蕨藻红素标准样品的研制_邓建朝.pdf

第 32 卷，第3 期2023 年3 月化学分析计量CHEMICAL ANALYSIS AND METERAGEVol.32,No.3Mar.2023蕨藻红素标准样品的研制邓建朝1，2，荣辉1，2，刘洋帆1，3，戚勃1，2，胡晓1，2，陈胜军1，2，杨贤庆1，2，李来好1，2（1.中国水产科学研究院南海水产研究所，农业农村部水产品加工重点实验室，国家水产品加工技术研发中心，广州510300；2.大连工业大学，海洋食品精深加工关键技术省部共建协同创新中心，辽宁大连116034；3.上海海洋大学，食品学院，上海201306）摘要建立了蕨藻红素标准样品的研制方法。以总状蕨藻为原料，采用C18层析的方法，制备蕨藻红素单体，通过紫外吸收光谱、红外光谱、质谱和核磁共振等技术手段进行结构确证与表征。标准样品采用高效液相色谱法进行了均匀性、稳定性检验和8家实验室联合定值。结果表明，该样品在95%的置信区间范围均匀性良好；在25 条件下可储存6天，在4 条件下可储存24个月，稳定性良好；定值结果确定其纯度为98.64%，置信度95%的扩展不确定度为0.44%。该标准样品达到了GB/T 15000.32008规定的技术要求，具有溯源性，可用于含有蕨藻红素相关产品的质量控制和含量分析。关键词蕨藻红素；标准样品；均匀性；稳定性；定值；不确定度中图分类号：O652 文献标识码：A 文章编号：1008-6145(2023)03-0006-06Preparation of certified reference materials of CaulerpinDENG Jianchao1,2,RONG Hui1,2,LIU Yangfan1,3,QI Bo1,2,HU Xiao1,2,CHEN Shengjun1,2,YANG Xianqing1,2,LI Laihao1,2(1.Key Laboratory of Aquatic Product Processing，Ministry of Agriculture and Rural Affairs，South China Sea Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences，Guangzhou510300，China；2.Collaborative Innovation Center of Seafood Deep Processing，Dalian Polytechnic University，Dalian116034，China；3.College of Food Science and Technology，Shanghai Ocean University，Shanghai201306，China)Abstract A method for preparation of the certified reference material(CRM)of Caulerpin was established.Caulerpin was obtained by means of silica gel chromatography from Caulerpa racemesa.The structure of Caulerpin was characterized by using ultraviolet-spectroscopy,infrared spectroscopy,mass spectrometry and nuclear magnetic resonance spectroscopy.Caulerpin sample was investigated by homogeneity test,stability test,and cooperative certification by eight laboratories.The results indicated that the homogeneity of Caulerpin was excellent in confidence coefficient of 95%,with good stability within 6 days at 25 and 24 months at 4.The certified value of the reference material of Caulerpin was 98.64%with the expanded uncertainty of 0.44%in confidence coefficient of 95%.It was conformed to the technical requirement of GB/T 15000.32008 and could be traceable of Caulerpin could be used in the content determination and testing method validation of Caulerpin related products.Keywords Caulerpin;certified reference material;homogeneity;stability;certification;uncertainty蕨藻红素是从蕨藻属海藻中得到的一种次生代谢物质。