离子色谱法测定A型肉毒毒素及其胶塞中的氟_叶婷.pdf

第 51 卷第 2 期2023 年 1 月广 州 化 工Guangzhou Chemical IndustryVol.51 No.2Jan.2023离子色谱法测定 A 型肉毒毒素及其胶塞中的氟叶 婷1,陈立宏1,王 璇1,田向斌2,赵成梅1,冯靖喻1,李小娟1(1 兰州生物技术开发有限公司,甘肃 兰州 730046;2 甘肃省药品检验研究院,甘肃 兰州 730070)摘 要:建立了离子色谱法测定注射用 A 型肉毒毒素与其覆聚乙烯-四氟乙烯膜氯化丁基橡胶塞中的氟离子。此方法线性范围为 25 400 ngmL-1,r 为 0.9994,检测限为 0.1 ngmL-1,定量限0.3 ngmL-1,胶塞浸提液中氟离子回收率为 83%88%,RSD 为 2.4%,注射用 A 型肉毒毒素中氟离子回收率为 88%104%,RSD 为 5.9%。本文所建方法简单可行,且胶塞中迁移出的氟离子远小于注射用 A 型肉毒毒素中含有的氟离子,表明此胶塞有望作为注射用 A 型肉毒毒素的内包材。关键词:氟离子;覆聚乙烯-四氟乙烯膜氯化丁基橡胶塞;注射用 A 型肉毒毒素中图分类号:R927.11 文献标志码:A文章编号:1001-9677(2023)02-0140-04 第一作者:叶婷(1988-),女,医学生物学工程师,主要从事注射用 A 型肉毒毒素的检定工作。通讯作者:李小娟(1983-),女,医学生物高级工程师,主要从事注射用 A 型肉毒毒素的检定工作。Determination of Fluoride in Botulinum Toxin Type A andIts Rubber Stopper by Ion ChromatographyYE Ting1,CHEN Li-hong1,WANG Xuan1,TIAN Xiang-bin2,ZHAO Cheng-mei1,FENG Jing-yu1,LI Xiao-juan1(1 Lanzhou Biotechnology Development Co.,Ltd.,Gansu Lanzhou 730046;2 Gansu Institute for Drug Control,Gansu Lanzhou 730070,China)Abstract:An ion chromatography method for detecting the fluoride ion in botulinum toxin type A for injection and itscoated polyethylene-tetrafluoroethene chlorinated butyl rubber stopper was established.The method showed that there wasa good linearity when the measured range from 25 to 400 ngmL-1.The correlation coefficients r was 0.9994.The limit ofdetection was 0.1 ngmL-1.The limit of quantitation was less than 0.3 ngmL-1.The recoveries of fluoride ion in theextract of coated polyethylene-tetrafluoroethylene chlorinated butyl rubber stopper was 83%88%.RSD value was2.4%.The recoveries of fluoride ion in botulinum toxin type A for injection was 88%104%.RSD value was 5.9%.The method was simple and feasible.The migration of fluoride ion from coated polyethylene-tetrafluoroethene chlorinatedbutyl rubber stopper was much less than the content of fluoride ion from botulinum toxin type A for injection,whichindicated that the rubber stopper was expected to be used for botulinum toxin type A for injection as inboard material.Key words:fluoride ion;coated polyethylene-tetrafluoroethene chlorinated butyl rubber stopper;botulinum toxintype A for injection注射用 A 型肉毒毒素在临床上已广泛应用于神经内科、整形外科、康复科、泌尿科等领域。