基于斑马鱼模型结合网络药理学探究重楼肝毒性机制_李芝奇.pdf

基金项目：国家科技重大专项（）；北京中医药大学新教师启动基金项目（）；北京中医药大学重点攻关项目（）作者简介：李芝奇（.），女，博士研究生在读，研究方向：中药安全性评价及主要活性 毒性物质基础筛选，：.通信作者：赵崇军（.），男，博士，助理研究员，研究方向：中药安全性评价及主要活性 毒性物质基础筛选，：.；刘振权（.），男，博士，教授，博士研究生导师，研究方向：男科疾病的中西医结合临床与研究，：.；林瑞超（.），博士，教授，博士研究生导师，研究方向：中药品质评价，：.中药研究基于斑马鱼模型结合网络药理学探究重楼肝毒性机制李芝奇 陈美琳 郭思敏 范琦琦 林子力 钟鑫悦 蔡 琼 高睿涵 林瑞超 赵崇军 刘振权（北京中医药大学中药品质评价北京市重点实验室，北京，）摘要 目的：重楼在中华人民共和国药典中记载为小毒，但其毒性机制尚未阐明。随着人们对中药安全性问题的重视，重楼的临床使用安全性及其机制也待明确，本文旨在阐明重楼提取物的肝毒性机制。方法：通过斑马鱼模式生物进行急性毒性验证，采用 斑马鱼暴露于重楼提取物中，后吖啶橙染色，组织病理切片证明其肝脏毒性。通过网络药理学及分子对接技术预测重楼肝毒性靶点，并采用实时聚合酶链反应（）验证网络预测靶点及通路。结果：实验结果表明，重楼提取物暴露处理 斑马鱼 ，吖啶橙染色重楼水提物组及醇提物组在肝脏部分均会出现黄绿色荧光点，组织病理切片显示肝细胞排列紊乱松散，出现细胞凋亡、空泡等现象，表明重楼具有肝脏毒性。网络药理学结果预测重楼肝毒性可能与细胞增殖的肉瘤基因（）信号通路，能量代谢和信号转导相关的磷酸化磷脂酰肌醇 激酶（）蛋白激酶（）信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（）信号通路、酪氨酸激酶（）信号转导与转录激活因子（）信号通路相关，血管内皮生长因子（）、血小板衍生生长因子受体（）、鼠双微基因（）、雷帕霉素靶蛋白（）、原癌基因（）、细胞淋巴瘤 样（）、成纤维细胞生长因子（）、白细胞介素（）及 可能是重楼造成肝毒性核心靶点，实验结果验证了以上推测。结论：重楼可能影响肝细胞增殖、能量代谢等通路的信号转导，从而引起肝毒性。关键词 重楼；肝毒性；斑马鱼；网络药理学；分子对接；验证；信号通路；信号通路 ，（，）：，：（），（）：，（），（），（）（），（），（），（），（），（），（），（），：，；世界中医药 年 月第 卷第 期；中图分类号：文献标识码：重楼为百合科植物云南重楼 .（.）.或七叶 一 枝 花.（.）的干燥根茎。重楼具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊的功效，常应用于疔疮痈肿，咽喉肿痛，蛇虫咬伤，跌扑伤痛，惊风抽搐。同时重楼也是成药云南白药、季德胜蛇药片的主要成分，这些药物在临床中普遍使用并发挥重要作用。中华人民共和国药典记载，重楼具有小毒，近年来，随着人们对于中药用药安全意识的不断增强，学者们也利用体外细胞实验相继验证了重楼的肝毒性，但其机制尚未阐明。本研究利用网络药理学技术，结合各大数据库挖掘重楼肝毒性机制，并利用实时聚合酶链反应（，）等技术进行验证，为重楼的安全合理开发利用奠定基础。材料与方法.材料.动物正常 型斑马鱼（鱼龄约 个月，雌雄各半，亲本购于中国科学院水生生物研究所，由本实验室饲养繁殖，动物许可证号：（京）。水温.