蕨藻红素分子化学式为C24H18N2O4，该物质为橙红色，属于单斜晶系，空间群为Cc，为非晶体学 C2对称性的吲哚生物碱物质1。相关文献2-5报道，蕨藻红素是蕨藻等天然产物的主要活性成分，具有促进或抑制植物生长，延缓果实成熟、花朵衰老等作用，广泛应用于脱叶剂、除草剂，并且蕨藻红素具有良好的抗肿瘤、抗病毒等活性。doi:10.3969/j.issn.1008-6145.2023.03.002基金项目现代农业产业技术体系建设专项（CARS-50）；中国水产科学研究院南海水产研究所中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（2019TS02）；广东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项（2023KJ151）通信作者陈胜军，博士，研究员，主要从事水产品加工与质量安全工作收稿日期20220118引用格式邓建朝，荣辉，刘洋帆，等.蕨藻红素标准样品的研制 J.化学分析计量，2023，32（3）：6.DENG Jianchao,RONG Hui,LIU Yangfan,et al.Preparation of certified reference materials of CaulerpinJ.Chemical Analysis and Meterage,2023,32(3):6.6邓建朝，等：蕨藻红素标准样品的研制目前国内还没有能够准确分析蕨藻红素含量的标准物质，使得相关蕨藻红素的深入研究和开发受到很大限制。常用的样品提取方法包括索氏提取法6、热回流提取法7、超声波提取法8和微波辅助提取法9等，笔者采用微波辅助提取蕨藻可以缩短提取时间，提高提取效率，实现样品的快速制备。标准样品分离手段常见方法有层析法10、制备液相色谱11、高速逆流色谱12等分离手段。制备液相色谱进样量较小，色谱柱容易受到污染，限制了标准样品的放大制备。高速逆流色谱对于粗提取物的分离纯化有一定优势，但是由于蕨藻粗提物中含糖类杂质较多，粘度较大，进样后体系平衡影响较大，限制了蕨藻红素的制备。笔者采用层析法有助于放大制备标准样品，使用流动相体系为甲醇-水，体系优化相对比较方便。对于一次制备的标准样品，通过二次分离纯化，进一步除去微量杂质。按照 GB/T 15000.32008 标准样品工作导则8，通过层析法研制了蕨藻红素标准样品，为蕨藻红素相关产品的质量控制和含量分析提供了保障。1实验部分1.1主要仪器与试剂总状蕨藻：从广东省湛江市海边采集，晒干后密封保存。高速万能粉碎机：FW135型，天津市泰斯特仪器有限公司。常压微波辅助合成/萃取仪：MAS-型，上海新仪微波化学科技有限公司。高压柱塞泵：LP0110型，上海三为科学仪器有限公司。紫外检测仪：HD-3型，上海青浦沪西仪器厂。中高压色谱柱：(1)MP-2503型，柱内径26 mm，柱长460 mm；(2)MP-2502型，柱内径26 mm，柱长920 mm，上海三为科学仪器有限公司。旋转蒸发仪：EYELA-1000型，上海亚荣生化仪器厂。多管路自动平衡离心机：TDZS-WS型，湖南湘仪离心机仪器有限公司。液相色谱仪：(1)Agilent1100型，美国安捷伦科技有限公司；(2)LC-20A型，日本岛津公司。超高效液相色谱-串联质谱仪：Xevo 系列，ACQUITY型，美国沃特世公司。红外光谱仪：IR Affinity-1型，岛津(中国)有限公司。超导脉冲傅里叶变换核磁共振波谱仪：Bruker AVANCE HD 500型，德国布鲁克仪器有限公司。卡尔费休库仑法水分测定仪：915 Ti-touch 型，瑞士万通公司。电感耦合等离子体质谱仪：Agilent 7800型，安捷伦科技(中国)有限公司。甲醇、乙醇：色谱纯，广州化学试剂厂。实验用水为一级水。1.2实验步骤1.2.1蕨藻红素粗提取采用微波辅助提取14-15蕨藻红素。