淡水生物调查关键技术标准规范.docx

一浮游生物调查1采样1.1采样点布设1.1.1标准依据水体面积、形态、浮游植物生态分布特点和调查目标等决定采样点数量。采样点应有代表性，能反应整个水体浮游生物基础情况。采样点设置数量见表1。表1采样点设置数量520水体面积（km2）22520505010010050050057采样点数（个）3357101015152020301.1.2湖泊、水库湖泊应兼顾在近岸和中部设点，可依据湖泊形状在湖心区、大湖湾中心区、进水口和出水口周围、沿岸浅水区（有水草区和无水草区）分散选设；水库应在库心区（河道型水库应分别在上游、中游、下游中心区）及大库湾中心区、关键进水口、出水口周围、关键排污口、入库江河汇合处设点。1.1.3江河在干流上游、中游、下游，关键支流汇合口上游、汇合后和干流充足混合处，关键排污口周围、河口区等河段设置采样断面。依据江河宽设置断面采样点，通常小于50m只在中心区设点；50m100m可在两岸有显著水流处设点；超出100m应在左、中、右分别设置采样点。1.2采样层次1.2.1浮游植物采样水深小于3m时，只在中层采样；水深3m6m时，在表层、底层采样，其中表层水在离水面0.5m处，底层水在离泥面0.5m处；水深6m10m时，在表层、中层、底层采样；水深大于10m时，在表层、5m、10m水深层采样，10m以下处除特殊需要外通常不采样。1.2.2浮游动物采样由水体深度决定，每隔0.5m、1m或2m取一个水样加以混合，然后取一部分作为浮游动物定量之用。1.3采样频次和采样时间采集次数依研究目标而定，采样次数可逐月或按季节进行，通常按季节进行。样品瓶必需贴上标签，标明采集时间、地点。采样时间尽可能保持一致，通常在早晨8：0010：00进行。1.4采样方法1.4.1浮游植物采样定量样品在定性采样之前用采水器采集，每个采样点取水样1L，贫营养型水体应酌情增加采水量。泥沙多时需先在容器内沉淀后再取样。分层采样时，取各层水样等量混匀后取水样1L。大型浮游植物定性样品用25号浮游生物网在表层缓慢拖曳采集，注意网口和水面垂直，网口上端不要露出水面。1.4.2浮游动物采样原生动物、轮虫和无节幼体定量可用浮游植物定量样品，如单独采集取水样量以1L为宜；定性样品采集方法同浮游植物。枝角类和桡足类定量样品应在定性采样之前用采水器采集，每个采样点采水样10L50L，再用25号浮游生物网过滤浓缩，过滤物放入标本瓶中，并用滤出水洗过滤网3次，所得过滤物也放入上述瓶中；定性样品用13号浮游生物网在表层缓慢拖曳采集。注意过滤网和定性样品采集网要分开使用。2样品固定浮游植物样品立即用鲁哥氏液固定，用量为水样体积11.5。如样品需较长时间保留，则需加入37%40甲醛溶液，用量为水样体积4。原生动物和轮虫定性样品，除留一瓶供活体观察不固定外，固定方法同浮游植物。枝角类和桡足类定量、定性样品应立即用37%40甲醛溶液固定，用量为水样体积5。3水样沉淀和浓缩固定后浮游植物水样摇匀倒入固定在架子上1L沉淀器中，2h后将沉淀器轻轻旋转，使沉淀器壁上尽可能少附着浮游植物，再静置24h。充足沉淀后，用虹吸管慢慢吸去上清液。虹吸时管口要一直低于水面，流速、流量不能太大，沉淀和虹吸过程不可摇动，如搅动了底部应重新沉淀。吸至澄清液1/3时，应逐步减缓流速，至留下含沉淀物水样20mL25（或3040）mL，放入30（或50）mL定量样品瓶中。用吸出少许上清液冲洗沉淀器2次3次，一并放入样品瓶中，定容到30（或50）mL。如样品水量超出30（或50）mL，可静置24 h后，或到计数前再吸去超出定容刻度余水量。浓缩后水量多少要视浮游植物浓度大小而定，正常情况下可用透明度作参考,依透明度确定水样浓缩体积见表2，浓缩标准以每个视野里有十多个藻类为宜。