甲酸表面脱钙法在骨髓活检荧光原位杂交制片中的应用_滕孝静.pdf

临床和实验医学杂志，2021，20(17):1866 1869 13 刘盛，张维波，向斌，等 GATA 6，Dkk 1 及 bFGF 在垂体腺瘤中的表达及与预后的相关性J 临床误诊误治，2022，35(1):4347 14 陈辉，茅建娅，马震，等 Gal 1、GPX3 及 Tg 水平与甲状腺癌病情严重程度的关系分析J 实用癌症杂志，2022，37(8):1276 1279 15 刘亚琪，郑承红 mi 205 通过靶向调控 Wnt 5a 抑制乳头状甲状腺癌的细胞增殖J 基础医学与临床，2021，41(3):358 363(收稿日期:2022 11 28)DOI:10 3969/j issn 1671 4695 2023 07 024文章编号:1671 4695(2023)07 0762 05甲酸表面脱钙法在骨髓活检荧光原位杂交制片中的应用滕孝静刘伟王凤李颖鸿毕阔孙岚(首都医科大学附属北京友谊医院病理科北京100050)【摘要】目的对骨髓活检组织使用甲酸溶液进行表面脱钙，提高其石蜡切片荧光原位杂交检测的成功率，为骨髓内淋巴瘤的精确诊治及预后判断提供分子生物学依据。方法回顾性收集 2015 年 1 月至 2022 年 5 月间首都医科大学附属北京友谊医院病理科骨髓活检组织 58 例，其中套细胞淋巴瘤 33 例，弥漫大 B 细胞淋巴瘤 21 例，滤泡性淋巴瘤 4例。根据常规制片前所用脱钙液和脱钙方式的不同，将实验分为 3 组:硝酸传统脱钙组(DG1)、硝酸表面脱钙组(DG2)和甲酸表面脱钙组(DG3)。其中 DG2 组和 DG3 组蜡块在荧光原位杂交制片前，需放入 50%甲酸溶液中二次脱钙 10min，流水冲洗 10 min。之后对 3 组蜡块进行连续切片，每例捞取组织面 2 张，分别用于苏木素和伊红染色和杂交检测。结果DG1 组、DG2 组和 DG3 组杂交的成功率分别为 5 6%(1/18)、94 7%(18/19)和 95 2%(20/21)。与 DG1 组相比，DG2 组和 DG3 组杂交成功率明显升高，差异有统计学意义(P 0 05)。DG2 组和 DG3 组成功率之间差异无统计学意义(P 0 05)。DG2 组 13 例 MCL 和 1 例 FL、DG3 组 8 例 MCL 和 2 例 FL 中的 CCND1/IGH 和 BCL2/IGH 融合探针检测均为阳性。DG1 组1 例 DLBCL、DG2 组5 例 DLBCL、DG3 组11 例 DLBCL 细胞内 MYC 基因均未出现异常断裂信号，表现为两个红绿融合的黄色信号。杂交成功的切片上组织结构完整，细胞轮廓清楚，信号定位准确。结论甲酸表面脱钙法脱钙速度快，荧光原位杂交检测成功率高，结果准确。甲酸代替硝酸，配制安全而且容易购买。该法在骨髓活检FISH 制片中的应用具有重要的临床价值，应用前景广阔，值得推广。【关键词】原位杂交荧光骨髓活检淋巴瘤Application of formic acid surface decalcification in fluorescence in situ hybridization section preparation of bone marrow biopsy TENG Xi-ao jing，LIU Wei，WANG Feng，et al Department of Pathology，Beijing Friendship Hospital，Capital Medical University，Beijing 100050，China【Abstract】ObjectiveA method of formic acid surface decalcification in bone marrow biopsy specimen was established to improve thesuccess rate of fluorescence in situ hybridization detection of paraffin sections，and provide molecular biological basis for accurate diagnosis，treat-ment and prognosis for bone marrow lymphoma MethodsFrom January 2015 to May 