将干燥的总状蕨藻粉碎，用80%(体积分数，下同)的乙醇作为提取溶剂，每次将粉碎样品根据物料溶剂比1 20(1 g物料添加20 mL溶剂)，在60、800 W的微波条件下提取25 min，每个样品提取2次，提取液经减压抽滤后，通过旋转蒸发仪浓缩，得到蕨藻红素粗提物，置于冰箱中在4 保存备用，后续用柱层析进行分离纯化制备。1.2.2层析柱分离利用MP-2502型中高压层析柱以C18为填料进行分离，甲醇-水(体积比为80 20)为流动相，等度洗脱，流量为10 mL/min，紫外检测器波长设置为254 nm，收集含蕨藻红素组分，色谱图如图1所示。收集合并相同组分，减压浓缩，冷冻干燥，得到高纯度蕨藻红素单体。1.2.3蕨藻红素层析液二次柱层析纯化收集一次层析液，浓缩至约20 mL，采用80%甲醇为流动相等度洗脱，流量为10 mL/min，利用MP-2503型层析柱进行二次柱层析。收集的蕨藻红素二次层析液利用高效液相色谱法进行纯度测定。结果表明，二次柱层析分离制备后，蕨藻红素用高效液相色谱面积归一法测试，纯度达到98.36%。1.2.4重结晶将二次纯化的蕨藻红素样品通过色谱纯甲醇溶解，低温冷却，析出晶体，离心，弃上清液，晶体重结晶，干燥。结果表明，采用面积归一法定量，色谱峰01020t/min4050607030蕨藻红素图1蕨藻层析色谱图7化学分析计量2023 年，第 32卷，第 3 期总面积扣除杂质色谱峰后计算得蕨藻红素纯度为99.30%。蕨藻红素液相色谱图如图2所示。1.2.5纯度分析(1)高效液相色谱法纯度分析。色谱条件：C18色谱柱(250 mm4.6 mm，5 m，美国安捷伦科技有限公司)；流动相为甲醇-水(体积比为80 20)，等度洗脱，流量为1.0 mL/min；运行时间为50 min；色谱柱温度为30；检测波长为220 nm。(2)液相色谱-质谱法纯度分析。色谱条件：色谱柱为 ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(50 mm2.1 mm，1.7 m，美国沃特世公司)；流动相为甲醇-水(体积比为80 20)，等度洗脱，流量为0.2 mL/min；柱温为40；进样体积为5 L；运行时间为5 min。质谱条件：毛细管电压为2.5 kV；锥孔气流量为150 L/h；脱溶剂温度为 500；质量扫描范围为1001 000 Da。1.2.6杂质分析(1)水分分析。将样品于105 烘箱中干燥4 h后，采用卡尔费休库仑滴定直接进样法对样品进行水分的测定。每次称取10.0 mg，三次测定，取平均值。(2)无机元素分析。利用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定等无机元素的含量。参考文献16的测定方法，将样品配成为200 g/mL的甲醇溶液。用校准液对建立的半定量工作曲线进行校准，以质量数为横坐标，半定量因子为纵坐标，建立标准工作曲线，用于分析标准样品。1.2.7定性分析采用二极管阵列检测器(PDA)、红外光谱(IR)、质谱(MS)和核磁共振(NMR)等技术进行定性分析，分析条件分别为：(1)二极管阵列检测器扫描范围为200500 nm；(2)红外光谱采用KBr压片，扫描波数为4503 900 cm-1；(3)质谱为电喷雾离子源，毛细管电压为2.5 kV，离子源温度为110，脱溶剂温度为400，锥孔气流量为150 L/h，扫描范围为1001 000 Da；(4)核磁共振以氘代二甲亚砜(DMSO-d6)为溶剂。1.2.8分装与储存将制得的蕨藻红素标准样品进行分装，采用2 mL棕色磨口试剂瓶，以每瓶10 mg分装，分装100瓶，置于4 冰箱中长期保存。1.2.9均匀性分析根据标准样品工作导则13，从分装后的样品中随机抽取10瓶，每个样品平行测定3次。用甲醇溶解蕨藻红素，配制成质量浓度为200 g/mL溶液，采用高效液相色谱进行分析，纯度分析采用面积归一化法，纯度分析结果统计检验方法为方差分析法。1.2.10稳定性分析标准样品短期稳定性：考察制备标准样品在6天内的稳定性。将包装好的蕨藻红素标准样品储存在温度置为25 条件下，每2天取3个平行样品，用甲醇配制成质量浓度为 200 g/mL 的溶液，按照1.2.5(1)色谱条件进行分析，每个平行样测定3次，再将3个平行样平均结果作为最终检测结果。标准样品长期稳定性：考察制备标准样品在2年内的稳定性。将包装好的蕨藻红素标准样品储存温度为4 条件下，每6个月取3个平行样测定其纯度，检测方法同上。1.2.11定值根据 JJF 10061994 一级标准物质技术规范17相关规定，对标准样品进行纯度分析定值。根据规定，选取8家实验室进行定值。随机抽取24瓶制备好的标准样品，每个实验室寄送3瓶，定值单位将样品配置成待测溶液，每个样品平行测定2次，采用高效液相色谱峰面积归一化法进行纯度定值，计算样品纯度的平均值和标准偏差，估算不确定度。