表2依透明度确定水样浓缩体积透明度（cm）1L 水样浓缩后水量（mL）10030505010010050305050010020301000（不浓缩）201000（稀释）原生动物和轮虫计数可和浮游植物计数适用一个样品；枝角类和桡足类通常见过滤法浓缩水样。4种类判定优势种类应判定到种，其它种类最少判定到属。种类判定除用定性样品进行观察外，微型浮游植物需吸收定量样品进行观察，但要在定量观察后进行。5计数5.1浮游植物计数5.1.1计数框行格法计数前需先核准浓缩沉淀后定量瓶中水样实际体积，可加纯水使其成30mL、50mL、100mL等整量。然后将定量样品充足摇匀，快速吸出0.1mL置于0.1mL计数框内（面积20mm20mm）。盖上盖玻片后，在高倍镜下选择3行5行逐行计数，数量少时可全片计数。1L水样中浮游植物个数（密度）可用下列公式计算：N=N0N1V1V0Pn（1）式中：N1L水样中浮游生物数量，个/L；N0计数框总格数；N1计数过方格数；V11L水样经浓缩后体积，mL；V0计数框容积，mL；Pn计数浮游植物个数。5.1.2目镜视野法首先应用台微尺测量所用显微镜在一定放大倍数下视野直径，计算出面积。计数视野应均匀分布在计数框内，每片计数视野数可按浮游植物多少而酌情增减，通常为50个300个，依浮游植物数确定计算视野数见表3。表3依浮游植物数确定计算视野数浮游植物平均数（个/视野）视野数（个）123002520051010010501L水样中浮游植物个数（密度）可用下列公式计算：N=CsFsFnVV0Pn（2）式中：N1L水样中浮游生物数量，个/L；Cs计算框面积，mm2Fs视野面积，mm2Fn每片计数过视野数；V1L水样经浓缩后体积，mL；V0计数框容积，mL；Pn计数浮游植物个数。5.2浮游动物计数5.2.1原生动物：吸出0.1mL样品，置于0.1mL计数框内，盖上盖玻片，在1020倍显微镜下全片计数。每瓶样品计数两片，取其平均值。5.2.2轮虫：吸出1mL样品，置于1mL计数框内，在1010倍显微镜下全片计数。每瓶样品计数两片，取其平均值。5.2.3枝角类、桡足类：用5mL计数框将样品分若干次全部计数。如样品中个体数量太多，可将样品稀释50mL或100mL，每瓶样品计数两片，取其平均值。5.2.4无节幼体：如样品中个体数量不多，则和枝角类、桡足类一样全部计数；如数量很多，可把过滤样品稀释，充足摇匀后取其中部分计数，计数3片5片取其平均值。也可在轮虫样品中同轮虫一起计数。5.2.5计数前，充足摇匀样品，吸出快速、正确。盖上盖玻片后，计数框内无气泡，无水样溢出。5.2.6单位体积浮游动物数量按下式计算N=VsnVVa（3）式中:N1L水样中浮游动物数量，个/L；V采样体积，L；Vs样品浓缩后体积，mL；Va计数样品体积，mL；n计数所取得个体数，个。5.3注意事项每瓶样品计数两片取其平均值，每片结果和平均数之差小于15，不然必需计数第三片，直至三片平均数和相近两数之差不超出均数15%为止，这两个相近值平均数即可视为计算结果。浮游植物计数单位用细胞个数表示。对不易用细胞数表示群体或丝状体，可求出平均细胞数。浮游动物计数单位用个数表示。一些个体一部分在视野中，另一部分在视野外，这时可要求只计数上半部分或只计数下半部分。6生物量测定浮游植物比重靠近1，可直接采取体积换算成重量（湿重）。体积测定应依据浮游植物体型，按最近似几何形状测量必需长度、高度、直径等，每一个类最少随机测定50个，求出平均值，代入对应求积公式计算出体积。此平均值乘上1L水中该种藻类数量，即得到1L水中这种藻类生物量，全部藻类生物量和即为1L水中浮游植物生物量，单位为mg/L或g/m3。种类形状不规则可分割为多个部分，分别按相同图形公式计算后相加。