左心室舒张功能结合血清微小RNA-152-5p、潜在转化生长因子结合蛋白2水平与射血分数保留的心力衰竭患者左心室重构的相关性.pdf

61 心脑血管病防治 2024 年 2 月第 24 卷第 2 期 Cardio-Cerebrovasc Dis Prev Treat,February 2024,Vol.24,No.2左心室舒张功能结合血清微小 RNA-152-5p、潜在转化生长因子结合蛋白 2 水平与射血分数保留的心力衰竭患者左心室重构的 相关性姚海涛1.赵静2.刘艳美3.李莎4.侯杰1【摘要】目的 探讨左心室舒张功能结合血清微小 RNA-152-5p（miR-152-5p）、潜在转化生长因子结合蛋白 2（LTBP-2）水平与射血分数保留的心力衰竭（HFpEF）患者左心室重构的相关性。方法 选取 2019 年 8 月至 2020 年 8 月在唐山中心医院进行治疗的 HFpEF 患者 48 例为HFpEF 组，同期健康体检者 52 例为对照组。以实时荧光定量 PCR 法和酶联免疫吸附试验法分别检测血清 miR-152-5p、LTBP-2 水平。研究对象均进行超声心动图检查，收集二尖瓣环舒张早期峰值速度（E）、晚期峰值充盈速度（A）、二尖瓣口舒张早期峰值充盈速度（E）、左心室舒张末期内径（LVIDd）、舒张末期后壁厚度（PWTd）、舒张末期室间隔厚度（IVSTd），并计算 E/A、E/E 及左心室质量（LVM）值。使用 Pearson 法分析血清 miR-152-5p、LTBP-2、E/A、E/E 与LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM 之间的相关性。结果 HFpEF 组患者 E/A 值低于对照组，血清miR-152-5p、LTBP-2 水平及 E/E 值高于对照组，差异有统计学意义（t=12.722、21.830、9.882、15.979，P 0.05）。HFpEF 组患者的 LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM 水平高于对照组，差异有统计学意义（t=2.044、2.894、5.733、3.973，P 0.05）。HFpEF 组患者血清 miR-152-5p、LTBP-2、E/E 表达水平均与 LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM 呈正相关（r=0.447、0.425、0.437、0.473、0.414、0.338、0.422、0.347、0.492、0.412、0.385、0.367，P 0.05）；E/A 与 LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM 呈负相关（r=-0.441、-0.374、-0.369、-0.438，P 0.05），见表 1。本研究经唐山中心医院伦理委员会审核通过。的医师操作，使患者处于呼气状态下进行测量，选择连续 3 个心动周期的平均值。使用脉冲多普勒测量各指标，包括 E、A、E，计算 E/A 以及 E/E。并记录左心室重构相关指数：左心室舒张末期内径（left ventricular end-diastolic diameter,LVIDd）、舒张末期后壁厚度（posterior wall thickness at end-diastolic,PWTd）、舒张末期室间隔厚度（interventricular septal thickness at end-diastolic,IVSTd）；计算左心室质量（left ventricular mass,LVM），L VM=0.81.04（LVIDdPWTdIVSTd）3LVIDd 3 0.6。1.3 统计学处理 采用 SPSS 25.0 版分析数据，计量资料以xs 表示，采用t检验，计数资料以例（%）表示，采用2检验；使用 Pearson 法分析 HFpEF 患者血清miR-152-5p、LTBP-2、E/A、E/E 与左心室重构相关指数的相关性。P 0.05为差异有统计学意义。2 结果2.1 两组血清miR-152-5p、LTBP-2、E/A、E/E水平的比较 HFpEF 组 E/A 低于对照组，血清 miR-152-5p、LTBP-2 水平及 E/E 值高于对照组，差异有统计学意义（P 0.050.050.050.05 注：HFpEF：射血分数保留的心力衰竭1.2 方法 HFpEF 组患者入院后，对照组体检时采集各项指标。1.2.1 实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测 miR-152-5p 相对表达量 使用 MicroRNA Assay试剂盒（Thermo Fisher Scientific）提取总RNA并进行质量检测，并逆转录成cDNA。采用Bio-Rad（美国）的 iTaqTM Universal SYBR Green Supermix 的 Roche LightCycler 480 系统进行操作，PCR 体系：2miRA PCR Mix 10 L，超 纯 水 8 L，cDNA 模 板 2 L。反应条件为：94预热 10 min，然后 96变性 10 s，50退火16 s，60延伸15 s，共42个循环。miR-152-5p 以 U6 作为内参，用 2-Ct法计算 miR-152-5p 的相对表达量。引物序列见表 2。表 2 实时荧光定量-PCR 引物序列基因名称正向引物 5-3反向引物 5-3U6CTCGCTTCGGCAGCACAAACCGCTTCACGAATTTGCGTmiR-152-5pCAGAGGTTCTGTGATACACTCGGTCCAGTTTTTTTTTTTTTTTTTAGTC 注：miR-152-5p：微小 RNA-152-5p1.2.2 酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测血清 LTBP-2 表达水平 采用人LTBP-2 ELISA 试剂盒（上海科顺生物科技有限公司）检测受检者血清 LTBP-2水平。