2022，fifty eight cases of bone marrow biopsy tissues fromthe Department of Pathology，Beijing Friendship Hospital，Capital Medical University were retrospectively collected，including 33 mantle cell lym-phoma，21 diffuse large B cell lymphoma and 4 follicular lymphoma According to the difference of decalcification solution and decalcificationmethod before routine preparation，the experiment was divided into three groups:nitric acid traditional decalcification group(DG1)，nitric acidsurface decalcification group(DG2)and formic acid surface decalcification group(DG3)Before fluorescence in situ hybridization，blocks inDG2 and DG3 groups were placed in 50%formic acid solution for a second decalcification for 10 min and washed under water for 10 min Afterthat，the blocks from three groups were sliced continuously，and two tissue slices were extracted from each case for HE staining and hybridizationdetection respectively esultsThe success rates of hybridization in groups DG1，DG2 and DG3 were 5 6%(1/18)，94 7%(18/19)and95 2%(20/21)，respectively Compared with DG1 group，the success rate of hybridization in DG2 and DG3 groups was significantly increased，and the difference was statistically significant(P 0 05)There was no statistically significant difference of the success rate between DG2 groupand DG3 group(P 005)Fusion probe detection of CCND1/IGH and BCL2/IGH in 13 MCL and 1 FL in DG2 group and 8 MCL and 2 FL inDG3 group were positive The MYC gene of 1 DLBCL in DG1 group，5 DLBCL in DG2 group，and 11 DLBCL in DG3 group showed no abnormalbreak signal，which showed two yellow signals In the successful sections，the tissue structure was complete，the cell outline was clear，and thesignal location was accurate ConclusionThe method of formic acid surface decalcification in bone marrow biopsy has the advantage of fast decal-cification speed，high success rate and accurate