临床基因扩增检验质量保证.ppt
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1、临床基因扩增检验质量保证质量保证质量保证()l为一产品或效劳满足特定质量为一产品或效劳满足特定质量要求提供充分可信性所必要的要求提供充分可信性所必要的有方案的和系统的措施。有方案的和系统的措施。l 2021/1/122室内质量控制室内质量控制 )的概念的概念l由实验室工作人员,采取一定的方法和步骤,由实验室工作人员,采取一定的方法和步骤,连续评价本实验室工作的可靠性程度,旨在连续评价本实验室工作的可靠性程度,旨在监测和控制本实验室工作的精细度,进步本监测和控制本实验室工作的精细度,进步本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性,室常规工作中批内、批间样本检验的一致性,以确定测定结果是否可靠、可否
2、发出报告的以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。一项工作。l可概括为可概括为:(1):(1)执行者:实验室技术人员;执行者:实验室技术人员;(2)(2)目的:监测实验室测定的重复性;目的:监测实验室测定的重复性;(3)(3)功能:功能:决定了当批测定的有效性,报告可否发出。决定了当批测定的有效性,报告可否发出。是对实验室测定的即时性评价。是对实验室测定的即时性评价。2021/1/123室间质量评价室间质量评价 ,l为为客客观观比比较较一一实实验验室室的的测测定定结结果果与与靶靶值值的的差差异异,由由外外单单位位机机构构,采采取取一一定定的的方方法法,连连续续、客客观观地地评评价价实实
3、验验室室的的结结果果,发发现现误误差差并并校校正正结结果果,使使各各实实验验室室之之间间的的结结果果具具有有可可比比性性。这这是是对对实实验验室室操操作作和和实实验验方方法法的的回回忆忆性性评评价价,而而不不是是用用来来决决定定在在实实时时的的测测定定结结果果的的可可承承受受性性。当当用用来来为为执执业业答答应应或或实实验验室室认认证证的的目目的的而而评评价价实实验验室室操操作作时时,常常描描绘绘为为实实验验室室才能验证才能验证,。在以前的文献中,常描绘室间质量控制。在以前的文献中,常描绘室间质量控制。2021/1/124批批()()l在一样条件下所获得的一组测定。在一样条件下所获得的一组测定
4、。2021/1/125定 义l正态分布正态分布()当一质控物用同一方法在当一质控物用同一方法在不同的时间重复屡次测定,当测定数据不同的时间重复屡次测定,当测定数据足够多时,如以横轴表示测定值,纵轴足够多时,如以横轴表示测定值,纵轴表示在大量测定中相应测定值的个数,表示在大量测定中相应测定值的个数,则可得到一个两头低,中间高,中为所则可得到一个两头低,中间高,中为所有测定值的均值,左右对称的有测定值的均值,左右对称的“钟形钟形曲线,亦即正态分布,又称高斯分布。曲线,亦即正态分布,又称高斯分布。2021/1/126正态分布的根本统计学含义可用均数X、标准差s和概率来说明。2021/1/127临床基
5、因扩增检验实验室常规测定步骤l标本搜集:选择测定工程、标本搜集和保存。标本搜集:选择测定工程、标本搜集和保存。l实验室测定:标本接收、贴标签、样本处理、核实验室测定:标本接收、贴标签、样本处理、核酸扩增、产物检测、测定的有效性和临床诊疗价酸扩增、产物检测、测定的有效性和临床诊疗价值。值。l报告和解释:结果发出、结果解释和临床管理。报告和解释:结果发出、结果解释和临床管理。2021/1/128质量保证、室内质控和室间质评之间的关系2021/1/129临床标本搜集、运送、保存临床标本搜集、运送、保存及其质量控制及其质量控制 l标本搜集 l标本保存l标本运送 2021/1/1210标本搜集l标本采集
6、时间对扩增检测结果的影响标本采集时间对扩增检测结果的影响 l标本采集部位的准备标本采集部位的准备 l标本的类型和采集量标本的类型和采集量 l采样质量的评价采样质量的评价 l采样及运输容器采样及运输容器 l标本采集中的防污染标本采集中的防污染 2021/1/1211标本采集时间对扩增检测结果的影响l在疾病开展过程中,标本采集过早或过在疾病开展过程中,标本采集过早或过晚都可能会给出假阴性结果。晚都可能会给出假阴性结果。2021/1/1212标本采集部位的准备l血液标本采集血液标本采集l分分泌泌物物标标本本:采采集集部部位位的的清清洁洁消消毒毒可可去去掉掉污污染染的的微微生生物物或或其其它它杂杂物物