1.2.3 超声心动图检测法 所有受检者均采用心动图及多普勒超声检查仪进行心脏检查，由我院经验丰富表 3 两组受检者血清 miR-152-5p、LTBP-2、E/A、E/E 水平的比较（xs）组别例数 miR-152-5pLTBP-2（g/L）E/AE/EHFpEF 组481.080.13 30.087.46 0.580.34 15.365.45对照组520.310.21 15.717.08 1.370.282.751.58t 值21.8309.88212.72215.979P 值0.010.010.010.01 注：miR-152-5p：微小 RNA-152-5p；LTBP-2：潜在转化生长因子结合蛋白 2；E：二尖瓣口舒张早期峰值充盈速度；A：二尖瓣口舒张晚期峰值充盈速度；E：二尖瓣环舒张早期峰值速度；HFpEF：射血分数保留的心力衰竭2.2 两组左心室重构指数 LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM的水平比较 HFpEF组受检者的LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM高于对照组，差异有统计学意义（P 0.05），见表 4。表 4 两组左心室重构指数 LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM 的 水平比较（xs）组别例数 LVIDd（mm）IVSTd（mm）PWTd（mm）LVM（g）HFpEF 组4849.314.439.362.2310.081.13 110.7830.19对照组5247.514.378.271.498.711.2590.3620.67t 值2.0442.8945.7333.973P 值0.050.050.010.01 注：LVIDd：左心室舒张末期内径；IVSTd：舒张末期室间隔厚度；PWTd：舒张末期后壁厚度；LVM：左心室质量；HFpEF：射血分数保留的心力衰竭2.3 HFpEF 组患者血清 miR-152-5p、LTBP-2、E/A、E/E 与左心室重构相关指数的相关性分析 HFpEF 63 心脑血管病防治 2024 年 2 月第 24 卷第 2 期 Cardio-Cerebrovasc Dis Prev Treat,February 2024,Vol.24,No.2组患者血清 miR-152-5p、LTBP-2 表达水平及 E/E 与LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM呈正相关性（P 0.05）；E/A 与 LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM 呈 负 相 关 性（P 0.05），见表 5。一样，LTBP-2 在某些临床环境中可能是一种有用的生物标志物；例如，LTBP-2 在肺中大量表达，其在急性呼吸困难患者血清中水平升高可能是患者死亡的新型预测指标15，另外也有研究表明，其可以作为心力衰竭生物标志物16。本研究中，HFpEF 组血清 LTBP-2 水平较对照组高，且 LTBP-2 表达水平与LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM 呈正相关，提示患者血清 LTBP-2 表达水平越高左心室重构越严重。相关研究发现，胃癌组织和细胞中 miR-152-3p/miR-152-5p 的比例异常，证明 miR-152-5p 在癌细胞中的稳定性较差，揭示了 miR-152-5p 可能通过靶向PIK3CA 在胃癌细胞中充当肿瘤抑制因子17。除此之外，也有研究证实 miR-152-5p在病理状态下表达异常，并在疾病发展中起重要的调节作用18-20。本研究结果发现，HFpEF 组患者血清 miR-152-5p 表达水平与LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM 呈正相关性关系，提示 miR-152-5p水平越高，患者左心室重构越严重。综上所述，血清 miR-152-5p、LTBP-2、E/E、E/A 与左心室重构关系密切。但本研究纳入例数少，结果具有一定的局限性，此外，本研究只探索了血清miR-152-5p、LTBP-2、E/E、E/A 与左心室重构的相关性，超声心动图指标与血清学指标的联合对左心室重构的预测和评价尚需探讨。参考文献1 李思懿，公威，聂绍平.基质细胞蛋白在急性心肌梗死后心肌损伤及重塑中的作用及机制研究进展 J.中华内科杂志，2021，60（5）：483-486.2 张志华，莫为春，郑风雅，等.超声心动图评价左心室射血分数正常终末期肾病患者左心脏重构和功能的价值研究 J.中国全科医学，2020，23（12）：1497-1503.3 苟春丽，刘永铭.射血分数保留心力衰竭患者右心室功能障碍的研究进展 J.中国全科医学，2020，23（16）：2085-2089.4 Wang J,Liang WJ,Min GT,et al.LTBP2 promotes the migration and invasion of gastric cancer cells and predicts poor outcome of patients with gastric cancerJ.Int J Oncol,2018,52(6):1886-1898.5 林能波，郑炜华，林永欢.冠心病患者血清 miR-335 和 LTBP-2水平及其临床意义 J.中国临床研究，2018，31（3）：317-320.6 王鑫洋，陶辉，丁季飞，等.miR-152 调控糖尿病心肌病心肌成纤维细胞增殖的作用 J.