在国内,此冻干注射剂衡力目前所用胶塞为溴化丁基橡胶塞,但随着注射剂药品质量的提高,对胶塞风险把控意识也在逐渐增强1。近年来,生产企业及市场上对冻干注射剂中可见异物和水分含量的关注度越来越高,迫使其所用胶塞在避免穿刺落屑和增强密封性等质量和技术方面不断跟进。乙烯-四氟乙烯共聚物作为一种新兴材料,被广泛应用于航天航空、建筑、农业、化工、包材、井下等诸多领域2,乙烯-四氟乙烯共聚物材料的研究和发展为覆膜丁基橡胶塞的出现奠定了基础。目前,市售的覆聚乙烯-四氟乙烯膜氯化丁基橡胶塞作为直接接触药品的包装材料之一,具有稳定性强、密封性好、光滑少屑等优势,有望代替卤化丁基橡胶塞作为注射类药品的内包装材料。然而,覆聚乙烯-四氟乙烯膜氯化丁基橡胶塞是一种含氟高分子材料,在药品生产、流通和使用过程中,其内表面与药品直接接触,胶塞中氟离子在外界环境作用下存在溢出的可能性3-4,为确保临床用药安全,需对此胶塞中溢出的氟离子进行检测。目前国内外对微量氟离子含量的检测方法为离子色谱法5-7。因此,本文试图建立一种离子色谱法研究注射用 A 型肉毒毒素与其覆聚乙烯-四氟乙烯膜氯化丁基橡胶塞中氟离子的相容性。1 材 料1.1 仪 器DIONEX ICS-900 离子色谱仪;RFC-30 淋洗液发生器;ASRS300-4mm 抑制器;色谱柱(AS11-HC 和 AG11-HC),美国戴安公司;ME204 和 MS205DU 电子天平,梅特勒公司;MiLLi-Q IQ7000 纯水仪,德国默克公司。第 51 卷第 2 期叶婷,等:离子色谱法测定 A 型肉毒毒素及其胶塞中的氟141 1.2 对照品和样品水中氟离子溶液标准物质8(批号:1910223264,质量浓度:1000 gmL-1,K=2 时的相对不确定度:1%),山东省冶金科学研究院;注射用 A 型肉毒毒素(批号:试 20191206-1、试 20191206-2、试 20191206-3),兰州生物技术开发有限公司;覆 聚 乙 烯-四 氟 乙 烯 膜 氯 化 丁 基 橡 胶 塞(批 号:D000122717),西氏医药包装(中国)有限公司。1.3 试 剂实验用水为一级水9,甘肃省药品检验研究院;乙腈(批号:JB092530),德国默克公司。2 方法与结果2.1 色谱条件采用 AG11-HC 作为阴离子保护柱(4 mm50 mm)、AS11-HC(4 mm250 mm)作为阴离子分析柱,氢氧化钠作为淋洗液,洗脱梯度:0 6 min(10 mmolL-1)、6 10 min(50 mmolL-1)、10 15 min(10 mmolL-1),流速 0.8 mLmin-1,柱温 30,抑制电流 80 mA,进样体积 10 L。2.2 系列标准溶液配制吸取1000 gmL-1的水中氟离子溶液标准物质81 mL 至100 mL 量瓶中,用一级水稀释至刻度,摇匀,得到浓度为10000 ngmL-1水中氟离子标准溶液。分别吸取浓度为10000 ngmL-1的水中氟离子标准溶液 0.125 mL、0.25 mL、0.5 mL、1 mL、1.5 mL、2 mL 置于50 mL 量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得浓度分别为 25 ngmL-1、50 ngmL-1、100 ngmL-1、200 ngmL-1、300 ngmL-1、400 ngmL-1的水中氟离子标准溶液,待测定用。2.3 线性范围将离子色谱仪调节至最佳测定状态,对 25 ngmL-1、50 ngmL-1、100 ngmL-1、200 ngmL-1、300 ngmL-1、400 ngmL-1的水中氟离子标准溶液分别进样测定。以氟离子质量浓度(X,ngmL-1)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标绘制标准曲线,线性方程为 Y=0.0002X-0.0004,在质量浓度 25 400 ngmL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数 r为 0.9994。2.4 检测限和定量限将 10000 ngmL-1的水中氟离子标准溶液逐级稀释,分别进样,记录峰面积,计算信噪比,考察其检测限和定量限。当信噪比 S/N3:1 创新创业教育与专业教育融合的人才培养模式研究 1 时,确定该方法的检测限;当信噪比 S/N10 1 时,确定该方法的定量限。