7、,但但应应适适度度,过过度度清清洁洁消消毒毒有有可可能能会会去去掉掉或或破破坏坏靶靶微微生生物物,故故标标本本采采集集部部位位的的准准备备应应由由训训练练有有素素的的人人员员进展。进展。2021/1/1213标本的类型和采集量l标本的类型标本的类型:血清血清(浆浆)、分泌物、痰、分泌物、痰、粪便、尿和脑脊液等。粪便、尿和脑脊液等。l标本的采集量标本的采集量:应根据所测病原体而定。应根据所测病原体而定。一般来说,假如标本的量对病原体培一般来说,假如标本的量对病原体培养够用的话,则其量亦足以用于核酸养够用的话,则其量亦足以用于核酸提取及其后的扩增检测。提取及其后的扩增检测。l对于定量测定来说,对标
8、本的搜集要对于定量测定来说,对标本的搜集要求更为准确。求更为准确。2021/1/1214采样质量的评价l血清血清(浆浆)标本标本:溶血、脂血等;溶血、脂血等;l分泌物、痰:评价内容包括细胞组成,分泌物、痰:评价内容包括细胞组成,所需类型细胞的数量和核酸总量。所需类型细胞的数量和核酸总量。l 评价方法:包括肉眼观察评价方法:包括肉眼观察,显微镜下观显微镜下观察和化学分析等。察和化学分析等。2021/1/1215采样及运输容器 l标本的采集材料如棉签应为一次性使标本的采集材料如棉签应为一次性使用;用;l采样及运输容器应为密闭的一次性无采样及运输容器应为密闭的一次性无菌装置;菌装置;l采样所用的防腐
9、剂、抗凝剂及相关试采样所用的防腐剂、抗凝剂及相关试剂材料不应对核酸扩增及检测过程造剂材料不应对核酸扩增及检测过程造成干扰。成干扰。2021/1/1216标本采集中的防污染标本采集中的防污染 l采集中要特别注意污染,防止混入采集中要特别注意污染,防止混入操作者的头发、表皮细胞、痰液等;操作者的头发、表皮细胞、痰液等;l 如使用玻璃器皿,必须经高压灭菌,如使用玻璃器皿,必须经高压灭菌,以使可能存在的失活。以使可能存在的失活。2021/1/1217标本保存标本保存 l靶核酸靶核酸(尤其是尤其是)易受核酸酶的作易受核酸酶的作用而迅速降解,因此标本的保存用而迅速降解,因此标本的保存对于核酸扩增测定的有效
10、性极为对于核酸扩增测定的有效性极为重要。重要。l使用作为稳定剂保存标本,标本使用作为稳定剂保存标本,标本可在室温下稳定约可在室温下稳定约7天。天。2021/1/1218标本保存标本保存l临床体液标本长期保存应在-70下。l如为提取核酸后用于扩增分析的样本,可于10 ,1(7.58.0)缓冲液中4 下保存。l用于扩增分析的样本,则应于上述缓冲液中-80或液氮下保存。l核酸的乙醇沉淀物则可于-20下保存。2021/1/1219标本运送标本运送 l样本一经采集,则应尽可能快的送至检样本一经采集,则应尽可能快的送至检测实验室。测实验室。l样本中如参加了适当的稳定剂样本中如参加了适当的稳定剂,如用于测如
11、用于测定参加的血清定参加的血清(浆浆)样本和用于测定的抗样本和用于测定的抗凝血等凝血等,则可在室温下运送或邮寄。则可在室温下运送或邮寄。l实验室应根据待测靶核酸的特性,对各实验室应根据待测靶核酸的特性,对各种临床样本的运送条件作出相应的规定。种临床样本的运送条件作出相应的规定。2021/1/1220临床基因扩增检验的室内质量控制临床基因扩增检验的室内质量控制l测定前的质量控制测定前的质量控制l核酸样本的制备及其质量控制核酸样本的制备及其质量控制 l统计学质量控制统计学质量控制l质量控制的评价质量控制的评价2021/1/1221测定前质量控制l实验室设施、仪器设备及管理实验室设施、仪器设备及管理
12、l理想的试剂和操作方法理想的试剂和操作方法 l人员培训人员培训2021/1/1222实验室设施、仪器设备及管理l临床基因扩增检验实验室应有充分合理临床基因扩增检验实验室应有充分合理的空间、良好的照明和空调设备的空间、良好的照明和空调设备 ;l实验室仪器设备应保养良好,实验用品实验室仪器设备应保养良好,实验用品要到达相应的要求。加样器的校准?带要到达相应的要求。加样器的校准?带滤塞吸头的使用及质检?离心机?热循滤塞吸头的使用及质检?离心机?热循环仪?水浴箱和环仪?水浴箱和/或恒温干浴仪?酶标或恒温干浴仪?酶标仪和洗板机?仪和洗板机?2021/1/1223理想的核酸扩增实验室设计理想的核酸扩增实验
13、室设计A产物分析区产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊专用走廊工作流向工作流向扩增区扩增区标本制备区标本制备区试剂准备区试剂准备区2021/1/1224产物分析区产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊专用走廊工作流向工作流向扩增区扩增区标本制备区标本制备区试剂准备区试剂准备区理想的核酸扩增实验室设计理想的核酸扩增实验室设计B2021/1/1225核酸扩增检测实验室设计的一般原则核酸扩增检测实验室设计的一般原则l各区独立l注意风向l因地
