残留溶剂测定法检验标准操作规程.doc

1. 目的：建立残留溶剂测定法(二部)检查标准操作规程，并按规程进行检查，保证检查操作规范化。
2. 依据：
2.1. 《中华人民共和国药典》2023年版二部。
3. 范围：合用于所有用残留溶剂测定法(二部)测定的供试品。
4. 责任：检查员、质量控制科主任、质量管理部经理对本规程负责。
5. 正文：
5.1. 药品中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂。药品中常见的残留溶剂及限度见附表1，除另有规定外，第一、第二、第三类溶剂的残留限度应符合表1中的规定；对其他溶剂，应根据生产工艺的特点，制定相应的限度，使其符合产品规范、药品生产质量管理规范（GMP）或其他基本的质量规定。
5.2. 本法照气相色谱法（附录Ⅴ Ｅ）测定。
5.3. 色谱柱
5.3.1. 毛细管柱：除另有规定外，极性相近的同类色谱柱之间可以互换使用。
5.3.1.1. 非极性色谱柱：固定液为100%的二甲基聚硅氧烷的毛细管柱。
5.3.1.2. 极性色谱柱：固定液为聚乙二醇（PEG-20M）的毛细管柱。
5.3.1.3. 中性色谱柱：固定液为（35%）二苯基-（ 65%）甲基聚硅氧烷、（50%）二苯基-（50%）二甲基聚硅氧烷、（35%）二苯基-（ 65%）二甲基聚硅氧烷、（14%）
氰丙基苯基-（86%）二甲基聚硅氧烷、（6%）氰丙基苯基-（94%）二甲基聚硅氧烷的毛细管柱等。
5.3.1.4. 弱极性色谱：柱固定液为（5%）苯基-（95%）甲基聚硅氧烷、（5%）二苯基-（95%）二甲基硅氧烷的毛细管柱等。
5.3.2. 填充柱：以直径为0.18～0.25mm 的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他适宜的填料作为固定相。
5.4. 系统合用性实验。
5.4.1. 用待测物的色谱峰计算，毛细管色谱柱的理论板数一般不低于5000；填充柱的理论板数一般不低于1000。
5.4.2. 色谱图中，待测物色谱峰与其相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
5.4.3. 以内标法测定期，对照品溶液连续进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差（RSD）不大于5％；若以外标法测定,所得待测物峰面积的RSD应不大于10％。
5.5. 供试品溶液的制备。
5.5.1. 顶空进样：除另有规定外，精密称取供试品0.1～1g，通常以水为溶剂；对于非水溶性药物，可采用N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或其他适宜溶剂；根据供试品和待测溶剂的溶解度，选择适宜的溶剂且应不干扰待测溶液的测定。根据各品种项下残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，其浓度应满足系统定量测定的需要。
5.5.2. 溶液直接进样：精密称取供试品适量，用水或合适的有机溶剂使溶解；根据各品种项下残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，其浓度应满足系统定量测定的需要。
5.6. 对照品溶液的制备：精密称取各品种项下规定检查的有机溶剂适量，采用与制备供试品溶液相同的方法和溶剂制备对照品溶液；如用水作溶剂，应先将待测有机溶剂溶解在50%二甲基亚砜或N,N-二甲基甲酰胺溶液中，再用水逐步稀释。若为限度检查，根据残留溶剂的限度规定拟定对照品溶液的浓度；若为定量测定，为保证定量结果的对的性，应根据供试品中残留溶剂的实际残留量拟定对照品溶液的浓度；通常对照品溶液的色谱峰面积不宜超过供试品溶液中相应的残留溶剂的色谱峰面积2倍。必要时，应重新调整供试品溶液或对照品溶液的浓度。
5.7. 测定法。
5.7.1. 第一法（毛细管柱顶空进样等温法）。
5.7.1.1. 当需要检查有机溶剂的数量不多，且极性差异较小时，可采用此法。
5.7.1.2. 色谱条件：柱温一般为40~100℃；常以氮气为载气，流速为每分钟1.0~2.0ml；以水为溶剂时顶空瓶平衡温度为70～85℃，顶空瓶平衡时间为30～60分钟；进样口温度为200℃ ；如采用火焰离子化检测器（FID），温度为 250℃。
5.7.1.3. 测定法：取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。
5.7.1.4. 对色谱图中未知有机溶剂的鉴别，可参与附表2进行初筛。
5.7.2. 第二法（毛细管柱顶空进样系统程序升温法）。
5.7.2.1. 当需要检查的有机溶剂数量较多，且极性差异较大时，可采用此法。
5.7.2.2. 色谱条件：柱温一般先在40℃维持8分钟，再以每分钟8℃的升温速率升至120℃，维持10分钟；以氮气为载气，流速为每分钟2.0ml；以水为溶剂时顶空瓶平衡温度为70～85℃，顶空瓶平衡时间为30～60分钟；进样口温度为200℃；如采用FID检测器，进样口温度为250℃。