中国药理学通报，2000，36（1）：92-96.7 You W,Zhang X,Ji M,et al.MiR-152-5p as a microRNA passenger strand special functions in human gastric cancer cellsJ.Int J Biol Sci,2018,14(6):644-653.8 鲁志超.阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征对射血分数保留的心衰患者心脏结构及功能的影响 D.呼和浩特：内蒙古医科大学，2019.9 张雪鹤，周虹，陆尤.NT-proBNP 在左室射血分数正常心力衰竭的临床意义 J.影像研究与医学应用，2020，4（5）：128-表 5 HFpEF 组患者血清 miR-152-5p、LTBP-2、E/A、E/E与左心室重构相关指数的相关性分析指标miR-152-5pLTBP-2E/AE/Er 值P 值r 值P 值r 值P 值r 值P 值LVIDd0.447 0.010.414 0.01-0.441 0.010.492 0.01IVSTd0.425 0.010.338 0.05-0.374 0.010.412 0.01PWTd0.437 0.010.422 0.01-0.369 0.010.385 0.01LVM0.473 0.010.347 0.01-0.438 0.010.367 0.01 注：miR-152-5p、LTBP-2、E、A、E、LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM、HFpEF注解见表3、表43 讨论HFpEF 常见于女性，与左心室射血分数下降的心力衰竭患者相比，年龄相对较大，且近期和远期生存质量相对较差。急性心肌梗死等心血管疾病患者在病情进展过程中，常发生左心室重构，左心室重构是左心室异常扩大和形态病理性改变，患者常因左心室重构现象而预后不良11。因此寻找评估左心室重构严重程度的敏感指标是目前临床上急需解决的关键性问题。E/E 反映左心室充盈压，与有创心功能检查指标如等容舒张期时间常数、左心室舒张末期压力及硬度、肺毛细血管楔压等相关性良好，且优于 E/A，是目前临床上反映心脏舒张功能的关键指标之一12。研究发现舒张功能减退是 HFpEF 的重要特征，而 E/A 下降与舒张功能减退的严重程度密切相关13。E/E 值是反映心脏舒张功能的常用指标，其与左心室舒张末期压力、等容舒张期时间常数等心功能指标有关。本研究发现，HFpEF 组患者的 E/E 值高于对照组，E/A 值低于对照组，提示 HFpEF 组患者心功能减退。HFpEF组患者 E/A 与 LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM 呈负相关性关系，E/E 与 LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM 呈正相关性关系。提示 E/A、E/E 可以作为临床上反映舒张功能的关键指标之一。但 E/A、E/E 诊断的准确度仍然有限，所以需要联合辅助指标，以减少漏诊或误诊率。LTBP 是细胞外基质的重要组成部分，可与原纤维蛋白微原纤维相互作用，并在微原纤维生物学中具有许多不同的作用14。人类基因组中LTBP 有四种同种型（LTBP-1、-2、-3 和-4）5。LTBP-2 在弹性组织中大量表达，包括主动脉和肺，在细胞外微纤维和（或）弹性纤维的发育中起作用。与其他 LTBP 64 心脑血管病防治 2024 年 2 月第 24 卷第 2 期 Cardio-Cerebrovasc Dis Prev Treat,February 2024,Vol.24,No.2129.10 中华医学会心血管病学分会心力衰竭学组，中国医师协会心力衰竭专业委员会，中华心血管病杂志编辑委员会.中国心力衰竭诊断和治疗指南 2018J.中华心血管病杂志，2018，46（10）：760-789.11 中华医学会心血管病学分会，中华心血管病杂志编辑委员会.急性 ST 段抬高型心肌梗死诊断和治疗指南（2019）J.中华心血管病杂志，2019，47（10）：766-783.12 张艺舰，王辉山，金岩，等.组织多普勒成像中二尖瓣舒张早期峰速/二尖瓣瓣环舒张早期峰速、二尖瓣舒张早期峰速/（二尖瓣瓣环舒张早期峰速 二尖瓣瓣环收缩期峰速）对冠状动脉搭桥术后心力衰竭评估价值 J.临床军医杂志，2021，49（8）：844-847.13 沈晓辉，杨文娟，程慧，等.N 末端脑利钠肽前体和二尖瓣舒张早期血流峰速度与二尖瓣环舒张早期运动速度比值预测心力衰竭患者预后价值 J.临床误诊误治，2020，33（5）：64-69.14 吴英凤，王林，杨丽.冠心病患者血清微小核糖核酸-335、潜在转化生长因子结合蛋白 2 的表达及意义 J.山东医药，2019，59（16）：20-23.15 Rifkin DB,Rifkin WJ,Zilberberg L.LTBPs in biology and medicine:LTBP diseasesJ.Matrix Biol,2018,71-72:90-99.16 Vollbach K,Trepels-Kottek S,Elbracht M,et al.Clinical report:Alveolar capillary dysplasia without misalignment of pulmonary veins,hyperinflammation,megalocornea and overgrowthAssociation with a homozygous 2bp-insertion in LTBP2J.Eur J Med 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