14、制宜l方便工作“十六字口诀十六字口诀2021/1/1226门门试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩增区扩增区产物分析区产物分析区外走廊外走廊门门门门门门门门试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩扩增增及及产产物物分析区分析区外走廊外走廊门门门门门门门门AB2021/1/1227试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩扩 增增 及及 产产物分析区物分析区门门门门门门门门空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向2021/1/1228走廊走廊走廊走廊试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩增和产扩增和产物分析区物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向其他实验室其
15、他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室2021/1/1229门试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩扩增增及及产产物分析区物分析区门门门空气流向空气流向空气流向空气流向+空气流向空气流向+走廊走廊试试 剂剂 准准 备备区区标标 本本 制制 备备区区扩增和产扩增和产物分析区物分析区空气流向空气流向+空气流向+其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室空气流向2021/1/1230产物分析区产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓
16、冲间缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊专用走廊工作流向工作流向扩增区扩增区标本制备区标本制备区试剂准备区试剂准备区传递窗传递窗传递窗2021/1/1231“无基因或无基因或“无核酸概念的重要性无核酸概念的重要性2021/1/1232基因扩增仪器设备的质控基因扩增仪器设备的质控2021/1/1233带滤芯吸头的使用及质检带滤芯吸头的使用及质检l首先制备一个含12%甘油及色素如甲基橙的水溶液,假如吸头的最大体积为100l,则将加样器汲取体积调至110120l,再套上吸头后汲取上述有色液体。假如吸头质量好,则有色液体不应出如今滤芯之上,否则说明滤芯不严。2021/1/1234核酸提取用离心管质检l离心管抑制
17、物质检离心管抑制物质检l其他其他2021/1/1235扩增仪孔间温度的重复性和均一性的检测方法l一是使用一种热电偶探针、微伏转换器和自动图示记录仪组成扩增加热模块孔内温度监测记录系统,当孔间温度变异超出1时,其可测出来。l详细做法是将装有缓冲液并上加石蜡油的扩增反响管放置于扩增仪各孔中,热电偶探针透过扩增反响管盖插至缓冲液中,然后按程序进展一个常规的扩增,加热模块如为96孔,则至少要测定12孔不同位置孔内的温度,在整个扩增过程中,可挪动热电偶探针至上述不同孔中监测温度,但每一孔内温度监测至少要有一个扩增周期。2021/1/1236扩增仪孔间温度的重复性和均一性的检测方法l第二种方法并非直接测定
18、孔内温度,而是通过扩增功能来间接获知孔间的均一性,即将加有一的含一定浓度的阳性质控样本的扩增反响管置于扩增仪各孔中按常规进展扩增检测,观察结果的一致性程度,假如有某一个或几个孔结果有问题,则应确定这一个或几个孔是否会重复性地得到假阴性结果,假如是,则说明相应孔的热传导有损坏。2021/1/1237理想的试剂和操作方法理想的试剂和操作方法 l试剂盒的质检l定量测定的精细度是测定组成步骤的变异和的平方根()=l 上式中、是步骤a、b、c等例如试剂准备、标本采集、核酸提取、扩增和产物检测等的标准差 2021/1/1238理想的试剂和操作方法l改善测定精细度的措施必须首先着重在最不精细的步骤上,应对试
19、剂准备、标本搜集、核酸提取、测定方法和仪器操作写出“标准操作程序()2021/1/1239实验室质量管理体系的建立l质量手册质量手册l质量体系程序文件质量体系程序文件l标准操作程序标准操作程序()l (相关记录表格、相关记录表格、报告报告)2021/1/1240存在问题存在问题l:形式,缺乏可操作性l记录:检查型。多而杂。l质控:形式或没有l分析:缺乏。2021/1/1241实验室质量管理的内涵实验室质量管理的内涵l写你所应做的l做你所写的l记录你已做的l分析你已做的2021/1/1242l看得见的l看不见的2021/1/12432021/1/12442021/1/1245l好习惯是消费力l习