5.7.2.3. 具体到某个品种的残留溶剂检查时，可根据该品种项下残留溶剂的组成调整升温程序。
5.7.2.4. 测定法：取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。
5.7.2.5. 对色谱图中未知有机溶剂的鉴别，可参考附表3进行初筛。
5.7.3. 第三法（溶液直接进样法）。
5.7.3.1. 可采用填充柱，亦可采用适宜极性的毛细管柱。
5.7.3.2. 测定法：取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样2～3次，测定待测峰的峰面积。
5.7.3.3. 计算法。
5.7.3.3.1. 限度检查：除另有规定外，按品种项下规定的供试品溶液浓度测定。以内标法测定期，供试品溶液所得被测溶剂峰面积与内标峰面积之比不得大于对照品溶液的相应比值。以外标法测定期，供试品溶液所得被测溶剂峰面积不得大于对照品溶液的相应峰面积。
5.7.3.3.2. 定量测定：按内标法或外标法计算各残留溶剂的量。
5.8. 【附注】。
5.8.1. 除另有规定外，顶空条件的选择。
5.8.1.1. 应根据供试品中残留溶剂的沸点选择顶空平衡温度。对沸点较高的残留溶剂，通常选择较高的平衡温度；但此时应兼顾供试品的热分解特性，尽量避免供试品产生的挥发性热分解产物对测定的干扰。
5.8.1.2. 顶空平衡时间一般为30~45分钟，以保证供试品溶液的气-液两相有足够的时间达成平衡。顶空平衡时间通常不宜过长，如超过60分钟，也许引起顶空瓶的气密性变差，导致定量准确性的减少。
5.8.1.3. 对照品溶液与供试品溶液必须使用相同的顶空条件。
5.8.2. 定量方法的验证。
5.8.2.1. 当采用顶空进样时，供试品与对照品处在不完全相同的基质中，故应
考虑气液平衡过程中的基质效应（供试品溶液与对照品溶液组成差异对顶空气-液平衡的影响）。由于标准加入法可以消除供试品溶液基质与对照品溶液基质不同所致的基质效应的影响，故通常采用标准加入法验证定量方法的准确性；当标准加入法与其他定量方法的结果不一致时，应以标准加入法的结果为准。
5.8.3. 干扰峰的排除：供试品中的未知杂质或其挥发性热降解物易对残留溶剂的测定产生干扰。干扰作用涉及在测定的色谱系统中未知杂质或其挥发性热降解产物与待测物的结构相同（如甲氧基热裂解产生甲醇）。当测定的残留溶剂超过限度，但未能拟定供试品中是否有未知杂质或其挥发性热降解物对测定有干扰作用时，应通过实验排除干扰作用的存在。对第一类干扰作用，通常采用在另一种极性不同的色谱柱系统中对相同供试品再进行测定，比较不同色谱系统中对相同供试品再进行测定，比较不同色谱系统中测定结果的方法。如两者结果一致，则可以排除测定中有共出峰的干扰。对第二类干扰作用，通常要通过测定已知不含该溶剂的对照样品来加以判断。
5.8.4. 含氮碱性化合物的测定。
5.8.4.1. 普通气相色谱仪中的不锈钢管路、进样器的衬管等对有机胺等含氮碱性化合物具有较强的吸附作用，致使其检出灵敏度减少，应采用惰性的硅钢材料或镍钢材料管路；采用溶液直接进样法测定期，供试品溶液应不呈酸性，以免待测物与酸反映后不易汽化。
5.8.4.2. 通常采用弱极性的色谱柱或其填料预先经碱解决过的色谱柱分析含氮碱性化合物，假如采用胺分析专用柱进行分析，效果更好。
5.8.4.3. 对不宜采用气相色谱法测定含氮碱性化合物，如N-甲基吡咯烷酮等，可采用其他方法如离子色谱法等测定。
5.8.5. 检测器的选择：对含卤素元素的残留溶剂如三氯甲烷等，采用电子捕获检测器（ECD），易得到高的灵敏度。
5.8.6. 由于不同的实验室在测定同一供试品时也许采用了不同的实验方法，当测定结果处在合格与不合格边沿时，以采用内标或标准加入法为准。
5.8.7. 顶空平衡温度一般应低于溶解供试品所用溶剂的沸点10℃以下，能满足检测灵敏度即可；对于沸点过高的溶剂，如甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等，用顶空进样测定的灵敏度不如直接进样，一般不宜用顶空进样方法测定。
5.8.8. 运用保存值定性是气相色谱中最常用的定性方法。色谱系统中载气的流速、载气的温度和柱温等的变化都会使保存值改变，从而影响定性结果。校正相对保存时间（RART）只受柱温和固定相性质的影响，以此作为定性分析参数较可靠。应用中通常选用甲烷测定色谱系统的死体积（）
RART=
式中 为组分的保存时间；
为参比物的保存时间。
附表1：药品中常见的残留溶剂及限度。
溶剂名称
限度%
溶剂名称
限度%
第一类溶剂
（应当避免使用）
苯
四氯化碳
1，2-二氯乙烷
1，1-二氯乙烷
1，1，1- 三氯乙烷
第二类溶剂
（应当限制使用）
乙腈
氯苯
三氯甲烷
环己烷
1,2-二氯乙烯
二氯甲烷
1,2-二甲基乙烷
N，N-二甲基乙酰胺N，N-二甲基甲酰胺

