分析免疫组织学在非小细胞肺癌活检标本中的表达.pdf

2 9西藏医药 2 0 2 3 年第 4 4 卷第 5 期（总 1 7 0 期）B l o o d C e l l A n a l y z e r a n d B l o o d S m e a r C e l l M o r p h o l o g y i n B l o o d R o u t i n e T e s t J .S y s t e m s M e d i c i n e,2 0 1 9,4(1 9):2 5-2 7.9 Y a n,L,G e,e t a l.E l e v a t e d R e d B l o o d C e l l D i s t r i b u t i o n Wi d t h C o m b i n e d Wh i t e B l o o d C e l l i n P e r i p h e r a l B l o o d R o u t i n e H a v e a B e t t e r S e n s i t i v i t y t h a n C U R B-6 5 S c o r e s i n P r e d i c t i n g I C U A d m i s s i o n a n d M o r t a l i t y i n A d u l t C o m m u n i t y-A c q u i r e d P n e u m o n i a P a t i e n t s.J .C l i n i c a l L a b o r a t o r y,2 0 1 9,6 5(3):7 7 5.1 0 郭飞,莫翼军,周影,吴爱华,王姗姗,房树玉.血液分析自动审核的临床应用 J .中国卫生检验杂志,2 0 2 2,3 2(1 3):1 6 0 3-1 6 0 5.1 1 吕丹.探究全自动血细胞分析仪在血常规检验中的应用价值 J .中国实用医药,2 0 2 1,1 6(3):8 8-9 0.本文责任编辑 石泉贵基础医学分析免疫组织学在非小细胞肺癌活检标本中的表达 刘斌 章达桂 倪慕兰福鼎市医院病理科 福建福鼎 3 5 5 2 0 0摘要 目的 分析免疫组织学（细胞角蛋白7（C K 7）、甲状腺转录因子-1（T T F-1）、新天冬氨酸蛋白酶A（Na p s i n A）、细胞角蛋白 5/6（C K 5/6）及 P 4 0）在非小细胞肺癌（NS C L C）活检标本中的表达。方法 选取 2 0 2 1 年 6 月 2 0 2 2 年 5月收治的 NS C L C患者 7 6 例，依据病理分型肺腺癌组（4 1 例）与肺鳞癌组（3 5 例），采集全部患者活检标本。采用免疫组化 S P法测定，对比两组 C K 7、T T F-1、Na p s i n A、C K 5/6 及 P 4 0 表达阳性率。结果 肺腺癌组活检组织中 Na p s i n A阳性 3 3 例（8 0.4 9%）；C K 7 阳性 3 8 例（9 2.6 8%）；T T F-1 阳性 3 7 例，（9 0.2 4%）；C K 5/6 阳性 4 例（9.7 6%）；肺鳞癌组活检组织中 C K 7 阳性 1 例（2.8 6%）；T T F-1 阳性 2 例（5.7 1%）；C K 5/6 阳性 3 4 例（9 7.1 4%）；P 4 0 全部表达为阳性（1 0 0.0 0%）；腺癌组 C K 7、T T F-1、Na p s i n A阳性率高于鳞癌组，P 4 0、C K 5/6 阳性率低于鳞癌组（P 0.0 5）。结论 检测 NS C L C患者免疫组织学，可用于鉴别诊断鳞状细胞癌（S C C）与腺癌（A C），以指导临床治疗。关键词 非小细胞肺癌；免疫组织学 活检标本肺癌是呼吸系统多发恶性肿瘤，发病机制复杂，与职业、遗传、吸烟等关系密切，临床表现为咯血、呼吸困难等。资料显示，在所有恶性肿瘤中，肺癌发病率与病死率均位居首位 1。临床将肺癌分为小细胞肺癌（S C L C）与非小细胞肺癌（N S C L C），以 N S C L C最为常见，占比达到 8 0%8 5%2。早期诊治对患者预后改善有着重要意义。N S C L C分为鳞癌、腺癌等不同类型，其治疗策略存在一定差异。