量大或体积大种类，应尽可能实测体积并计算平均重量。其它种类可参考表D1。微型种类只判别到门，按大、中、小三级平均质量计算。极小（5m）为0.0001 mg/104个；中等（5m10m）为0.002mg/104个；较大（10m20m）为0.005mg/104个。原生动物、轮虫可用体积法求得生物体积，比重取l，再依据体积换算为重量和生物量。甲壳动物可用体长一体重回归方程，由体长求得体重（湿重）。无节幼体可按0.003mg湿重/个计算。轮虫、枝角类、桡足类及其幼体可用电子天平直接称重。即先将样本分门别类，选择30个50个样本，用滤纸将其表面水分吸干至没有水痕，置天平上称其湿重。个体较小增加称重个数。二着生生物调查只进行定性检验。关键刮取或剥离水中浸没物诸如石块、木桩、树枝、水草或硬底泥等表层藻膜、丝状藻和粘稠状生长物，用鲁哥试剂固定。室内显微镜下判定种类组成。2.1采样2.1.1采样点布设采样点数量依着生生物分布及丰度而定，通常5个6个。采样点布设在水体浅水区、沿岸带和大型水生植物分布区等水域，部分受污染等特殊点也需采样观察。2.1.2采样方法水体中有大量大型水生植物分布，则采集整株水草，带回试验室。在室内从水草根部起，依次刮取植株上全部着生生物。除另外，水底石块、木桩、树枝等基质上着生生物可用刀片或硬刷刮（刷）到盛有蒸馏水样品瓶中，再将基质冲洗洁净，冲洗液装入样品瓶中。现场来不及刮样时，可将基质带回室内刮取。2.2样品处理着生藻类样品处理：样品用鲁哥氏液固定，用量为水样体积11.5。着生原生动物样品处理：将样本连同基质分别放入盛有采样点水样广口瓶内，其中一瓶用鲁哥氏液固定，另一瓶不加固定液，供活体观察用。2.3种类判定优势种类须判定到种，其它种类最少判定到属。三水体初级生产力测定1 浮游植物叶绿素a测定1.1水样采集和保留 可依据工作需要进行分层采样或混合采样。湖泊、水库采样500rnl,池塘300m1，采样量视浮游植物分布量而定，若浮游植物数量较少，也可采样1000ml。采样点及采样时间同浮游杭物。水样采集后应放在荫凉处，避免日光直射。最好立即进行测定预处理，如需经过一段时间( 448h )方可进行预处理，则应将水样保留在低温( 04)避光处。在每升水样中加入1 %碳酸镁悬浊液lrnl，以预防酸化引发色素溶解。水样在冰冻情况下(-20)最长可保留30d。1.2.仪器设备分光光度计。真空泵。离心机。乙酸纤维滤膜(孔径0.45m)。抽滤器。组织研磨器或其它细胞破碎器。碳酸镁粉末。90%丙酮。1.3试验程序 以离心或过滤浓缩水样，在抽滤器上装好乙酸纤维滤膜。倒入定量体积水样进行抽滤，抽滤时负压不能过大(约为50kPa)。水样抽完后，继续抽I2min，以降低滤膜上水分。如需短期保留12d时，可放入一般冰箱冷冻，如需长久保留(30d)，则应放入低温冰箱(-20)保留。取出带有浮游植物滤膜，在冰箱内低温干燥68h后放入组织研磨器中，加入少许碳酸镁粉末及23m1 90%丙酮，充足研磨，提取叶绿素a。用离心机(30004000r/min)离心10rnin。将上清液倒入5ml或l0ml容量瓶中。再用23ml90%丙酮，继续研磨提取，离心10min，并将上清液再转入容量瓶中。反复12次，用90%丙酮定容为5ml或10ml，摇匀。将上清液在分光光度计上，用lcm光程比色皿，分别读取750nm、663nm、645nm、630nm波长吸光度，并以90%丙酮作空白吸光度测定，对样品吸光度进行校正。1.4 计算方法 叶绿素a含量按以下公式计算：式中：V水样体积(L)； D吸光度；V1提取液定容后体积(ml)；比色皿光程(cm)。2 蓝绿藻蛋白测定 采取EX02多参数水质监测仪测定，每个月测定1次。附件1：浮游植物示例浮游植物.ppt附件2：浮游动物示例浮游动物.ppt