0.0002
0.0004
0.0005
0.0008
0.15

0.041
0.036
0.006
0.388
0.187
0.06
0.01
0.109
0.088
第二类溶剂
（应当限制使用）
二氧六环
2-乙氧基乙醇
乙二醇
甲酰胺
正己烷
甲醇
2-甲氧基乙醇
甲基丁基酮
甲基环己烷
N-甲基吡啶咯烷酮
硝基甲烷
吡啶
四氢噻吩
四氢化萘
四氢呋喃
甲苯
1,1,2-三氯乙烯
二甲苯①

0.038
0.016
0.062
0.022
0.029
0.3
0.005
0.005
0.118
0.053
0.005
0.02
0.016
0.01
0.072
0.089
0.008
0.217

溶剂名称
限度%
溶剂名称
限度%
第三类溶剂（药品GMP或其他质量规定限制使用）
醋酸
丙酮
甲氧基苯
正丁醇
仲丁醇
乙酸丁酯
叔丁基甲基醚
异丙基苯
二甲基亚砜
乙醇
乙酸乙酯
乙醚
甲酸乙酯
甲酸
正庚烷
乙酸异丁酯
乙酸异丙酯
乙酸甲酯
3-甲基-1-丁醇
丁酮

0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
第三类溶剂（药品GMP或其他质量规定限制使用）
甲基异丁基酮
异丁醇
正戊烷
正戊醇
正丙醇
异丙醇
乙酸丙酯
第四类溶剂（尚无足够毒理学资料）②
1,1-二乙氧基丙烷
1,1-二甲氧基甲烷
2,2-二甲氧基丙烷
异辛烷
异丙醚
甲基异丙基酮
甲基四氢呋喃
石油醚
三氯醋酸
三氟醋酸

0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5

① 通常具有60%间二甲苯、14%对二甲苯、9%邻二甲苯和17%乙苯。
② 药品生产公司在使用时应提供该类溶剂在制剂中残留水平的合理性论证报
告。
附表2 常见有机溶剂在等温法测定期相对于丁酮的保存值参考值
非极性色谱柱
极性色谱柱
溶剂名称
tR/min
RART
溶剂名称
tR/min
RART
柱温40℃
甲醇
乙醇
乙腈
丙酮
异丙醇
正戊烷
乙醚
甲酸乙酯
二甲氧基甲烷
1,1-二氯乙烯
乙酸甲酯
二氯甲烷
硝基甲烷
正丙醇
1,2-二氯乙烯
叔丁基甲基醚
丁酮
仲丁醇
正己烷
异丙醚
乙酸乙酯
三氯甲烷
四氢呋喃
异丁醇
1,2-二氯乙烷
1,1,1-三氯乙烷
甲基异丙基酮
1,2-二甲氧基乙烷
苯
乙酸异丙酯
正丁醇
四氯化碳
环己烷
甲基四氢呋喃
三氯乙烯
二氧六环
异辛烷
正庚烷
乙酸丙酯
甲基环己烷
甲基异丁基酮
3-甲基-1-丁醇
吡啶
甲苯
正戊醇
甲烷
柱温80℃
乙酸异丁酯
甲基丁基酮
乙酸丁酯
氯苯
甲氧基苯
异丙基苯
丁酮
甲烷
柱温120℃
四氢化萘
丁酮
甲烷