results of fluorescence in situ hybridization Formic acid replaces nitric acid，which is safe andeasy to purchase So the application of this method has important clinical value in accurate diagnosis，treatment and prognosis of bone marrow lym-phoma，and it is worth promoting【Key words】In situ hybridization;Fluorescence;Bone marrow biopsies;Lymphoma基金项目:国家重点研发计划“老年人多病共患临床大数据与生物样本库综合管理共享平台建设”项目资助(编号:2020YFC2004800)淋巴瘤是起源于淋巴结和结外淋巴组织的一组恶性肿瘤，常以淋巴结肿大或局部肿块先发，后可累及骨髓。骨髓活检(bone marrow biopsy，BMB)是诊断骨髓内淋巴瘤的主要组织形式之一，一小段组织中除含有娇嫩的淋巴造血细胞、软组织，还含有坚硬的骨质，必须将骨质脱钙后才能制成完整的石蜡切片进行病理检测。酸性脱钙液(硝酸、盐酸、甲酸等)因脱钙速度快，能够满足267Journal of Clinical and Experimental Medicine Vol22，No7Apr2023临床快速发出形态学初诊报告而在病理科广泛应用1 2。荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridiza-tion，FISH)技术是一项能将组织、细胞的形态学改变与染色体/基因异常有机结合的一项分子细胞遗传学技术，在淋巴瘤、肺癌、胃癌、乳腺癌等肿瘤的诊治及预后判断中具有重要的指导意义3，可用于大多数组织石蜡切片中。但在酸性溶液脱钙的 BMB 石蜡切片上，FISH不易取得理想结果，国内外在此方面的报道也较少4，这主要是因为传统脱钙方法中，酸性溶液在脱钙的同时会显著降解细胞内的 DNA，进而导致 FISH 检测失败5。本研究经过反复摸索，尝试使用甲酸表面脱钙法对 BMB 组织进行脱钙，提高其石蜡切片荧光原位杂交检测的成功率，为骨髓内淋巴瘤的精确诊治及预后判断提供分子生物学依据。1资料与方法1 1组织来源及分组回顾性收集首都医科大学附属北京友谊医院病理科 2015 年 1 月至 2022 年 5 月的BMB 组织58 例，其中弥漫大 B 细胞淋巴瘤(diffuse largeB cell lymphoma，DLBCL)33 例，套细胞淋巴瘤(mantlecell lymphoma，MCL)21 例，滤泡性细胞淋巴瘤(follicularlymphoma，FL)4 例。根据病理科在不同时期对 BMB 组织常规染色(苏木素和伊红染色、免疫组织化学染色)制片前所用脱钙液及脱钙方法的不同，将实验分为 3 组:硝酸传统脱钙组(DG1 组)、硝酸表面脱钙组(DG2 组)、甲酸表面脱钙组(DG3 组)。具体组织脱钙特点及病理诊断见表 1。表 158 例骨髓活检样本脱钙特点及病理诊断组别例数常规制片前脱钙液常规制片前脱钙方法常规制片前脱钙时间FISH 制片前脱钙时间诊断(例)DG1 组185%硝酸脱钙液传统脱钙法2 h不脱钙套细胞淋巴瘤(12)、弥漫大 B 细胞淋巴瘤(5)、滤泡性淋巴瘤(1)DG2 组195%硝酸脱钙液表面脱钙法1 h10 min套细胞淋巴瘤(13)、弥漫大 B 细胞淋巴瘤(5)、滤泡性淋巴瘤(1)DG3 组2150%甲酸脱钙液表面脱钙法1 h10 min套细胞淋巴瘤(8)、弥漫大 B 细胞淋巴瘤(11)、滤泡性淋巴瘤(2)1 2试剂及仪器50%甲酸脱钙液:甲酸 500 mL，蒸馏水 500 mL。5%硝酸脱钙液:硝酸 50 mL，蒸馏水 950mL。CCND1/IGH 融合探针、BCL2/IGH 融合探针、MYC(8q24)断裂探针均购自广东安必平公司。杂交仪购自Thermobrite 公司，型号 S500。荧光显微镜购自德国蔡司公司，型号 Imager M2。1 3方法1 3 1传统脱钙法病理科在 2015 年 1 月至 2016 年12 月间对 BMB 组织的处理使用传统脱钙法:即整条骨髓组织先经甲醛固定，之后放入 5%硝酸脱钙液中浸泡2 h，以整条骨髓组织内的钙质去除为脱钙终点，脱钙结束后，流水冲洗 1 h，脱水机系列处理后石蜡包埋、制片、常规染色。