20、惯即命运l思维习惯与行为习惯l罗马不是一天建成的l(a )2021/1/1246质量体系文件的三大特性质量体系文件的三大特性l法规性、唯一性和适用性。法规性、唯一性和适用性。l法规性法规性:是指文件一旦制定完成并批准施行,就必须认真是指文件一旦制定完成并批准施行,就必须认真执行,按照相应的文件去完成日常检验工作,也就是前面执行,按照相应的文件去完成日常检验工作,也就是前面所说的做你所写的。并且文件的修改不能随意,只能按规所说的做你所写的。并且文件的修改不能随意,只能按规定的程序进展。定的程序进展。l唯一性唯一性:则是指则是指1 1一个实验室只能有一个质量体系文件一个实验室只能有一个质量体系文件
21、系统;系统;2 2一项检验活动只能有唯一的操作程序;一项检验活动只能有唯一的操作程序;3 3一项规定只能有唯一的理解,不产生歧义;一项规定只能有唯一的理解,不产生歧义;4 4只能使只能使用文件的有效版本,无效版本在实验室的任何地方都不能用文件的有效版本,无效版本在实验室的任何地方都不能使用。使用。l适用性适用性:是指质量体系文件无统一格式;无标准文本;怎是指质量体系文件无统一格式;无标准文本;怎么做怎么写,切合实际,具有可操作性,不拘一格。所有么做怎么写,切合实际,具有可操作性,不拘一格。所有文件的规定均应保证在临床实际检测工作中能完全做到。文件的规定均应保证在临床实际检测工作中能完全做到。当
22、发现文件有不合适情况时,则应立即按规定程序对文件当发现文件有不合适情况时,则应立即按规定程序对文件进展修改。进展修改。2021/1/1247等于试剂盒说明书吗?等于试剂盒说明书吗?2021/1/1248怎样编写?XXX单位XXX实验室XXX标准操作程序编号:启用日期:版本:第 页 共 页一目的:二适用范围:三职责或责任人:四(方法原理)五(检测设备和试剂)六(所需的环境条件)七操作步骤:1 2 3 五、本操作程序变动程序:六、相关的文件七、相关的记录表格和报告编写人审核人批准人2021/1/1249 5W和和1Hl谁来做():责任人l做什么():适用范围l何时:适用范围l何地:适用范围l为什么
23、做:目的l如何做:操作步骤2021/1/12502021/1/12512021/1/12522021/1/12532021/1/12542021/1/12552021/1/12562021/1/12572021/1/12582021/1/12592021/1/12602021/1/12612021/1/12622021/1/12632021/1/12642021/1/12652021/1/12662021/1/12672021/1/12682021/1/12692021/1/1270 实验记录表格的设计实验记录表格的设计2021/1/1271存在问题存在问题l表格种类繁多l重复记录l表格无实用
24、性,用于检查的痕迹很重2021/1/12722021/1/12732021/1/12742021/1/1275记录表格设计的根本原则记录表格设计的根本原则l信息充分l简单明了l临床标本的检测信息能有机联络起来l融入系统?2021/1/1276 临床检验流程记录表临床检验流程记录表 检检验验日日期期 检检验验工工程程:扩扩增增仪仪中中保保存存文文件件名:名:使用说明:使用说明:1 1本本记记录录表表须须严严格格遵遵循循试试剂剂准准备备区区 标标本本制制备备区区 扩扩增增区区产产物物分分析区单一流向挪动,严禁逆向挪动。析区单一流向挪动,严禁逆向挪动。2 2各项工作执行后,在相应表达前的各项工作执行
25、后,在相应表达前的“内打内打“。3 3本本记记录录表表最最后后与与相相应应的的标标本本接接收收记记录录等等归归档档保保存存于于扩扩增增区区的的专专用文件柜内,以备查找。用文件柜内,以备查找。实验前准备实验前准备 试剂在有效期内试剂在有效期内 扩增仪、加样器和温度计在校准的有效期内扩增仪、加样器和温度计在校准的有效期内 生物平安柜的滤膜在使用有效期内生物平安柜的滤膜在使用有效期内 消毒溶液在有效期内消毒溶液在有效期内 洗眼器内无菌生理盐水在有效期内洗眼器内无菌生理盐水在有效期内 离心管、带滤芯吸头已经过质检合格离心管、带滤芯吸头已经过质检合格 操操 2021/1/1277 试剂准备区试剂准备区1
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- 关 键 词:
- 临床 基因 扩增 检验 质量保证
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