报道越来越多，PRV也产生了变异6-7，几十年间给我国养猪业造成了不小的经济损失，时至今日 PR 在我国仍时有发生8-9。伪狂犬病作为猪场常见多发疾病，绝大多数猪场都会使用疫苗进行免疫预防。目前，猪场预防控制和净化 PRV 比较常用的疫苗主要是 PRV gE 基因缺失疫苗（简称 PRV 疫苗）。使用该疫苗除了可以在猪体内产生相应抗体减少 PRV 病毒感染几率外，还可通过血清学 ELISA 检测方法区分 PRV 疫苗抗体和野毒抗体，适合规模养殖场的大面积筛查和剔除血清抗体阳性猪。免疫 PRV 疫苗猪血清不会产生 gE 抗体，而 PRV野毒感染猪则产生 gE 抗体。具体操作方法是首先用 gE 抗体检测试剂盒检测猪血清，根据前者检测结果可获得 PRV 野毒在猪场血清中产生抗体情况，在排除野毒感染的情况下，PRV抗体检测结果才代表 PRV 疫苗在猪场血清抗体产生情况（见表 1）。血清 PRV gE 抗体检测阳性，PRV抗体结果为阴性，表示该血清中有野毒抗体，无疫苗抗体；血清PRV gE抗体和PRV 抗体结果都为阳性，表示该血清中有野毒抗体，可能有疫苗抗体；血清 作者简介：刘香林（1980），女，广西玉林人，本科，副高级兽医师，研究方向：动物医学。2023 年第 15 期 总第 103 期疾病防控39 PRV gE 抗体和 PRV 抗体结果都为阴性，表示该血清中无野毒抗体和疫苗抗体；血清PRV gE抗体阴性，PRV 抗体结果为阳性，表示该血清中无野毒抗体，有疫苗抗体。表 1 PRV gE 抗体检测结果和 PRV 抗体检测结果判定 血清血清血清血清 gE 抗体+-PRV 抗体-+-+结果判定有野毒抗体无疫苗抗体有野毒抗体可能有疫苗抗体无野毒抗体无疫苗抗体无野毒抗体有疫苗抗体 为了解玉林市 20212023 年免疫了 PRV 疫苗的规模猪场血清中 PRV 野毒抗体（PRV gE 抗体）情况和PRV 疫苗抗体情况，本研究对 20212023 年全市 140个规模化猪场的 2 903 份猪血清用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测 PRV gE 抗体和 PRV 抗体。根据检测检结果对不同年度和不同生长阶段规模猪场 PRV gE抗体和 PRV 抗体进行汇总分析，以期对猪场之后的 PRV防控和免疫接种计划提供参考。1 材料与方法1.1 待检血清 20212023 年从玉林市 7 个县（市、区）免疫过PRV 疫苗的规模猪场采集不同生长阶段猪血清，包含公猪、母猪、断奶仔猪、保育猪和育肥猪，2021 年采集 44 个猪场血清 927 份，2022 年采集 45 个猪场血清 933 份，2023 年采集 51 个猪场 1 043 份，3 年采集猪场共计140个，猪血清共计2 903份，7个县（市、区）每年采集的猪场数量和血清样本数量见表 2，每年采集不同生长阶段血清样本数量见表 3。采集的血样带回实验室及时离心，经 3 000 r/min 离心 5 10 min 后将无溶血、清亮透明的血清装入干净的EP管中，-20保存备用。1.2 主要试剂与仪器 PRV gE 抗体和 PRV 抗体检测试剂盒，购自北京万博百测生物科技有限公司。酶标仪为赛默飞世尔(上海)仪器有限公司生产，型号为 Multiskan Mk3。1.3 血清 PRV gE 抗体和 PRV 抗体检测方法 血清样本均严格按照北京万博百测生物科技有限公司生产的 PRV gE 抗体和 PRV 抗体检测试剂盒操作规程进行检测。2 结果2.1 不同年度 PRV 抗体检测结果 为便于计算和描述，在统计 PRV 抗体的个体检测结果时，将其分成三类，一类：血清检测结果如表 1所示血清和血清的结果计入 PRV gE 抗体个体阳性；二类：检测结果如血清所示的结果计入 PRV 抗体个体阴性；三类：检测结果如血清所示的结果计入 PRV 疫苗抗体个体阳性。PRV gE 抗体个体有 1 份及以上阳性则记入 PRV gE 阳性场，PRV 疫苗抗体有 1 份及以上阳性则记入 PRV 疫苗抗体阳性场。