2结果与讨论2.1纯度分析2.1.1高效液相色谱纯度分析采用HPLC对所得的单体在254 nm波长下进行分析，溶剂色谱峰扣除以后，未发现明显杂质峰，然后将样品色谱峰面积全部相加，根据归一法定量，蕨藻红素纯度为99.30%。0510152025303540图2蕨藻红素液相色谱图8邓建朝，等：蕨藻红素标准样品的研制2.1.2水分分析采用库伦电位滴定法测定水分，样品中水分的测定结果为(0.5840.014)%(n=3)。2.1.3无机元素分析利用电感耦合等离子体质谱仪测定蕨藻红素样品中所有元素含量，重复3次，测得无机元素质量分数总和为(0.001 640.000 06)%。2.2结构分析2.2.1紫外光谱分析将蕨藻红素标准样品溶解于甲醇中，制备成一定浓度的溶液，采用二极管阵列检测器(PDA)在波长为200500 nm范围内扫描，结果见图3。蕨藻红素紫外吸收峰分别为220、268、314 nm，以上紫外光谱吸收波长数据与文献18进行比较，确定该物质为蕨藻红素。2.2.2红外光谱分析用将蕨藻红素标准样品制备压片，红外光谱仪从4503 900 nm波长进行扫描。结果表明，红外光谱1 688 cm-1和1 263 cm-1表示有共轭的羧基甲酯官能团；红外光谱 3 381 cm-1单一尖峰以及 1 263 cm-1强吸收峰说明存在仲胺，其中 3 381 cm-1为NH，1 263 cm-1为 CN，1 688 cm(C=O)说明存在羰基，1 057 cm-1为s，COC。以上红外光谱吸收波长数据与文献19进行比较，确定该物质为蕨藻红素。2.2.3质谱分析质谱在正、负两种离子模式下扫描，质量扫描范围为1001 000 Da，正离子模式扫描结果为399.2M+H+、421.2M+Na+和 437.1M+K+，M+Na+和M+K+分别是分子蕨藻红素分子和钠钾加合离子，推断该蕨藻红素标准样品相对分子质量为398.2。质谱图显示丰度最大的离子峰为397.0M-H-，推断蕨藻红素标准样品相对分子质量为398.0。2.2.4核磁共振分析以氘代二甲亚砜(DMSO-d6)为溶剂，蕨藻红素标准样品1H-NMR和13C-NMR数据详见表1。1H-NMR(500 MHz)核 磁 结 果 显 示，H：3.77(s，6H，2OCH3)，7.04-7.42(8H，m，Ar-H)，8.16(2H，s，2=CH)，11.4(2H，s，2NH)。1H-NMR 数 据和13C-NMR 数据与文献20一致，故鉴定为蕨藻红素。2.3均匀性分析将蕨藻红素标准样品的色谱分析结果进行F检验，确定样品的均匀性数据是否符合正态分布，结果见表2和表3。样品瓶间方差：sbb2=MSamong-MSwithinn0=0.000 258-0.000 1833=2.510-5样品瓶间标准偏差：220011052105310541055105220 nm268 nm314 nm260340380420460300500A波长/nm图3蕨藻红素紫外光谱图表1蕨藻红素的核磁共振碳谱数据(氘代溶剂DMSO-d6)C位置1，12，23，34，45，56，67，78，89，910，1011，1112，12NHH测定值7.4210-67.1310-67.0410-67.3210-6-8.1610-6-3.7710-611.410-6文献值187.5910-67.2510-67.1810-67.4710-6-8.6310-6-3.7010-612.5510-6C测定值111.0710-6122.6210-6119.9510-6117.7110-6126.8410-6111.6310-6125.7710-6137.3710-6141.4910-6132.7710-6165.6810-652.1410-6-文献值20111.5610-6122.6610-6119.9110-6118.0110-6127.0910-6112.0810-6126.0110-6138.3610-6142.3210-6133.5410-6166.0710-651.4110-6-表2蕨藻红素标准样品均匀性分析结果瓶号1#2#3#质量分数/%测定值98.61，98.62，98.62，98.61，98.61，98.62，98.59，98.61，98.62，98.6298.61，98.63，98.62，98.59，98.62，98.63，98.59，98.59，98.59，98.5998.62，98.62，98.63，98.62，98.59，98.62，98.61，98.60，98.59，98.59总平均值98.61表3蕨藻红素标准样品纯度方差分析结果变差源瓶间瓶内总和方差（SS）0.002 320.003 6670.005 987自由度92029均方差（MS）0.000 2580.000 1839化学分析计量2023 年，第 32卷，第 3 期sbb=0.000 025=0.01重复性标准偏差：sr=MSwithin=0.000 183=0.02查 表 得 F0.05(9，20)=2.94，F=MSamong/MSwithin=1.41，FF0.05(9，20)，表明该标准样品是均匀的。