对于高分化类型的鳞癌及腺癌，其有着特有的细胞形态特征，通过分辨这些特征可准确鉴别肿瘤类型，但对于低分化类型的鳞癌及腺癌，由于其缺乏特征性的镜下表现，因此鉴别诊断难度高 3。免疫组织化学是依据免疫学原理对细胞、组织中抗原性物质进行检测的一种技术，具有较高的特异性与敏感度，对低分化或未分化肿瘤的鉴别准确率高达 7 5%4，5。研究发现 6，在多种恶性肿瘤中，细胞角蛋白 7（C K 7）、甲状腺转录因子-1（T T F-1）、新天冬氨酸蛋白酶 A（N a p s i n A）、细胞角蛋白 5/6（C K 5/6）及 P 4 0 可见异常表达，但尚未有有关 N S C L C活检组织中 C K 7、T T F-1、N a p s i n A、C K 5/6 及 P 4 0 表达的临床意义研究。本次选取 2 0 2 1 年 6 月2 0 2 2 年 5 月收治的 7 6 例 N S C L C患者，分析 N S C L C活检标本中 C K 7、T T F-1、N a p s i n A、C K 5/6 及 P 4 0 的表达意义，报道如下。1 资料与方法1.1 一般资料选取 2 0 2 1 年 6 月2 0 2 2 年 5 月收治的 N S C L C患者 7 6 例。男 4 6 例，女 3 0 例，年龄 3 3 岁8 5 岁，平均（5 8.2 6 3.1 7）岁；依据疾病类型分为肺腺癌组（4 1例）与肺鳞癌组（3 5 例），采集全部患者活检标本。纳入标准：符合美国国家综合癌症网（N C C N）非小细胞肺癌临床指南中 N S C L C诊断标准；经支气管镜活检、经皮肺穿刺活检确诊；未接受任何化疗及放疗；病历资料完整。排除标准：合并凝血功能障碍者；合并精神疾病者。1.2 方法1.2.1 试剂鼠抗人 N a p s i n A单克隆抗体（克隆号 I P 6 4）、鼠抗人 C K 7 单克隆抗体（克隆号 O V-T L 1 2/3 0）、兔抗人C K 5/6 单克隆单体（克隆号 D 5/1 6 B 4）、鼠抗人 P 4 0 多克隆抗体（克隆号多克隆）、鼠抗人T T F-1 单克隆抗体（克隆号 S P T 2 4）。1.2.2 检测方法用浓度为 1 0%的中性甲醛对活检标本进行固定，石蜡包埋处理后进行连续切片（厚度为 4 m），常规H E染色，后采用光镜进行观察。以免疫组化 S P法检测活检标本，检测项目包括 N a p s i n A、T T F-1、C K 7、C K 5/6 及 P 4 0，P B S 作为阴性对照，阳性对照选取已知阳性肺鳞癌或腺癌。1.2.3 免疫组化结果判断西藏医药 2 0 2 3 年第 4 4 卷第 5 期（总 1 7 0 期）3 0 抗原修复采用柠檬酸高压抗原修复法，以已知阳性肺鳞癌或肺腺癌作为阳性对照，以 P B S 液代替一抗作为阴性对照。阳性判断标准：细胞核着色即 P 4 0、T T F-1 阳性，细胞质着色即 C K 5/6、N a p s i n A、C K 7 阳性。依据阳性细胞占百分比区分阳性程度，无阳性细胞为（-）；占比 2 5%即（+），2 5%7 5%即（+），7 5%即（+）。1.3 观察指标对两组组织中 C K 7、T T F-1、N a p s i n A、C K 5/6 及P 4 0 表达情况进行分析。1.4 统计学分析S P S S 2 3.0 软件处理数据，()表计量资料（t检验），%表计数资料（2检验）。P 0.0 5 即有统计学差异。2 结果2.1 肺腺癌组中 C K 7、T T F-1、N a p s i n A、C K 5/6 及P 4 0 见表 1表1 肺腺癌组织中CK7、TTF-1、NapsinA、CK5/6及P40 （n=41）n（%）指标阳性阳性率（%）C K 73 89 2.6 8T T F-13 79 0.2 4N a p s i n A3 38 0.4 9C K 5/649.7 6P 4 000.0 02.2 肺鳞癌组中 C K 7、T T F-1、N a p s i n A、C K 5/6 及 P 4 0 见表 2表2 肺鳞癌组织中CK7、TTF-1、NapsinA、CK5/6及P40阳性率（n=35）n（%）指标阳性阳性率（%）C K 712.8 6T T F-125.7 1N a p s i n A00.0 