、光照周期为 光照 黑暗，每日喂食 次活体丰年虾。.药物重楼由云南白药集团股份有限公司提供，经北京中医药大学刘春生、林瑞超和李向日教授 鉴 定 为 .（）.的干燥块根。重楼水提物（称取重楼饮片 ，加入 蒸馏水浸泡，回流提取 ，过滤，隔水蒸发浓缩至浸膏状，冷冻干燥呈粉末状，阴凉处密封保存待用）；重楼醇提物（称取重楼饮片 ，加入 乙醇浸泡 ，回流提取，过滤，隔水蒸发浓缩至浸膏状，冷冻干燥呈粉末状，阴凉处密封保存待用）。.试剂与仪器 吖啶橙（上海源叶生物科技有限公司，货号：）；提取试剂盒（公司，货号：），第一链合成试剂盒（天根生化科技（北京）有限公司，货号：；、均为分析纯（北京化工公司），试剂（，美国，货号：）。体式荧光显微镜（卡尔蔡司公司股份公司，德国，型号：）；体式显微镜（卡尔蔡司公司股份公司，德国，型号：）；斑马鱼养殖系统（北京爱生生物科 技 有 限 公 司，型 号：）；酶 标 仪（公司，美国，型号：）；微量分光光度计（，美国，型号：）。.网络药理学分析.重楼毒性成分的收集经过重楼相关文献挖掘整理，收集已被证实的重楼化学成分，得到重楼的化学成分列表。基于（：）数据库确定重楼的化学结构，并下载其化学结构的 格式文件，通过 平台利用其 格式文件预测上述化合物的药代动力学参数，以肠胃吸收（，）为“”，且类药性预测（、）结果中有 个及 个以上为“”的准则为筛选标准，并结合前期研究进行补充，获得重楼的毒性成分。.毒性成分靶点的预测通过 数据库查找导出毒性成分的二维化学结构数据，获得毒性成分的标准 结构序列号，并将其 结构序列号输入 数据库（：）中分别进行不同毒性成分的靶点基因预测，筛选阈值 的所有靶点，得到重楼毒性成分的靶点信息。.肝损靶点的预测在 数据库以“”为关键词进行检索，以 值中位数为标准，筛选 值大于中位数的靶点，获得肝损相关的靶点基因。将肝损靶点基因与毒性成分靶点基因进行比对，取交集作为重楼致肝毒性的潜在靶点基因，并绘制韦恩图表示。.重楼“毒性成分预测靶点”及致肝毒性“毒性成分潜在靶点”网络的构建 整理归纳所得成分靶点及疾病靶点对应信息，利用软件.及其“”工具构建重楼“毒性成分预测靶点”网络及重楼致肝毒性“毒性成分潜在靶点”网络，并对网络进行分析获取信息。.潜在靶点基因的蛋白质蛋白质相互作用网络的构建将重楼致肝毒性的潜在靶点基因导入 数据库（：.）中，在设定物种为人的前提下，导出分值 .的置信度区间的相互作用关系数据，在 .中构建潜在靶点的蛋白质蛋白质相互作用（，）网络图。.基因本体富集分析和京都基因和基因组百科全书通路富集分析 分析重楼致肝毒性潜在靶点基因的功能及其在信号通路中的作用，从而进一步探讨重楼致肝毒性作用机制。通过来自信息网站（：）的 语言数据包“”“”及“”，以基因本体（，）数据库对靶点基因的生物过程（，）、分子功能（，）和细胞组分（，）进行功能注释并绘制富集结果每项排名前 的数据，以京都基因和基因组百科全书（，）数据库对靶点基因主要参与的生化代谢途径进行富集与关联性分析并绘制富集结果排名前 的数据，设定阈值为 .。以 分析结果中的显著通路数据信息，利用 .构建重楼致肝毒性的“毒性成分潜在靶点核心通路”网络图，对该网络进行拓扑学性质分析，筛选聚焦重楼致肝毒性的核心成分及核心靶点。.分子对接.配体的准备将.中从 数据库下载的待对接成分结构 格式文件通过软件 转化为 格式文件，采用 .软件设置其可旋转的键及活动键时需要移动的最少的原子数目，输出 格式文件作为分子对接中的配体。.受体的准备从 数据库（：.）