结果显示:当 S/N=3.7 时,得出该方法对水中氟离子的检测限为0.1 ngmL-1;当 S/N=9.3 时,得出该方法对水中氟离子的定量限0.3 ngmL-1。2.5 准确度和重复性2.5.1 标准溶液制备吸取1000 gmL-1的氟离子溶液标准物质80.625 mL,置于25 mL 量瓶,用水稀释至刻度,摇匀,即得浓度为25 gmL-1的水中氟离子标准溶液。2.5.2 胶塞浸提液回收率和重复性实验取胶塞 4 个(约 5 g),称取重量,置 20 mL 顶空瓶中,准确加入水20 mL,加入2.5.1 标准溶液0.16 mL,称取重量,封盖,121 高压 30 min,取出放冷,称重,补减失重量,过0.22 m 滤膜,取滤液作为胶塞浸提液样品加标溶液,待测定。同法制备胶塞浸提液样品溶液。结果表明:6 份胶塞浸提液样品加标溶液的测得浓度分别为 200 ngmL-1、198 ngmL-1、207 ngmL-1、206 ngmL-1、207 ngmL-1、200 ngmL-1;6 份胶塞浸提液样品溶液测得浓度分别为 31.15 ngmL-1、31.20 ng mL-1、30.75 ng mL-1、31.25 ng mL-1、31.22 ngmL-1、31.38 ngmL-1。由此计算胶塞浸提液中氟离子的回收率在 83%88%之间。以 6 份胶塞浸提液加标样品溶液的测得浓度与 6 份胶塞浸提液样品溶液的测得浓度之差值计算 RSD 值,RSD 为 2.4%。以上结果均符合 分析方法验证指导原则10中回收率在 75%120%(2 gg-1)之间和结果RSD 值小于8%(2 gg-1)的要求。2.5.3 注射用 A 型肉毒毒素回收率和重复性实验取注射用 A 型肉毒毒素(0 月)4 支,取内容物,精密称定,置于10 mL 量瓶中,用水复溶,加入2.5.1 项下标准溶液0.04 mL,加入 1 mL 乙腈,加水稀释至刻度,于 4 放置 30 min,过0.22 m 滤膜,取滤液作为注射用 A 型肉毒毒素样品加标溶液,待测定。同法制备注射用 A 型肉毒毒素样品溶液。结果表明:6 份加标 样 品 溶 液 测 得 浓 度 分 别 为 174 ng mL-1、168 ngmL-1、155 ngmL-1、176 ngmL-1、169 ngmL-1、171 ngmL-1;6 份样品溶液的测得浓度分别为 70 ngmL-1、69 ngmL-1、67 ngmL-1、72 ngmL-1、70 ngmL-1、71 ngmL-1。由此计算注射用 A 型肉毒毒素中氟离子的回收率在 88%104%之间。以6 份加标样品溶液的测得浓度与6 份样品溶液的测得浓度之差值计算 RSD 值,RSD 为 5.9%,以上结果均符合分析方法验证指导原则10中回收率在 75%120%(1 gg-1)之间和结果 RSD 值小于0.3 ngmL-1,远小于线性范围中的最低检测点(25 ngmL-1)和生产用纯化水中所含有的氟离子(48.4 ngmL-1),表明该方法的灵敏度符合要求。覆聚乙烯-四氟乙烯膜氯化丁基橡胶塞浸提液中氟离子回收率在 83%88%之间,重复性试验的 RSD 值为2.4%;注射用 A 型肉毒毒素中氟离子的回收率在 88%104%之间,重复性试验的 RSD 值为 5.9%。以上验证结果均符合分析方法验证指导原则10中相关要求,表明该方法的准确性和重复性良好,可用于注射用 A 型肉毒毒素及其覆聚乙烯-四氟乙烯膜氯化丁基橡胶塞中氟离子的检测。为了保证注射用 A 型肉毒毒素的临床用药安全,基于本文所建立的方法,对 121 高压 30 min 处理的覆聚乙烯-四氟乙烯膜氯化丁基橡胶塞浸提液中氟离子含量进行检测,得出氟离子的浸出量为 0.12 gg-1,说明胶塞中的氟离子存在向注射用 A 型肉毒毒素中迁移的风险。依据 药品包装材料与药物相容性试验指导原则11要求,对 1 批胶塞包装的 3 批注射用 A型肉毒毒素在加速稳定试验过程中,0 月、1 月、2 月、3 月和6 月时氟离子含量分别进行检测,以考察注射用 A 型肉毒毒素中迁移的氟离子含量,结果显示:3 批样品在不同加速试验时期的氟离子含量均在 8.7 14 gg-1之间波动,并无显著趋势。以上检测结果表明:首先,注射用 A 型肉毒毒素中氟离子含量远高于胶塞浸提液中氟离子含量,胶塞中氟离子的迁移对注射用 A 型肉毒毒素在储存、运输和使用过程中氟离子含量影响不大。其次,注射用 A 型肉毒毒素是由 1%明胶、5%蔗糖、5%右旋糖酐、小于 1%原液及生产用水配制后分装冻干所得,可见生产用水在注射用 A 型肉毒毒素中的占比大于 88%,由此推测注射用 A 型肉毒毒素中较高的氟离子可能由生产用水引入,因而本文对纯化水和一级水9分别进行了氟离子测定,一级水氟离子未检出,纯化水中氟离子含量为 48.4 ngmL-1(约10.0 gg-1),此含量与注射用 A 型肉毒毒素中氟离子的检出量相近,由此推测注射用 A 型肉毒毒素中的氟离子来自生产用纯化水的可能性较大。