0C K 5/63 49 7.1 4P 4 03 51 0 0.0 02.3 两组组织中 C K 7、T T F-1、N a p s i n A、C K 5/6 及P 4 0 的表达 见表 3表3 两组CK7、TTF-1、NapsinA、CK5/6、P40表达n（%）组别例数C K 7T T F-1N a p s i n AC K 5/6P 4 0鳞癌组3 51（2.8 6）2（5.7 1）0（0.0 0）3 4（9 7.1 4）3 5（1 0 0.0 0）腺癌组4 13 8（9 2.6 8）3 7（9 0.2 4）3 3（8 0.4 9）4（9.7 6）0（0.0 0）X25 7.4 3 95 4.0 0 24 6.5 6 75 7.6 7 57 2.0 2 8P 0.0 0 1 0.0 0 1 0.0 0 1 0.0 0 1 0.0 0 13 讨论肺癌发病率较高，2 0 2 2 年我国新发病例超过 4 0 0万，在全球癌症中发病占比达到 2 5%。N S C L C发病隐匿，早期缺乏特异性表现，使得患者于临床首次确诊时，肿瘤细胞已发生转移，或病情已进展为中晚期，丧失手术根治机会 7。肺癌病理学可分为 S C L C与N S C L C，以 N S C L C占比最高，而对于不同亚分类的N S C L C，临床治疗策略不同，需进行鉴别诊断。随着临床对肺癌分子生物学研究不断深入，肿瘤标志物被广泛用于辅助诊断 8。C K 7、T T F-1、N a p s i n A、C K 5/6及 P 4 0 因细胞来源与表达部位不同成为了 N S C L C亚分类的诊断标记物 9，1 0。本研究对 N S C L C患者活检组织的 C K 7、T T F-1、N a p s i n A、C K 5/6 及 P 4 0 表达情况进行分析，结果显示，腺癌组 C K 7、T T F-1、N a p s i n A阳性率高于鳞癌组，P 4 0、C K 5/6 阳性率低于鳞癌组；提示应用免疫组化 S P法检测 C K 7、T T F-1、N a p s i n A、C K 5/6 及 P 4 0在 N S C L C活检组织中的表达情况，可准确鉴别 S C C及 A C，为临床治疗 N S C L C提供可靠依据。分析原因，C K 7 为低分子量型碱性细胞角蛋白，通常表达于多数正常组织的腺上皮、移行上皮组织中，其相对分子量为 5 4 K D a，如在肺、卵巢、子宫内膜等部位细胞中，C K 7 在细胞质内表达，而非上皮来源的细胞则很少见 C K 7 表达，鳞状上皮不表达。研究发现，C K 7在女性、不吸烟者的肺癌组织中阳性率明显升高，与肺腺癌好发人群重合，且在有远处转移、无淋巴转移的肺癌患者组织中 C K 7 表达明显升高，可能与 C K 7 可对淋巴转移产生抑制，对远处转移产生促进等作用有关 1 1。T T F-1 通常存在于成年人型肺泡上皮细胞中，在胎儿肺组织中也可见 T T F-1 表达，但在型肺泡上皮中 T T F-1 并不表达。在正常人体肺组织中，T T F-1可调节肺组织表面的活性蛋白，而这些活性蛋白可促进肺稳定性。一项研究发现 1 2，肺鳞癌细胞中鲜少有T T F-1 表达，几乎不表达，而在肺腺癌中，T T F-1 敏感性达到 9 4.6%，与本研究结果相近。N a p s i n A是一种胃酶样天冬氨酸蛋白酶，在机体肺、肾中高表达，主要表达于肺腺癌与型肺上皮。在肺癌中 N a p s i n A表达的敏感性为 7 3.8%9 3.6%，即便是 T T F-1 检测结果呈阴性的标本中，N a p s i n A也呈现出阳性表达。此外，N a p s i n A 表达程度与肺腺癌分化程度相关，对于肺腺癌，其分化程度越低，则 N a p s i n A表达程度越低。C K 5/6是一种细胞角蛋白，在乳腺导管肌上皮组织中可见广泛表达，在正常组织鳞状上皮组织与肺支气管上皮下基底组织中也可见 C K 5/6 表达，但在腺上皮细胞中几乎不表达，由此可用于 N S C L C类型诊断。P 4 0 是 P 6 3亚型，其在正常肺组织中仅表达于支气管腺肌上皮细胞与支气管黏膜基底细胞，在型细支气管肺泡上皮细胞中散在表达，而在肺泡上皮细胞中不表达 1 3。【参考文献】（略）本文责任编辑 石泉贵