下载待对接靶点的 结构，首先对其结构进行预处理，去除水分子及磷酸根，然后采用 .软 件 对 其 进 行 计 算 电荷，添加氢原子，分离配体和受体，融合孤对电子等操作，输出 格式作为分子对接中的受体。.分子对接将受体与配体导入 .软件中获取相应毒性口袋，设置 坐标及大小，运行 脚本进行分子对接，得到其结合情况评估参数 值，并通过开源软件 对其对接结果进行可视化。.方法.分组与模型制备随机选取受精后 （，）斑马鱼置于 孔板中，尾为 组，根据预实验结果，重楼水提物及重楼醇提物分别设置 最大非致死浓度（，）、的 个药物浓度组，同时设置空白鱼水处理作为空白对照组，每组设置 个复孔。.给药方法 精密称取重楼提取物.，加入 鱼水，超声至完全溶解，得到 溶液作为储备液。使用时用鱼水稀释成一系列浓度梯度供试液。将 的幼鱼暴露于不同浓度的供试液样品中，整个暴露过程在.恒温培养箱中进行，后统计各观察组斑马鱼死亡数目，计算斑马鱼死亡率。.检测指标与方法.致死曲线的建立及 的确定暴露过程中统计 不同剂量组斑马鱼死亡率，以药物浓度为横坐标，以斑马鱼 死亡率为纵坐标，和 软件绘制“死亡率浓度”效应曲线并计算。.吖啶橙染色 吖啶橙染色液的配制方法：精密称取一定量的吖啶橙，加入适量鱼水，配制成.的染色液，并于 环境中避光保存。根据供试样品的量毒曲线，设置 、的 个药物浓度和对照组，按照“.”的给药方式进行暴露处理。在实验终点用磷酸盐缓冲液（，）清洗各暴露组幼鱼 次，加入 的吖啶橙染液，避光着色 。用 清洗后，将幼鱼侧位摆放于含有.甲基纤维素凝胶的载玻片上，于荧光显微镜下观察斑马鱼肝脏处的细胞凋亡情况。.病理切片为观察斑马鱼经药物处理后肝脏组织的病理学形态，按照“.”的方法进行暴露处理，在实验终点将 孔板中的斑马鱼幼鱼用 清洗，转入.离心管中，将收集好的鱼体固定于 的多聚甲醛缓冲液中，然后进行脱水、透明处理，石蜡包埋，切成 的薄片，苏木精伊红染色法（，染色）进行染色，处理温度为室温，最后置于显微镜下观察。.肝脏面积 选取肝脏转基因斑马鱼（）幼鱼为实验对象，根据供试样品的量毒曲线，设置 、个药物浓度组和对照组，按照“.”的给药方式进行暴露处理。暴露 后，去除药液，胚胎培养水清洗，然后将幼鱼侧位摆放于含有.的甲基纤维素凝胶的载玻片上，于显微镜下依次观察各暴露组和对照组中幼鱼世界中医药 年 月第 卷第 期的肝脏表型，在白光和荧光 种模式下分别进行拍照，然后使用显微镜软件（）统计各组幼鱼的肝脏面积。.实验验证取在“.”暴露后的斑马鱼，加入 试剂提取总 后，使用微量分光光度计测定 浓度和纯度。再用试剂盒逆转录为 后进行 测定，引物信息见表。.统计学方法 采用 统计软件进行数据分析，采用单因素方差分析，以 .为差异有统计学意义。研究结果.重楼的毒性成分经过文献挖掘整理及数据库预测分析后，从重楼 个主要化学成分中筛选出 个毒性成分，并对其依次进行编号。前期研究证明这 个成分具备一定毒性，且数据库预测所得生物利用度评分较高，皆.，其中薯蓣皂素、延龄草苷及偏诺皂苷的生物利用度水平较高，均为.。见表。.重楼“毒性成分预测靶点”网络的构建 重楼的 个毒性成分共预测出作用靶点 个，从而得到重楼“毒性成分预测靶点”网络图。见图。该网络图共有 个节点，条边，其中三角形节点代表重楼，六边形节点代表重楼毒性成分，圆形节点代表重楼毒性成分的预测靶点，边分别代表药物和毒性成分及毒性成分和靶点之间的对应关系。