LncRNA HAGLR靶向miR-625-5p对脂多糖诱导的视网膜色素上皮细胞凋亡和炎症因子表达的影响.pdf
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2、娟(:),女,年 月出生,湖北武汉人,博士,主治医师。研究方向:眼科疾病。:收稿日期:修回日期:本文编辑:付中静基金项目:国家卫生健康委“十三五”规划全国重点课题(编号:)作者单位:河南省濮阳市,濮阳医学高等专科学校(李晶);湖北省武汉市,武汉大学中南医院眼科(曾卫娟)【摘要】目的探讨长链非编码 ()是否可通过靶向调控微小 ()表达而影响脂多糖()诱导的视网膜色素上皮()细胞凋亡、炎症因子表达,为揭示视网膜病变机制奠定实验基础。方法将 诱导人视网膜色素上皮细胞()设为 组,正常培养的 细胞设为 组。实时荧光定量聚合酶链反应()检测 、表达水平。根据转染物不同分为 组、组、组、组、组、组。采用流
3、式细胞术检测细胞凋亡率;法检测白细胞介素 ()、白细胞介素 ()水平;验证 、靶向关系;检测活化的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶 ()、蛋白水平。结果与 组比较,组 表达水平升高,表达水平降低(均为 ),细胞凋亡率,、蛋白水平,、水平均升高(均为 )。与 组比较,组细胞凋亡率,、蛋白水平,、水平均降低(均为 );可负向调控 表达水平()。与 组比较,组 表达水平升高,细胞凋亡率,、蛋白水平,、水平均降低(均为 )。与 组比较,组 表达水平降低,细胞凋亡率,、蛋白水平,、水平均升高(均为 )。结论干扰 表达可通过靶向调控 表达抑制细胞凋亡、炎症因子表达,以减轻 诱导的 细胞损伤。【关键词】长链非编
4、码 ;微小 ;脂多糖;视网膜色素上皮细胞;细胞凋亡;炎症【中图分类号】视网膜色素上皮()细胞处于神经视网膜、脉络膜之间,可维持光感受器存活、视网膜内环境稳定,参与血 视网膜屏障、黄斑免疫防御等,其病变可引起年龄相关性黄斑变性等视网膜病 。因而明确 细胞损伤机制,有助于保护视网膜功能,以防视网膜疾病发生发展。长链非编码 ()可通过染色体重塑、转录后加工等方式调节基因表达,其差异表达可调控眼部疾病发生发展。研究发现,可调节 细胞生理功能,影响视网膜疾病发展进程 。可与内源性 竞争性结合微小 (),在炎症反应、心肌细胞凋亡等过程中发挥调控作用 。但 与视网膜病变相关研究报道相对较少。预测显示,与 微
5、 小 ()存在结合位点。但关于 对 细胞损伤的研究报道较少。因此,本研究旨在探讨 是否可通过靶向调控 表达参与 细胞损伤过程,为揭示视网膜病变机制及临床治疗奠定实验基础。材料与方法 材料与试剂人视网膜色素上皮细胞()购自上海启达生物公司;脂多糖()购自上海碧云天生物公司;阴性对照()、慢病毒短发夹 ()、阴性对照 序列()、寡核苷酸模拟物()、特异性寡核苷酸抑制剂阴性对照()、特异性寡核苷酸抑制剂()购自广州锐博生物公司;、购自上海吉玛生物公司;双荧光素酶活性检测试剂盒、野生型载体()、突变型载体()购自美国 公司;试剂、转染试剂 购自美国 公司;反转录试剂盒、试剂盒购自北京天根生化公司;凋亡
6、检测试剂盒、蛋白裂解液购自江苏凯基生物公司;白细胞介素 ()、白细胞介素 ()检测试剂盒购自上海酶研生 :眼 科新进展 年 月第 卷第 期 物公司;兔抗人活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶 ()抗 体、兔 抗 人 活 化 的 抗体、内参 、二抗购自美国 公司。方法 实验分组 细胞采用含有体积分数 胎牛血清的 培养基培养,取对数生长期细胞接种于 孔板(每孔 个),加入 孵育 ,记为 组。设置正常培养的 细胞作为 组。采用脂质体转染法将 、分别转染至 细胞,用 孵育 ,依次分别记为 组、组、组、组、组、组,各组处理完成后收集细胞并进行后续实验。实时荧光定量聚合酶链反应收集各组 细胞后采用 试剂提取
7、细胞总 ,反转录合成 ,采用试剂盒标准三步法进行实时荧光定量聚合酶链反应()扩增,以 为内参,以 为内参,采用相对定量法 计算。流式细胞术检测细胞凋亡率取各组 细胞加入预冷 洗涤,之后加入 悬浮液,条件下细胞悬液转移至 管,经 离心 ,洗涤 次,加入 结合缓冲液,加入 ,振荡混匀,室温避光孵育 ,加入 染色液,振荡混匀,室温避光孵育 ,加入 结合缓冲液,涡旋振荡器中持续振荡 ,过滤,应用流式细胞仪及应用 软件检测各组细胞凋亡率。法检测炎症因子水平收集各组 细胞(个 ),取细胞悬液加入 孔板(每孔 ),经 离心 后取上清液,采用 法检测 、水平:收集各组细胞培养基,从冰箱中取出 试剂盒,若试剂盒
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