本文 DG1 组的组织采用此脱钙法。1 3 2表面脱钙法2017 年 1 月至今，病理科对 BMB组织的处理使用表面脱钙法。BMB 组织的前期处理与其他类型的组织相同:固定、脱水机中系列处理、石蜡包埋。脱钙在常规制片前进行，具体步骤如下:粗修蜡块，使组织最大面暴露，然后将蜡块浸泡于酸性脱钙液中，根据所需切片数量的多少，评估组织脱钙深度，优化脱钙时间。本文 DG2 组和 DG3 组均采用此法脱钙。两组不同之处:2017 年 1 月至 2020 年 12 月病理科接收的BMB 组织(DG2 组)，使用5%硝酸溶液脱钙1 h，流水冲洗30 min。2021 年1 月至今，由于硝酸属于强腐蚀性危化品，管控严格，购买困难，病理科对接收的 BMB 组织(DG3 组)改用 50%的甲酸溶液脱钙 1 h，流水冲洗 30min。1 3 3荧光原位杂交DG2 组和 DG3 组的蜡块在FISH 制片前，需使用 50%甲酸溶液二次脱钙 10 min，流水冲洗 10 min。之后与 DG1 组的蜡块一起，每例连续切片 2 张，用普通载玻片和涂胶载玻片各捞取 1 个组织面，分别用于苏木素和伊红染色、FISH 检测。普通载玻片烤片 1 h，放入自动染色机中行苏木素和伊红染色。涂胶载玻片放入 60 烤箱中烤片过夜，次日取出，进行病理科常规 FISH 检测流程:切片依次放入 3 缸二甲苯中脱蜡，每缸 10 min，石蜡脱净后，将切片梯度乙醇水化，并放入乙二醇双四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid，EGTA)修复液中高压修复2 min，接着放入37 预热的胃蛋白酶(0 5 g/L)中浸泡 5 min，消化完毕取出切片，放入蒸馏水中浸洗 2 min，梯度乙醇脱水，室温放置切片至完全干透。在切片上的目标区域滴加相应的检测探针，盖玻片覆盖，橡皮胶封闭。之后将切片放入杂交仪中，变性 5 min(85)，杂交过夜(37)。次日对玻片进行洗涤和荧光信号观察:水浴锅中孵育 0 1%NP40/2 SSC 洗液至 75。从杂交仪中取出玻片，去除周围的橡皮胶，依次放入室温 2 SSC 洗液、水浴孵育的 0 1%NP 40/2 SSC 洗液、75%乙醇中 5、2、2 min。暗室中室温干燥玻片。组织区域滴加 DAPI 复染细胞核，覆盖盖玻片后 4 冰箱放置 10 min，荧光显微镜下进行阅片并采图。1 4FISH 检测成功及失败的标准组织中75%的细胞核中出现红、绿两种颜色的荧光信号，并且红、绿信号互为对照，肿瘤与非肿瘤细胞互为对照，视为杂交成功。杂交失败:(1)细胞核轮廓难以分辨;(2)可用于计数信号的细胞比例 75%;(3)背景中有非特异强自发荧光。1 5FISH 结果判读CCND1/IGH、BCL2/IGH 融合探367临床和实验医学杂志2023 年 4 月第 22 卷第 7 期针的判读标准:正常基因信号模式:2 个分开的红色和 2个分开的绿色信号;典型基因融合信号模式为:1 个红色、1 个绿色和 2 个红、绿融合的信号。每个病例分析200 个肿瘤细胞，出现融合信号的细胞数目5%确定为阳性。MYC 断裂探针的判读标准:正常基因信号模式为:2 个红、绿融合的信号;典型基因断裂信号模式为:1 个红色、1 个绿色和 1 个红、绿融合的信号。每个病例分析 200 个肿瘤细胞，出现断裂信号的细胞数目15%确定为阳性。1 6统计学处理应用 SPSS 20 0 统计软件进行数据分析，计数资料以例或百分率(%)表示，采用 2检验或Fisher 确切概率法;P 0 05 为差异有统计学意义。2结果2 1FISH 制片FISH 制片时，DG3 组 1 例 MCL 蜡块脱钙不充分，切片时阻力较大，组织切面不平、有褶皱和刀痕，继续脱钙 2 min 后，切片成功。其余所有蜡块在制片时，均脱钙充分，切片顺畅，无砂粒感，切面完整，组织无破碎，无刀痕。普通玻片经苏木素和伊红染色后组织平整无褶皱，造血细胞清晰可见，骨小梁无脱落。2 2FISH 检测的成功率根据杂交成功与失败的标准，对 3 组切片进行 FISH 结果判读。DG1 组杂交的成功率为 5 6%(1/18)，1 例 DLBCL 的细胞核内出现杂交成功的荧光信号，其余 17 张切片中均未出现荧光信号，杂交失败。