图中节点的大小与其度值成正比，而内部较大的深蓝色靶点如白细胞介素（，）、信号转导与转录激活因子（，）、血 小 板 活 化 因 子 受 体（，）等为重楼“毒性成分预测靶点”网络中度值大于 倍中位数即 的靶点。见表。可知该网络中 是所有预测靶点中度值最大的，为，度值 的靶点有、蛋白磷酸酶 催化亚基（，）、蛋白质磷酸酶 催化亚基（，）、蛋白磷酸酶 调节亚基（，）、依赖蛋白磷酸酶（，）和羟类固醇 脱氢酶（，）。表 引物设计基因前引（）后引（）表 重楼毒性成分编号成分生物利用度筛选标准薯蓣皂素（）.类药性五原则延龄草苷（）.类药性五原则纤细薯蓣皂苷（）.前期研究重楼皂苷（）.前期研究重楼皂苷（）.前期研究重楼皂苷（）.前期研究重楼皂苷（）.前期研究偏诺皂苷（）.类药性五原则重楼皂苷（）.前期研究重楼皂苷（）.前期研究重楼皂苷（）.前期研究重楼皂苷（）.前期研究重楼皂苷（）.前期研究重楼皂苷（）.前期研究 ，表 重楼 的预测靶点基因度值白细胞介素（，）信号转导与转录激活因子（，）血小板活化因子受体（，）蛋白磷酸酶 催化亚基（，）蛋白质磷酸酶 催化亚基（，）蛋白磷酸酶 调节亚基（，）依赖蛋白磷酸酶（，）羟类固醇 脱氢酶（，）羟基类固醇 脱氢酶（，）蛋白酪氨酸磷酸酶非受体 型（，）凝血因子（，）细胞淋巴瘤 样（，）血管内皮生长因子（，）细胞内结合蛋白（，）成纤维细胞生长因子（，）成纤维细胞生长因子（，）类肝素酶（，）图 重楼“毒性成分预测靶点”网络.重楼致肝毒性“毒性成分潜在靶点”网络的构建 分析计算得出数据库中所有肝损相关基因靶点的 值中位数为.，从而筛选出肝损基因 个，与 个重楼毒性成分预测靶点取交集，得到 个交集靶点即重楼致肝毒性的潜在靶点基因。见图。图 重楼毒性成分预测靶点与肝损靶点取交集 根据交集靶点构建得到重楼致肝毒性的“毒性成分潜在靶点”网络图。见图。该网络图共有 个节点，条边，图中三角形节点代表重楼，菱形节点代表肝损伤，六边形节点代表重楼毒性成分，圆形节点代表重楼毒性成分致肝毒性的潜在靶点。边分别代表药物和毒性成分、疾病和靶点及毒性成分和靶点之间的对应关系，节点的大小与其度值成正比，该网络中度值大于 倍中位数即 的靶点有、及 等。见表。可见其中度值最大的靶点与重楼“毒性成分预测靶点”网络一致，皆为，其度值为，度值 的靶点有 和。图 重楼致肝毒性“毒性成分潜在靶点”网络表 重楼致肝毒性 的潜在靶点基因度值.重楼致肝毒性潜在靶点的 网络的构建 重楼致肝毒性的 个潜在靶点中共有 个靶世界中医药 年 月第 卷第 期点存在符合筛选标准的相互作用关系，其 网络中共有 个节点和 条边，图中度值与节点的颜色深浅程度及大小成正比，度值排名前 的靶点为、雷帕霉素靶蛋白（，）、热休克蛋白 家族 类（，）、。见图。图 重楼致肝毒性潜在靶点 网络及度值前 靶点.重楼致肝毒性潜在靶点的、富集分析 个潜在靶点在 富集分析中 共富集 个条目，前 个条目涉及细胞内信号转导、信号转导的调节、调节细胞通讯等过程；共富集 个条目，前 个条目包括内膜系统、囊泡、细胞质囊泡等部位；共富集 个条目，前 个条目包括碳水化合物衍生物结合、阴离子结合、药物结合等功能。见图。图 重楼致肝毒性潜在靶点的 分析 注：图中纵坐标为富集条目名称，横坐标为该条目所富集的基因数，颜色越深则代表富集结果的显著性越高 个潜在靶点在 中共富集 个条目，根据致肝毒性机制，前 个条目可分为肝脏脂质代谢相关如亚油酸代谢，细胞增殖相关如 信号通路、信号通路等，能量代谢和信号转导相关如 信号通路、信号通路、信号通路等及癌症相关等。