2.4稳定性分析2.4.1短期稳定性分析标准样品短期稳定性考察数据见表4。从表4数据看，标准样品所测定平均值结果，统计分析差异不显著，说明该标准样品25 保存运输条件下6天时间内保持稳定。2.4.2长期稳定性分析标准样品长期稳定性考察数据见表5。从表5数据看，所有测得样品平均纯度值在测定时间内没有随时间变化发生升高或降低，样品纯度测定值在(98.590.10)%范围内，说明该标准样品在两年储藏时间内是稳定的。用t检验对纯度数据进行统计分析，采用直线作为经验模型，观察斜率值是否有显著变化，对标准样品的稳定性进行预测。经过计算，直线斜率b1=-0.003 2，截距 b0=98.63，斜率标准偏差 s(b1)=0.001 6。查表知自由度为n-2=13和P=0.95(95%置信 水 平)下，t0.95，13=3.18，|b1|=0.003 2，t0.95，13 s(b1)=0.005 2，|b1|t0.95，13 s(b1)，表明直线斜率变化不显著，蕨藻红素标准样品在2年贮藏期内稳定性良好。2.5定值采用HPLC色谱峰面积归一化法计算蕨藻红素标准样品的纯度，其定值结果见表6。根据研制报告，样品均匀性引入的标准不确定度为ubb=sbb=0.01，样品24个月稳定性引入的标准不确定度为ults=2s（b1）t=0.001 624=0.12，则蕨藻红素标准样品定值引入的扩展标准不确定度：U=2u(-x)2+ubb2+ults2=0.44%蕨藻红素标准样品的高效液相色谱法纯度测定值为99.22%，扣去水分和无机元素，蕨藻红素标准样品的纯度定值结果为 98.64%，扩展不确定度为0.44%(k=2，P=0.95)。3结语按照 GB/T 15000.32008 标准样品工作导则规定进行研制，快速高效制备蕨藻红素标准样品，蕨藻红素的纯度(质量分数)为98.64%，置信度95%的扩展不确定度为0.44%。研制的蕨藻红素国家标准样品可用于蕨藻红素含量测定、相关产品的检测分析及质量控制等。参 考 文 献1 吕扬，卢多，郑启泰，等.蕨藻红素（Caulerpin）的结构分析 J.结构化学，1994，13（6）：472.表4短期稳定性试验结果时间/天0246测定结果/%98.62，98.64，98.6498.65，98.63，98.6698.63，98.65，98.6398.65，98.64，98.63平均值X/%98.6598.6598.6498.64标准偏差S/%0.010.020.010.01表5长期稳定性分析结果时间/月06121824质量分数/%测定值98.59，98.61，98.6298.65，98.62，98.6398.62，98.62，98.6498.59，98.53，98.5298.52，98.58，98.56平均值98.6198.6398.6398.5598.55标准偏差/%0.020.020.010.040.03表6蕨藻红素标准样品HPLC纯度定值结果统计分析结果实验室序号12345678质量分数/%测定均值99.3099.3499.3899.2999.0198.9699.0799.40标准偏差0.080.030.100.020.070.050.050.07总均值99.22sr/%0.07sL/%0.19s（-x）/%0.18s（-x）/%0.07u（-x）/%0.14U/%0.44注：1）sr实验室内重复性标准偏差；sL实验室间再现性标准偏差；s（-x）实验室平均值的标准偏差；s（-x）总平均值的标准偏差；u（-x）总平均值的不确定度；u置信区间95%的扩展不确定度。10邓建朝，等：蕨藻红素标准样品的研制2 LUNAGARIYA J，BHADJA P，ZHONG S H，et al.Marine natural product bis-indole alkaloid Caulerpin：chemistry and biologyJ.Mini-Reviews in Medicinal Chemistry，2019，19（9）：751.3 童艳梅，马华威，胡庭俊，等.长茎葡萄蕨藻的组成成分及功能特性研究进展 J.食品工业科技，2022，43（7）：400.4 杨楠，刘金梅，姜晶晶，等.中国北部湾沿海蕨藻科的分类研究J.