以年度为统计参数进行统计，PRV gE 抗体场阳性率和个体阳性率连续 3 年呈下降趋势，分别从 2021年的 4.55%和 3.56%下降至 2023 年的 1.96%和0.77%。PRV 抗体场阴性率连续 3 年都为 0，个体阴性率 2022 年最低为 11.04%，最高为 2023 年的16.11%。PRV 疫苗抗体场阳性率连续 3 年为 100%，PRV 疫苗抗体个体阳性率最低为 2021 年的 81.88%，最高为 2022 年的 86.39%（结果详见表 4）。表 2 20212023 年玉林市 7 个县（市、区）血清采集情况县（市、区）2021 年2022 年2023 年猪场/个血清样本/份猪场/个血清样本/份猪场/个血清样本/份A8165918110207B715281578166C815861328157D613061287142E612751147138F511261136123G48351085110合计4492745933511043表 3 不同生长阶段猪血清采集数量（单位：份）生长阶段2021 年2022 年2023 年公猪768198后备母猪91102128经产母猪157149147仔猪185176197保育猪251245264育肥猪167180209合计927933104340表 4 不同年度 PRV 抗体检测结果（单位：%）年份PRV gE 抗体PRV 抗体PRV 疫苗抗体场阳性率个体阳性率场阴性率个体阴性率场阳性率个体阳性率20214.55（2/44）3.56（33/927）0（0/44）14.13（131/927）100.00（44/44）81.88（759/927）20224.44（2/45）2.57（24/933）0（0/45）11.04（103/933）100.00（45/45）86.39（806/933）20231.96（1/51）0.77（8/1043）0（0/51）16.11（168/1043）100.00（51/51）83.13（867/1043）合计3.57（5/140）2.24（65/2903）0（0/140）13.85（402/2903）100.00（140/140）83.78（2432/2903）2.2 不同年度不同生长阶段 PRV 抗体检测结果 对不同年度、不同生长阶段 PRV 抗体检测结果统计发现，本次抽样检测的公猪血清连续 3 年 PRV gE抗体个体阳性率均为 0%。在不同生长阶段猪群中，仔猪 PRV gE 抗体个体阳性率连续 3 年都为最高，分别为 8.65%、7.95%和 2.54%，但与后备母猪、经产母猪、保育猪、育肥猪一样，在 20212023 三年内 PRV gE 抗体个体阳性率都呈现出逐年下降趋势。PRV 抗体个体阴性率连续 5 年最高的猪群为育肥猪，分别为 46.71%、26.67%和 39.23%，其次是保育猪，分别为 15.94%、12.65%和 23.48%，两猪群PRV 抗体个体阴性率均高于当年的平均值，且 3 年间阴性率呈现出“高-低-高”的状态。公猪 PRV 疫苗抗体阳性率 2021 年和 2022 年均为 100%，2023 年阳性率为 98.98%，为疫苗抗体阳性率最高的猪群。PRV 疫苗抗体个体阳性率连续 3年最低的都为育肥猪，分别为 52.10%、72.78%和60.77%，其次是保育猪，分别为 80.08%、84.90%和 75.76%，两猪群 PRV 疫苗抗体阳性率均低于当年的平均值，且呈现出“低-高-低”的状态。3 讨论 从 20212023 年玉林市部分规模猪场 PRV 抗体检测结果可知，PRV gE 抗体阳性率在 3 年内呈下降趋势，这源于 2018 年开始传入我国的非洲猪瘟疫情，迫使呼吁了几十年的生物安全管理升级并得到落实，极大改变了玉林市乃至全国养猪业的格局。PRV 疫苗抗体场阳性率连续 3 年都是 100%，与此次采样研究对象均免疫过 PRV 疫苗有关。PRV 疫苗抗体个体阳性率最低是 2021 年的 81.88%，最高是2022 年的 86.39%，虽然 2023 年比 2022 年略有下降，疫苗抗体个体阳性率为 83.13%，但 3 年平均值达到83.78%，表明玉林市免疫过 PRV 疫苗的规模猪场猪群整体还是处于一个较高的免疫水平，此次研究采样的规模猪场都非常重视疫苗免疫。