DG2 组杂交的成功率为 94 7%(18/19)，1例 MCL 的细胞核内未出现荧光信号，杂交失败，其余 18张切片均杂交成功。DG3 组杂交的成功率为 95 2%(20/21)，1 例 MCL 切片中出现大量非特异强自发荧光，干扰正常信号的判读，杂交失败，其余 20 张切片均杂交成功。与传统脱钙法(DG1 组)相比，表面脱钙法(DG2 组和 DG3 组)的成功率明显升高，差异有统计学意义(2=29 427、31 367，P 0 05)。两组表面脱钙法间的成功率差异无统计学意义(2=0 427，P 0 05)。见表 2。表 23 组骨髓活检 FISH 检测成功率比较例(%)组别例数成功失败DG1 组181(5 6)17(944)DG2 组1918(947)1(53)DG3 组2120(952)1(48)2 3FISH 检测结果DG2 组 13 例 MCL 和 1 例 FL，DG3 组 8 例 MCL 和2 例 FL 中的 CCND1/IGH 和 BCL2/IGH 融合探针检测均为阳性。DG1 组 1 例 DLBCL、DG2组5 例 DLBCL、DG3 组11 例 DLBCL 细胞内 MYC 基因均未出现异常断裂信号，表现为两个红绿融合的黄色信号。2 4组织、细胞结构3 组切片中的肿瘤细胞均保持完整，未见脱片，细胞核轮廓清楚。杂交成功的组织，信号清晰，定位准确。见图 1。图 1甲酸表面脱钙法处理的骨髓活检 FISH 结果注:A:DG3 组套细胞淋巴瘤 CCND1/IGH 融合探针阳性;B:DG3 组弥漫大 B 细胞淋巴瘤 MYC 断裂探针阴性;C:DG3 组滤泡性淋巴瘤 BCL2/IGH 融合探针阳性3讨论MCL 是一种高侵袭性淋巴瘤，预后不佳、易复发，骨髓侵犯发生率为 88%100%6，几乎所有 MCL 均存在t(11，14)(q13;q32)基因异位7，FISH 技术使用 CC-ND1/IGH 融合探针检测 t(11，14)易位具有较高的敏感性和特异性，目前已作为国外日常辅助诊断 MCL 的首选方法。DLBCL 是成人淋巴瘤的常见类型，骨髓侵犯发生率约为 11%到 34%8，MYC 基因易位和 DLBCL高侵袭性关系密切，这类患者使用传统治疗方案效果不理想，预后较差9。FL 是常见的惰性淋巴瘤之一，骨髓侵犯发生率约为 25%到 41%10 11，t(14，18)(q32;q21)染色体易位是 FL 典型的细胞遗传学异常，80%以上普通 FL 存在该易位12。FISH 使用 BCL2/IGH 融合探针检测 t(14，18)易位成为推荐方法。BMB 组织含有坚硬的骨质，石蜡包埋后直接制片非常困难，常用的方法是制片前使用脱钙液将其中的钙盐去除。脱钙液大致可分为螯合脱钙剂和酸性脱钙液两种。螯合脱钙剂能与骨质中的钙盐在中性条件下进行螯合反应，形成可溶的非离子螯合物进而实现脱钙。优点是对组织内抗原、核酸的影响小，适合进行免疫组织化学、分子检测。缺点是脱钙速度慢，通常需要 20 48 h13 14，虽然近几年螯合脱钙剂不断改进，但其脱钙速度仍然不能满足国内大多数病理科的需求，目前主要用于科研15。酸性脱钙液具有脱钙速度快(通常1 2 h)、配制简单、反应条件要求不高、价格低廉等优点，是临床最常用的脱钙液1。但 FISH 检测在酸性脱钙液脱钙的 BMB 石蜡切片中却不易取得理想结果，大大限制了其在 BMB 肿瘤中的应用。大部分病理科在使用酸性脱钙液脱钙时，采用的是传统脱钙法2:即直接将整条 BMB 组织放入酸性脱钙液中浸泡，待组织内钙质被全部去除后，再放入脱水机中进行系列处理、包埋及制片。该法看似“一劳永逸”，后续所有检测无需再行脱钙处理，但完全脱钙的同时延长了酸性溶液与组织反应的时间，造成组织内大部分DNA 受到酸的破坏而无法检出5，尤以脱钙速度快的强酸性脱钙液更加明显。本研究在 5%硝酸脱钙液传统脱钙 2 h 的 BMB 组织上进行 FISH 检测，成功率仅为467Journal of Clinical and Experimental Medicine Vol22，No7Apr20235 56%。为了平衡脱钙速度和 DNA 破坏之间的关系，Michael 等4 将强酸性的硝酸脱钙液换成弱酸性的 10%和 5%的甲酸脱钙液，延长传统脱钙时间至 7 9 h 或过夜，其 FISH 检测的成功率尽管提高到 46%，但结果依旧不令人满意。因此改进酸性脱钙液的脱钙方法成为病理工作者探索的重要方向。