中华人民共和国卫生行业标准中对人体摄入的氟离子有严格要求12,过多的氟离子进入人体,可能引起氟中毒,从而干扰钙磷代谢13。参照 人群总摄氟量12标准,成人总氟的最大安全摄入量为 3.5 mgd-1,儿童为 2.4 mgd-1。每支注射用 A 型肉毒毒素中内容物的重量约为 0.05 g,按所含氟离子的最大量 14 gg-1,计算每次使用最大量 4 支时,氟离子的总含量为 14 gg-10.05 g4 支=2.8 g,远小于允许的安全摄入量,从而说明注射用 A 型肉毒毒素中的氟离子对此产品的使用安全几乎无影响。参考文献1王备战,韩志军.卤化丁基橡胶塞标准与外观常见异物缺陷J.机电信息,2017,5(14):52-55.2 钱景,聂伟.乙烯-四氟乙烯共聚物复核体系的结构与性能D.合肥:中国科学技术大学,2019.3 王新营.交联乙烯-四氟乙烯共聚物氟化物逸出的影响因素研究J.绝缘材料,2020,53(1):26-29.4 孙烨,杨柳桦,单燕莉.离子色谱法测定不粘锅聚四氟乙烯涂层中溶出的氟J.中国卫生检验杂志,2015,25(8):1140-1142.(下转第 153 页)第 51 卷第 2 期王傲峰,等:超临界间歇发泡技术制备聚丁二酸丁二醇酯/海泡石开孔泡沫153 表 2 不同泡沫样品吸附容量参数表Table 2 Table of adsorption capacity parameters ofdifferent foam samples(g/g)吸附容量()6wt%海泡石/PBS 泡沫8wt%海泡石/PBS 泡沫10wt%海泡石/PBS 泡沫12wt%海泡石/PBS 泡沫吸水量(1)0.80.931.9吸油量(2)0.50.71.91.53 结 论(1)当海泡石含量低于 10wt%时,随着海泡石含量的增加,海泡石在 PBS 基体内分布越来越密集,但分散仍然均匀。当海泡石含量超过 10wt%时,可以清楚地看到海泡石填料的团聚现象。(2)海泡石的加入提高了 PBS 的熔体强度,在海泡石含量为 10wt%时熔体强度达到最大,后续的发泡结果表明海泡石有助于 PBS 的发泡,复合材料泡沫的泡孔结构稳定、泡孔均匀,发泡倍率适当。(3)PBS/Sep 开孔泡沫的吸附容量测试表明文章成功制备了以 PBS 为软相,海泡石为硬相的开孔泡沫,海泡石的加入有助于 PBS 开孔结构的形成,在海泡石含量为 10wt%时 PBS/Sep开孔泡沫的吸附容量达到最大。参考文献1 陈振,张增志,丛中卉,等.开孔型聚合物发泡材料的研究及应用进展J.材料工程,2020,48(3):1-9.2 薛钰,殷德贤,项鲁冰,等.扩链 PBS 的微孔发泡行为研究J.中国塑料,2021,35(8):125-130.3 周洪福,孙俊民,何路东,等.聚丁二酸丁二醇酯/硅酸钙复合材料的发泡行为J.塑料,2014,43(2):51-55.4 Guan L,Qi R,Lu J,et al.Rheological properties and foam preparation ofbiodegradable poly(butylene succinate)J.Journal of AppliedPolymer Science,2012,127(5):3586-3594.5 Yu P,Mi H Y,Huang A,et al.Effect of Poly(butylenes succinate)onPoly(lactic acid)Foaming Behavior:Formation of Open Cell StructureJ.Industrial&Engineering Chemistry Research,2015.6 Shi X,Qin J,Wang L,et al.Introduction of stereocomplex crystallites ofPLA for the solid and microcellular poly(lactide)/poly(butyleneadipate-co-terephthalate)blendsJ.Rsc Advances,2018,8(22):11850-11861.7 李彩亭,肖辰畅,李珊红,等.海泡石颗粒的制备及其吸附油烟效能的研究J.环境科学与技术,2006,29(4):16-18.8 苏洋,罗振敏,王涛.CO2/海泡石抑爆剂对氢气/甲烷爆炸特性参数的影响J.化工进展,2022,41(11):5731-5736.9 刘利斌.海泡石基 CO2吸附剂的制备表征及其动力学研究D.湘潭:湘潭大学.10 Chen 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