广东海洋大学学报，2020，40（2）：94.5 邵海艳，吉宏武.总状蕨藻多糖体外抗肿瘤作用 J.食品科学，2014，35（11）：251.6 罗琥捷，杨宜婷，黄寿根，等.超声提取法与索氏提取法提取陈皮黄酮类有效成分的分析比较 J.中药材，2016，39（2）：371.7 彭小芳，程池露，唐庆九，等.基于UPLC-MS/MS定量检测法优化灵芝三萜热回流提取工艺的研究 J.菌物学报，2021，40（9）：2 480.8 蔡苗苗，陈胜军，杨贤庆，等.舌状蜈蚣藻蛋白质的提取及其抗氧化活性研究 J.南方水产科学，2020，16（2）：99.9 闭格宁，肖小华，李攻科.微波辅助萃取多物理场耦合模型的构建及验证 J.高等学校化学学报，2022，43（3）：56.10 过七根，徐常龙，董雯，等.薄层层析法分析旱莲草的凝血活性成分 J.江西师范大学学报（自然科学版），2017，41（1）：89.11 吕正敏，隋玲玲，王玉军，等.制备液相色谱法分离纯化卡前列甲酯 J.辽宁化工，2021，50（12）：1 810.12 王尉，贺天雨，兰韬，等.高速逆流色谱结合制备液相色谱法分离制备葡萄籽中的多酚 J.色谱，2019，37（11）：1 193.13 中华人民共和国国家质量监督检验总局，中国国家标准化管理委员会.标准样品工作导则（3）标准样品定值的一般原则和统计方法：GB/T 15000.32008/ISO Guide 35：2006 S.北京：中国标准出版社，2008.14 向江波，邓建朝，杨贤庆，等.响应面法优化微波辅助提取长茎葡萄蕨藻中蕨藻红素 J.食品与发酵工业，2016，42（6）：209.15 牛改改，邓建朝，李来好，等.正交设计优化蕨藻红素的微波提取工艺 J.食品工业科技，2014，35（18）：241.16 俞佳妮，贾巧君，叶子弘，等.二氢丹参酮标准样品的研制 J.中国计量大学，2021，32（2）：170.17 国家标准物质研究中心.一级标准物质技术规范：JJF 10061994 S.北京：中国计量出版社，1994.18 ANJANEYULUS S R.Two caulerpin analogs and a ses-quiterpene from Caulerpa racemosa J.Phytochemistry，1991，30（9）：3 041.19 吴思超，江海燕，许少玉，等.HPLC检测南海蕨藻中的蕨藻红素 J.暨南大学学报（自然科学版），2009，30（1）：92.20 程凡，周媛，吴军，等.海洋绿藻盾叶蕨藻的化学成分研究 J.时珍国医国药，2008，19（4）：856.（上接第5页）6 李鑫.婴幼儿配方乳粉生产工艺、包装的现状研究 J.中国乳业，2021（5）：85.7 刘涛.提高喷雾干燥技术的应用 J.中国中医药咨讯，2010，2（7）：85.8 国家质量监督检验检疫总局.标准物质定值的通用原则及统计学原理：JJF 13432012 S.北京：中国质检出版社，2012.9 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法：GB/T 223882008 S.北京：中国标准出版社，2008.10 贺习文.有关乳制品中三聚氰胺检测方法的改进与探讨 J.中国奶牛，2018（6）：42.11 单艺，马微，王象欣，等.HPLC-PAD外标法及UPLC-MS/MS内标法测定乳及乳制品中三聚氰胺的含量 J.食品科学，2012，33（20）：171.12 周铁桩，王磊，黄帅，等.喷雾干燥技术研究进展和展望 J.辽宁化工，2019，48（9）：907.13 吕欧，李涛，王豆，等.氨基甲酸酯类农药残留质控样品的制备与评价-以灭多威为例 J.食品安全质量检测学报，2019，10（24）：8 499.14 阚莹，卢晓华，孟凡敏，等.JJF 13432012 标准物质定值的通用原则及统计学原理 的使用 J.中国计量，2012（11）：122.15 安巧云，魏敏，周剑，等.乳粉中脂肪成分分析标准物质的研制J.化学分析计量，2021，30（6）：6.16 李筱翠，卢晓华，扈蓉.脱脂乳粉中硝酸盐、亚硝酸盐标准物质制备技术研究与评估 J.分析测试学报，2015，34（6）：749.17 曹玉兰，周剑，魏敏，等.乳粉中钙成分分析标准物质研制 J.化学分析计量，2021，30（5）：1.18 杨轶眉，王莹，彭亚锋.婴幼儿配方奶粉中蛋白质成分分析标准物质的研制 J.食品工业，2019，40（3）：292.19 路新成.标准物质研制中特性值的不确定度评定 J.江苏科技信息，2018，35（28）：27.20 刘金涛，李玲，董家吏，等.柚皮素标准物质的研制及不确定度评定 J.分析测试学报，2020，39（2）：190.11