花青素提取.doc
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1、 桑椹酒渣中花青素提取1材料与方法1.1材料桑椹果酒酒渣。1.2试剂药品 试验所用95%乙醇、浓盐酸、30%过氧化氢、Na2SO3等试剂均为分析纯。1.3主要仪器 电子分析天平、分光光度计、旋转蒸发仪、酸度计、高速冷冻离心机、电热恒温水浴锅等。1.4方法(稀HCl+95%乙醇提取) 样品称量,用提取剂提取,过滤(减压过滤/板框过滤),所得的提取液按一定比例稀释(pH1.0氯化钾缓冲液和pH4.5醋酸钠缓冲液稀)释后在分光光度计上测出OD值,以OD值代表桑椹红色素的含量。1.4.1不同溶剂的吸光光谱及提取效果比较 分别以75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇(1:1)
2、、0.10%稀HCl +95%乙醇(1:1)作为提取剂,以物料与提取剂之比1:10提取桑椹色素,提取液经3倍稀释后用分光光度计测定各提取液吸收光谱。1.4.2不同物料与提取剂之比对花青素提取的影响(此时用提取效果最好的提取剂)。1.4.3温度对提取效果的影响 以最佳结果作为桑椹提取剂,分别于60、50、40、30、20下提取1h。1.4.4提取时间对提取效果的影响 每隔20分钟取样测得OD值。1.4.5正交实验1.4.6得率试验 称取一定量样品,经提取后。提取液经旋转蒸发仪蒸发,真空干燥,求得率。方法一稀HCl+95%乙醇提取1不同溶剂的吸光光谱及提取效果比较固定浸提温度、提取时间、液料比,分
3、别85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇(1:1)、0.10%稀HCl +95%乙醇(1:1)、0.15%稀HCl +95%乙醇(1:1)为提取剂进行浸提试验,色素提取液分别采用pH1.0氯化钾缓冲液和pH4.5醋酸钠缓冲液稀释一定倍数(吸光值在0.20.8之间),将稀释液静置15min,分别测定两种样品稀释液ODmax和700nm处的吸光值A。按公式计算桑椹花色苷含量,分析提取溶剂对花色苷提取量的影响。 注:ODmax 的确定分别以85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇(1:1)、0.10%稀HCl +95%乙醇(1:1)、0.15%稀HCl +95%乙醇(1
4、:1)作为提取剂,以物料与提取剂之比1:10提取桑椹色素,提取液经3倍稀释后用分光光度计测定各提取液吸收光谱。2不同物料与提取剂之比对花青素提取的影响(此时用提取效果最好的提取剂)。分别称取2.0g酒渣,按液料比5、10、15、20、25、30加入相应体积的浸提溶剂,在40下避光提取2h后,抽滤、离心(3000rpm,10min)。取1mL清液,用pH 1.0和pH 4.5的缓冲溶液稀释(吸光值在0.20.8之间),分别测定两种样品稀释液在ODmax和700nm处的吸光值A,按公式计算花色苷含量,并对液料比作图,分析液料比对色素提取量的影响。3温度对提取效果的影响分别称取2.0g酒渣置入5个5
5、0mL的三角瓶中,各加入浸提溶剂,搅拌5 min,用封口膜将瓶口密封并用铝箔纸包裹好以避光。分别置于30、40、50、60、70的恒温水浴上提取2h后,抽滤、离心(3000rpm,10min)。取1mL上清液,用pH 1.0和pH 4.5的缓冲液稀释(吸光值在0.20.8之间),分别测定两种样品稀释液在ODmax和700nm处的吸光值A,按公式计算花色苷含量,并对温度作图,分析温度对色素提取量的影响。4提取时间对提取效果的影响 每隔30分钟取样测得OD值。用pH 1.0和pH 4.5的缓冲液稀释(吸光值在0.20.8之间),分别测定两种样品稀释液在ODmax和700nm处处的吸光值A,按公式计
6、算花色苷含量,并对时间作图,分析提取时间对色素提取量的影响。5桑椹红色素酸性乙醇溶剂提取条件的正交试验根据单因素试验的结果,选取L9(34)正交试验表,以浸提溶剂中乙醇浓度、浸提时间、浸提温度、液料比为因素,安排4水平做正交试验,以确定提取的最佳条件。方法二超声波辅助提取桑椹红色素1超声波功率对红色素提取的影响精确称取2.0g桑椹酒渣若干份,按液料比?分别加入?提取液,在30温度下,分别以200700 W超声功率萃取20min。抽滤、离心得到色素粗提液,用pH1.0和pH4.5缓冲液稀释(吸光值控制在0.20.8之间),分别测定两种样品稀释液在ODmax和700nm处的吸光值A,按公式计算花色
7、苷含量,并对超声功率作图,分析功率对色素提取量的影响。2超声温度对色素提取量的影响精确称取2.0g桑椹酒渣若干份,按液料比?分别加入?提取液,以?W超声功率分别在2060温度下萃取20min。抽滤、离心得到色素粗提液,用pH1.0和pH4.5缓冲溶液稀释(吸光值在0.20.8之间),分别测定两种样品稀释液在ODmax和700nm姗处的吸光值A,按公式计算花色苷含量,并对超声温度作图,分析温度对色素提取量的影响。3超声时间对色素提取量的影响精确称取2.0g桑椹酒渣若干份,按液料比?分别加入?提取液,在?温度下,以?W超声功率分别萃取5、10、15、20、25、30min。抽滤、离心得到色素粗提液
8、,用pH1.0和pH4.5缓冲溶液稀释(吸光值在0.20.8之间),分别测定两种样品稀释液在ODmax和700nm处的吸光值A,按公式计算花色苷含量,并对超声时间作图,分析时间对色素提取量的影响。4桑椹红色素超声波辅助提取条件的正交试验根据单因素试验的结果,选取L9(34)正交试验表,以超声功率、超声温度、超声时间为因素,安排3水平做正交试验,以确定提取的最佳条件。方法三微波辅助提取桑椹红色选择微波辅助提取温度30、40、50、60、70 , 以微波功率500W、600W、700W、800W、900W,微波辐射时间2S、4S、6S、8S、10S以及液料比10:1、20:1、30:1、40:1、
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