表面脱钙法是近年来新兴的酸性溶液脱钙法，用于甲状腺钙化组织、骨手术切除组织、BMB 组织的常规脱钙中，保护细胞抗原免受酸的破坏以提高免疫组织化学抗体染色的阳性率。该法无需去除整块组织内的全部钙质，只需粗修蜡块，对暴露面浅层组织进行脱钙，根据脱钙液脱钙强度和所需切片数量，优化脱钙时间即可。以常规制片时每个骨髓蜡块需要 30 张切片、每张切片厚度 3 m 为例，只需将 90 m 深的组织脱钙即可，与传统脱钙法将直径 2 000 m 的组织完全脱钙相比，这种方法在进一步缩短脱钙时间的同时减少了酸对组织内抗原蛋白的破坏，因此近年来在常规制片前的应用时有报道。但目前在 FISH 制片中的应用报道则很少。首都医科大学附属北京友谊医院病理科作为北京市淋巴瘤诊断研究中心，近年来接收的 BMB 疑难会诊病例越来越多。为了增强 BMB 组织的精确诊治及预后判断，提高石蜡切片 FISH 检测的成功率，本课题组前期使用5%硝酸脱钙液联合表面脱钙法初步建立了 BMB 石蜡切片 FISH 检测的流程16。由于硝酸是强腐蚀性危化品，配制危险，安全隐患大，加之近年来北京市对危化品管控的加强，硝酸等强腐蚀性危化品现已很难购买。2021 年之后笔者科室对 BMB 组织改用货源充足、购买容易的弱酸性脱钙液50%甲酸脱钙液联合表面脱钙法进行常规脱钙(常规染色前)，脱钙时间与 5%硝酸脱钙液相同(1 h)，能够满足苏木素和伊红及免疫组织化学染色所需切片数量(20 30 张)。本研究在此基础上对FISH 检测的流程进行摸索和优化，以达到较高的成功率。FISH 检测属于分子生物学检测平台，通常在常规苏木素和伊红染色和免疫组织化学染色之后进行。为了确定常规脱钙后、FISH 制片前是否需要二次脱钙，预实验时笔者对组织分别进行了不脱钙、脱钙 5 min、脱钙10 min 的时间梯度试验。结果发现，不脱钙或者二次脱钙 5 min，小部分组织能切出完整的切片，大部分组织切片时出现砂粒感，切面出现刀痕、撕裂甚至无法制片。而脱钙时间延长到 10 min，95%(19/20)的组织可顺利制片 3 5 张，满足 FISH 检测需求。本研究中甲酸表面脱钙组的 21 例组织，只有 1 例 MCL 蜡块脱钙不充分，在延长脱钙时间 2 min 后与其余 20 例组织均制出了光滑、完整的切片，且 FISH 检测的成功率达到 95 24%，与 EDTA 脱钙的组织 FISH 检测成功率接近4。对于本科室前期常规脱钙中，使用硝酸表面脱钙的组织，为了保证今后 FISH 检测的成功率，本研究笔者也使用甲酸二次脱钙的方法进行了尝试(DG2 组)，结果 19 例组织均脱钙充分，制片顺利，且 FISH 检测的成功率为 94 74%(18/19)。本次笔者摸索的甲酸二次脱钙时间(10 min)比前期摸索的硝酸二次脱钙时间(1 h)缩短了50 min 16。本文介绍的方法在具体应用中还需要注意以下方面:(1)由于二次脱钙时间短(10 min)，脱钙程度比较表浅，所以组织制片时需要开刀就切，尽量减少修面。(2)BMB 组织是小活检，前面又经过了苏木素和伊红染色、免疫组织化学染色，所以 FISH 制片时需同步捞取连续切面一张进行苏木素和伊红染色，以准确定位肿瘤区域、判断肿瘤细胞数量。4结论本文介绍的骨髓活检组织甲酸表面脱钙法，脱钙速度快，对 DNA 的破坏小，FISH 检测成功率高，结果准确，可为骨髓内淋巴瘤的精确诊治及预后判断提供有效的依据，具有重要的临床应用价值。同时试剂配制安全，易购买，加之弱酸脱钙液(甲酸脱钙液)代替强酸脱钙液是未来酸性脱钙液发展的方向，所以该方法应用前景广阔，值得推广。参考文献 1施栋梁，胡晓梅，郑宇辉，等 盐酸脱钙液后脱钙在骨髓组织活检中的应用及体会J 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诊断甲状腺乳头状癌患者中央区淋巴结转移的敏感度为 76 79%，特异度为 91 18%，受试者工作特征(OC)曲线下面积(AUC)值为0 840;Tg 诊断甲状腺乳头状癌患者中央区淋巴结转移的敏感度为 82 14%，特异度为 91 18%，OC AUC 值为 0 867;FNAC+Tg 诊断甲状腺乳头状癌患者中央区淋巴结转移的敏感度为 96 43%，特异度为 85 29%，OC AUC 值为 0 909;US FNAC 诊断甲状腺乳头状癌患者侧颈区淋巴结转移的敏感度为 71 67%，特异度为 93 33%，OC AUC 值为 0 840;Tg 诊断甲状腺乳头状癌患者侧颈区淋巴结转移的敏感度为 75 00%，特异度为 93 33%，OC AUC 值为 0 842;US FNAC+Tg 诊断甲状腺乳头状癌患者侧颈区淋巴结转移的敏感度为 95 00%、特异度为 86 67%、OC AUC 值为 0 908。