从不同年度、不同生长阶段 PRV 抗体检测结果来看，公猪的 PRV gE 抗体连续 3 年都为阴性，表明对于规模猪场而言，种公猪数量少而珍贵，是重点免疫和筛查对象。后备母猪 2021 年有 1 份 PRV gE 抗体阳性，2022 和 2023 年未检出，后备母猪 PRV gE 抗体趋向阴性。经产母猪 PRV gE 抗体阳性连续 3 年都有检出，最多是 2021 年的 4 份，最少是 2023 年 1 份，说明玉林市规模猪场中经产母猪群还存在 PRV gE 抗体阳性猪，从而导致 3 年中每年仔猪的 PRV gE 抗体个体阳性率是几个猪群阳性率最高的，需引起养殖场的重视。PRV 疫苗抗体阳性率最低的是育肥猪，2021年为 52.10%,最高是 2022 年的 72.78%，2023 年比2022 年有所下降为 60.77%，表明规模猪场育肥猪群的 PRV 免疫抗体阳性率还有较大的提升空间。抗体检测在猪 PRV 疫病防控中有非常重要的意义。2011 年之前，美国、欧洲、新西兰等国家利用PRV 基因缺失苗免疫猪群，配套相应的检测方法，开展了 PR 的根除计划，取得了不错的效果10。尽管我国从 20 世纪 70 年代末引入 PRV Bartha-K61 自然缺失弱毒株疫苗，控制了PR在中国的大规模流行，但由于国内生产工艺和佐剂因素差异，各生物制品公司生产出来的基因缺失苗含毒量有差异，猪场使用后产生的有效抗体持续时间不同，导致 PRV 不断产生变异，从而使基因缺失苗产生的抗体不足以对所有的变异株提供保护11-12。因此，猪场防控 PR 的策略需从单靠疫苗免疫预防，转变为继续坚持严格的生物安全防控措施，以疫苗免疫为基础，结合血清学检测为手段，剔除 PRV gE抗体阳性猪，建立 PRV gE 抗体阴性猪群为目标。通过2023 年第 15 期 总第 103 期疾病防控41定期采集猪血清进行 PRV gE 和 PRV 抗体监测，区分野毒感染猪血清和基因缺失疫苗免疫猪血清，了解和评估猪场 PRV 野毒流行情况，将 PRV gE 抗体阳性猪隔离或剔除，适当调整免疫程序并适时补免PRV疫苗。PR 在我国经过几十年的免疫、控制和净化后，其对猪场的危害也逐渐降低13。2022 年 6 月 23 日农业农村部对一、二、三类动物疫病病种名录进行了修订，将多种动物共患病中的伪狂犬病从原来的二类动物疫病修订为三类动物疫病14。但国内外已有 PRV 从猪传人的相关病例并获得临床和实验室验证报道15-16，虽然并无数据表明会大规模向人体感染增殖，但需严防猪场工作人员在与 PRV 阳性猪密切接触后，病毒变异重组增加人体亲和力这一潜在的公共卫生安全因素。参考文献1 谢彩华,班付国,闫若潜,等.猪伪狂犬病病毒疑似感染人的实验室诊断及分析 J.中国动物检疫,2023,40(4)41-46.2 赵鹏飞.基于血清流行病学的猪瘟、猪繁殖与呼吸系统综合征和伪狂犬病风险评估模型与预警研究D.湖北:华中农业大学,2023.3 陈文雄.华南地区猪伪狂犬流行毒株的分离鉴定及 YC 株 gE 基因缺失灭活疫苗初步研究D.广州：华南农业大学，2018.4 陈金顶，黄青云，等.畜牧微生物学 M.北京：中国农业出版社，2017：240-241.5 HANSON R P.The history of pseudorabies in the United States J.J Am Vet Med Assoc,1954,124(925):259-261.6 周金柱 Bartha k61株疫苗对猪伪狂犬病病毒变异株的免疫保护及变异株生物学特性的初步研究 D 扬州：扬州大学，20187 王一鹏，王亚文，徐瑞涛，等 一株分离自免疫猪场的伪狂犬病病毒的鉴定与变异分析J 畜牧兽医学报，2019，50(10)：2070-2078 8 洪枫,孟沛,魏旭文.一例规模猪场猪伪狂犬病净化及效益评估 J.猪业科学，2024,41(01):60-61.9 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