1.828
2.090
2.179
2.276
2.356
2.487
2.489
2.522
2.584
2.609
2.635
2.655
2.807
2.982
3.109
3.252
3.449
3.666
3.898
3.908
3.913
3.954
4.264
4.264
4.517
4.808
4.976
4.985
5.281
5.311
5.340
5.470
5.583
5.676
6.760
6.823
6.957
7.434
4.478
8.628
8.738
8.870
9.283
11.180
11.382
1.594

3.611
3.859
4.299
5.253
7.436
8.148
2.502
1.493

8.067
1.630
1.405

0.126
0.268
0.315
0.368
0.411
0.481
0.482
0.501
0.534
0.547
0.561
0.572
0.654
0.748
.817
0.894
1.000
1.117
1.242
1.247
1.250
1.272
1.439
1.440
1.576
1.733
1.823
1.828
1.988
2.004
2.019
2.089
2.150
2.201
2.785
2.819
2.891
3.148
3.172
3.792
2.851
3.922
4.145
5.168
5.276

2.099
2.345
2.778
3.726
5.890
6.589
1.000

29.609
1.000
柱温40℃
正戊烷
正己烷
乙醚
异辛烷
异丙醚
叔丁基甲基醚
正庚烷
环己烷
1,1-二氯乙烯
二甲氧基甲烷
甲基环己烷
丙酮
甲酸乙酯
乙酸甲酯
1，2-二氯乙烯
四氢呋喃
甲基四氢呋喃
四氯化碳
1,1,1-三氯乙烷
乙酸乙酯
乙酸异丙酯
甲醇
丁酮
1,2-二甲氧基乙烷
甲基异丙基酮
二氯甲烷
异丙醇
乙醇
苯
乙酸丙酯
三氯乙烯
甲基异丁基酮
乙腈
乙酸异丁酯
三氯甲烷
仲丁醇
甲苯
正丙醇
二氧六环
1,2-二氯乙烷
乙酸丁酯
甲基丁基酮
甲烷
柱温80℃
异丁醇
正丁醇
硝基甲烷
异丙基苯
吡啶
3-甲基-1-丁醇
氯苯
正戊醇
丁酮
甲烷
柱温120℃
甲氧基苯
四氢化萘
丁酮
甲烷

1.682
1.787
1.842
1.926
1.943
2.005
2.021
2.159
2.209
2.243
2.405
2.876
2.967
3.000
3.347
3.403
3.481
3.635
3.653
3.810
3.980
4.062
4.079
4.604
4.716
4.758
4.822
4.975
4.977
6.020
6.643
7.202
7.368
7.497
7.985
8.390
8.746
9.238
10.335
10.827
11.012
11.486
1.602

3.577
4.460
4.885
5.288
5.625
5.934
6.439
7.332
2.176
1.491

3.837
7.427
1.650
1.404

0.032
0.075
0.097
0.131
0.138
0.163
0.169
0.225
0.245
0.259
0.324
0.515
0.551
0.564
0.705
0.727
0.758
0.821
0.828
0.891
0.960
0.993
1.000
1.212
1.257
1.274
1.300
1.362
1.362
1.784
2.035
2.261
2.328
2.380
2.577
2.740
2.884
3.083
3.526
3.724
3.799
3.990