结论US FNAC 与 Tg 单独应用时诊断甲状腺乳头状癌发生中央区和侧颈区淋巴结转移的敏感度较低，二者联合可显著提高诊断的敏感度，同时保证特异度，对于术前制定淋巴结清扫方案具有一定的参考价值。【关键词】超声引导下细针穿刺活检洗脱液甲状腺球蛋白甲状腺乳头状癌淋巴结转移Safety and effectiveness of neck lymph node dissection for thyroid cancer guided by FNAC and Tg levels of puncture eluent LIU Li，XUong bo，YE Xin hua，et al Department of Ultrasound Medicine，Suqian First Peoples Hospital，Suqian Jiangsu 223800，China【Abstract】ObjectiveTo investigate the value of ultrasound guided fine needle aspiration biopsy(US FNAC)combined with thyro-globulin(Tg)in the eluent after puncture in preoperative diagnosis of lymph node metastasis of papillary thyroid carcinoma and the development ofdissection plan MethodsIn this study，ninety patients with papillary thyroid carcinoma who underwent surgical treatment and underwent central+lateral lymph node dissection in Suqian First Peoples Hospital from January 2021 to September 2022 were selected by retrospective study proto-col All patients underwent US FNAC examination of central and lateral cervical lymph nodes before surgery，and Tg in the puncture needle elu-ent was examined Postoperative pathological results were used as the gold standard，the value of US FNAC and Tg alone and in combination inthe diagnosis of central and lateral cervical lymph node metastases was calculated esultsA total of 90 patients with papillary thyroid carcinomawho underwent total thyroidectomy，unilateral lobectomy or thyroid surgery+central zone+lateral zone lymphadenectomy，56 patients were con-firmed to be positive for central zone lymph node metastasis and 60 patients were positive for lateral cervical zone lymph node metastasis Pathologi-cal results were used as the gold standard，the sensitivity，specificity of US FNAC in the diagnosis