叠鞘石斛组织培养及植株再生体系优化_张珏.pdf
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1、第 卷 第 期 年 月 成都大学学报(自然科学版)()文章编号:():收稿日期:基金项目:四川中医药文化协同发展研究中心项目()作者简介:张 珏(),女,博士,讲师,从事药用植物资源利用与开发研究:通信作者:刘 帆(),男,硕士,副教授,从事药用植物种苗繁育研究:叠鞘石斛组织培养及植株再生体系优化张 珏,邬 江,赵心怡,刘 帆(成都大学 药学院,四川 成都;.成都理工大学附属小学,四川 成都;四川农业大学 农学院,四川 成都)摘 要:以叠鞘石斛成熟种子为材料,使用、和 共 种生长调节剂与香蕉泥和椰子汁有机物等组合,采用 因素 水平正交设计及单因素设计进行组织培养研究 结果显示,最佳叠鞘石斛原球
2、茎培养基为 椰子汁 蔗糖 琼脂,增殖系数为,分化率为;最佳叠鞘石斛壮苗生根培养基为 蔗糖 琼脂 通过该技术,可以在较短时间获得大批量优质叠鞘石斛种苗,为大规模叠鞘石斛药材生产提供基础关键词:叠鞘石斛;生长调节剂;组织培养;形态指标;植物再生;炼苗中图分类号:文献标志码:引 言 叠鞘石斛(又称迭鞘石斛)为兰科石斛属多年生草本植物,以茎入药,收载于四川省中药材标准中 其味甘、微寒,具有益胃生津,滋阴清热等功效 叠鞘石斛在生产过程中,以无性繁殖为主,主要采用分株繁殖方式,该方法费时费力,且环境适应性较差,不适合为大规模生产提供种苗目前对叠鞘石斛组织培养研究较少,已有研究表明,一定浓度的香蕉泥和椰子汁
3、有利于石斛属植物原球茎增殖 苄氨基腺嘌呤()是一种具有多种生物功能的植物生长调节剂,除了能促进细胞分裂,也可以促进种子发芽,抑制或促进根的生长;吲哚丁酸钾()促进生根作用较强,但产生的不定根细而长;萘乙酸()促进根生长和芽的分化作用较强 当适宜浓度的 与适宜浓度的 与 混合使用,既有利于原球茎的增殖分化,又可以提前生根发芽,明显促进根系生长 因此本研究采用植物组织快速培养方法,通过对培养基中生长调节剂的配比与有机添加物的浓度等进行筛选,探究叠鞘石斛组培苗的最佳增殖有机物浓度与增殖培养条件,建立叠鞘石斛快速繁殖体系 材料与方法 材 料叠鞘石斛成熟种子,由四川省雅安市石棉县丰乐乡种植基地提供,经四
4、川农业大学田孟良教授鉴定为叠鞘石斛种子 方 法 原球茎诱导培养以成熟未开裂、外表有黄褐色斑点的叠鞘石斛蒴果为外植体,对蒴果进行灭菌处理后,吸干外表水分,将其切开,抖动果荚将种子均匀撒播于 空白培养基中 培养温度为(),光照时数为 ,光照强度为 原球茎增殖培养以叠鞘石斛种子萌发出的原球茎为试验材料,以市售新鲜成熟香蕉与椰子作为天然有机物附加物,香蕉切块、捣碎,椰子取其汁液 采用单因素设计,并设置各有机物浓度梯度,见表 将有机物分别添加到 空白培养基 选出大小基本一致的原球茎,每瓶接种 丛(每 个原球茎为 丛),每处理接种 瓶,次重复 培养温度为(),暗培养 后,再转入光照恒温室培养,光照时数为
5、,光照强度为 每 观察 次并记录数据,后统计结果表 不同浓度有机物培养基配比处理方案试验编号不同有机物浓度()香蕉泥椰子汁 壮苗生根培养以不定芽生长高度约 ,长势基本一致的叠鞘石斛组培苗为试验材料,采用 因素 水平正交试验设计,设置生长调节剂浓度配比,共 个处理组,见表 将生长调节剂分别添加到培养基(),每瓶接种 株,每个处理 瓶,次重复 采用光照恒温培养,温度(),光照时数为 ,光照强度为 ,每 观察 次表 壮苗生根诱导的生长调节剂及浓度试验编号生长调节剂组合()炼苗移栽当约 的苗生长高度达到约 ,根长约 时,开盖后于温室炼苗,炼苗 后将苗取出,用清水洗去根部培养基后移栽至由红砂石 松树皮苔
6、藓比例为 的基质中,每个处理移栽 株苗,次重复 温度保持在(),每隔 浇水并记录组培苗生长情况,后统计存活率 结果与分析 种子萌发叠鞘石斛种子在 内随时间的增长萌发率逐渐提高,由黄色粉状种子发育成黄绿色原球茎,直径 左右,形如芝麻粒,部分直径 左右,如绿豆大小,结果见表 和图,表 原球茎诱导情况培养时间 萌发度原球茎生长情况黄绿色,但数量不明显 黄绿色,少数浅绿色 大部分浅绿色,部分如芝麻粒大小 浅绿色,大部分如芝麻粒大小,部分如绿豆大小 注:、和 为萌发度升序排列;代表萌发,代表 但 萌发,代表 但萌发,代表 萌发10 d20 d30 d40 d图 原球茎诱导情况 原球茎增殖由叠鞘石斛原球茎
7、增殖试验结果可知,椰子汁的增殖效果最佳,原球茎增殖系数为.;其次是 椰子汁,增殖系数为;空白培养基增殖效果最差,增殖系数为 随有机物浓度的增加,原球茎的增殖系数也随之提高,原球茎增殖效果均优于空白培养基,且色泽浅绿、生长致密、健壮 结果见表 和图 表 不同浓度有机物对原球茎增殖培养的影响编号增殖系数 原球茎生长情况 松散,黄绿色,如芝麻粒大小 簇生,浅绿色,如芝麻粒大小成都大学学报(自然科学版)第 卷 续表 编号增殖系数 原球茎生长情况 簇生,浅绿色,部分如绿豆大小 簇生,浅绿色,大部分如绿豆大小 簇生,浅绿色,大部分如绿豆大小(E)A5(A)A1(C)A3(B)A2(D)A4图 原球茎增殖情
8、况 原球茎分化由叠鞘石斛原球茎分化试验可知,椰子汁分化效果最佳,原球茎分化率为 ;空白培养基分化率最低,为 添加了香蕉泥或椰子汁的培养基,分化苗颜色浅绿,分化程度均高于空白培养基 添加香蕉泥()的培养基,分化苗虽高但较细长,且有少数畸形;而添加椰子汁的培养基,分化苗整齐且粗壮 结果见表 和图 表 不同浓度有机物对原球茎分化程度的影响编号分化率 原球茎分化情况 分化苗黄绿色,较高,部分畸形 分化苗浅绿色,极高,少数畸形 分化苗浅绿色,极高,少数畸形 分化苗浅绿色,整齐,粗壮 分化苗浅绿色,整齐,粗壮(A)空白对照(B)香蕉泥(C)椰子汁图 原球茎分化情况 生长调节剂对生长的显著性差异 由生长调节
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