3.045
4.334
4.948
5.543
6.035
6.486
7.223
8.527
1.000

9.890
24.484
1.000
附表3 常见有机溶剂在程序升温法测定期相对于丁酮的保存值参考值
非极性色谱柱
极性色谱柱
溶剂名称
tR/min
RART
溶剂名称
tR/min
RART
甲醇
乙醇
乙腈
丙酮
异丙醇
正戊烷
乙醚
甲酸乙酯
二甲氧基甲烷
1,1-二氯乙烯
乙酸甲酯
二氯甲烷
硝基甲烷
正丙醇
1,2-二氯乙烯
叔丁基甲基醚
丁酮
仲丁醇
正己烷
异丙醚
乙酸乙酯
三氯甲烷
四氢呋喃
异丁醇
1,2-二氯乙烷
1,1,1-三氯乙烷
甲基异丙基酮
1,2-二甲氧基乙烷
苯
乙酸异丙酯
正丁醇
四氯化碳
环己烷
甲基四氢呋喃
三氯乙烯
异辛烷
二氧六环
正庚烷
乙酸丙酯
甲基环己烷
甲基异丁基酮
3-甲基-1-丁醇
吡啶
甲苯
正戊醇
乙酸异丁酯
甲基丁基酮
乙酸丁酯
氯苯
甲氧基苯
异丙基苯
四氯化萘
甲烷
1.846
2.121
2.201
2.303
2.401
2.512
2.519
2.544
2.611
2.623
2.665
2.674
2.839
3.051
3.128
3.302
3.507
3.756
3.966
3.971
3.981
4.005
4.387
4.397
4.6124
4.843
5.087
5.099
5.380
5.398
5.402
5.501
5.649
5.739
6.815
6.928
6.928
7.563
7.583
8.581
8.830
8.968
9.178
10.259
10.448
10.638
11.025
12.175
13.166
15.270
15.724
22.409
1.604
0.127
0.272
0.314
0.367
0.419
0.477
0.481
0.494
0.529
0.535
0.558
0.562
0.649
0.760
0.801
0.892
1.000
1.131
1.241
0.244
1.249
0.262
0.462
1.468
1.581
1.702
1.830
1.837
1.984
1.994
1.996
2.048
2.126
2.173
2.738
2.798
2.798
3.131
3.142
3.666
3.797
3.870
3.980
4.548
4.647
4.747
4.951
5.555
6.076
7.181
7.420
10.933
正戊烷
正己烷
乙醚
异辛烷
异丙醚
叔丁基甲基醚
正庚烷
环己烷
1,1-二氯乙烯
二甲氧基甲烷
甲基环己烷
丙酮
甲酸乙酯
乙酸甲酯
1，2-二氯乙烯
四氢呋喃
甲基四氢呋喃
四氯化碳
1,1,1-三氯乙烷
乙酸乙酯
乙酸异丙酯
甲醇
丁酮
1,2-二甲氧基乙烷
甲基异丙基酮
二氯甲烷
异丙醇
乙醇
苯
乙酸丙酯
三氯乙烯
甲基异丁基酮
乙腈
乙酸异丁酯
三氯甲烷
仲丁醇
甲苯
正丙醇
二氧六环
1,2-二氯乙烷
乙酸丁酯
甲基丁基酮
异丁醇
正丁醇
异丙基苯
硝基甲烷
吡啶
3-甲基-1-丁醇
氯苯
正戊醇
甲氧基苯
四氢化萘
甲烷
1.691
1.807
1.856
1.957
1.966
2.053
2.063
2.217
2.267
2.303
2.488
2.988
3.094
3.126
3.511
3.561
3.653
3.821
3.833
4.017
4.207
4.295
4.303
4.875
5.005
5.041
5.069
5.275
5.275
6.437
7.108
7.735
7.892
8.068
8.533
8.848
9.156
9.461
10.183
10.446
10.543
10.801
11.606
13.046
13.258
13.396
13.949
14.519
14.562
15.516
17.447
21.708
1.602
0.033
0.076
0.094
0.131
0.135
0.167
0.171
0.228
0.246
0.260
0.328
0.513
0.552
0.564
0.707
0.725
0.759
0.822
0.826
0.894
0.964
0.997
1.000
1.212
1.260
1.273
1.284
1.360
1.360
1.790
2.039
2.271
2.329
2.394
2.566
2.683
2.797
2.910
3.177
3.274
3.310
3.406
3.704
4.237
4.315
4.367
4.571
4.782
4.798
5.151
5.866
7.444
注：附表2、3中数据未非极性的SPB-1柱（30m×0.32mm,1.0μm）和极性的HP-INNOWAX柱（30m×0.32mm,0.5μm）测定的结果。