见图。图 重楼致肝毒性潜在靶点的 分析.重楼致肝毒性“毒性成分潜在靶点核心通路”网络的构建 以富集程度显著的通路构建得到重楼致肝毒性“毒性成分潜在靶点核心通路”网络。该网络共有 个节点和 条边，图中四边形节点为核心通路，圆形节点为潜在靶点，六边形节点为毒性成分，节点大小与其度值成正比。见图。图 重楼致肝毒性“毒性成分潜在靶点核心通路”经过拓扑分析，筛选该网络中度值、介度中心性（，）及紧密度中心性（，）皆大于中位数且度值均大于 的节点为核心靶点和核心成分，核心靶点为，血小板源性生长因子（，），鼠双微基因（，），原癌基因（，），核心成分分别为、。见图。图 重楼致肝毒性“核心成分核心靶点核心通路”网络.核心节点的分子对接核心成分、和核心靶点、的相关联分子对接结合信息见表。表中结合能表明受体和配体之间的结合活性，可见与靶点、相关联的对接成分较多，而多个靶点与重楼皂苷 的结合能均较小，在所有对接结果中结合能最小的结合对为靶点 和重楼皂苷 ，其结合能为.。使用 对部分对接结果作可视化示例。图中突出显示部分为小分子配体和与其相结合的受体结合位点氨基酸，均以棒状结构显示，其中小分子的 原子为天蓝色，原子为红色，氨基酸残基的 原子为紫红色，原子为深蓝色，且标注文字为氨基酸残基的名称。受体的其余部分均以卡通结构虚化显示，黄色虚线代表小分子配体与受体相结合的氢键。见图。图 核心节点对接结果的可视化处理 注：.重楼皂苷（）；.重楼皂苷（）；.重楼皂苷（）；.；.重楼皂苷（）；.重楼皂苷（）表 核心节点结合信息表序号蛋白 编码对接成分结合能（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.斑马鱼体内验证结果.重楼提取物量毒曲线及 软件拟合得到重楼提取物在 给药时间下的致死曲线，经计算重楼醇提物 为.，重楼水提物 为 ，在此给药浓度下，斑马鱼幼鱼未见不适反应或畸形，故设置 及 为后续药效实验的高、低给药剂量。重楼醇提物组最大致死量远低于重楼水提物组，表明重楼醇提物的肝毒性可能更强。见图。世界中医药 年 月第 卷第 期图 “死亡率浓度”效应曲线 注：.重楼醇提物；.重楼水提物.吖啶橙染色结果 吖啶橙为一种核酸染料，该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使细胞核染色。在凋亡细胞中，吖啶橙使其染上黄绿色荧光。因此可通过吖啶橙染色判断鱼体肝细胞凋亡情况。根据染色结果，与空白对照组比较，重楼水提物及醇提物剂量组均出现黄绿色荧光，且高浓度处理组荧光更为强烈，表明重楼提取物处理后会导致一定程度上肝细胞的凋亡。见图。图 吖啶橙凋亡染色和 染色结果 注：.空白组；.重楼水提物低浓度组；.重楼水提物高浓度组；.重楼醇提物低浓度组；.重楼醇提物低浓度组；.吖啶橙染色；.染色（）；.染色（）.染色结果病理组织检查结果表明，重楼提取物暴露处理能够破坏斑马鱼肝脏组织结构，造成组织结构松散，肝细胞空泡化，甚至出现组织结构降解。见图。.肝脏面积统计通过对转基因荧光鱼肝脏面积进行统计处理，与空白对照组比较，给药组的肝脏面积增大，且高剂量组的肝脏面积大于低剂量组，具有剂量依赖性，提示经重楼提取物处理后的斑马鱼会出现肝脏肿大的现象，证明水提物、醇提物均能造成斑马鱼肝脏损伤。见图。图 斑马鱼肝脏面积统计 注：与空白对照组比较，.验证 验证结果显示，与空白对照组比较，所筛选出的基因表达均呈下降趋势，且重楼醇提物组相关基因的下降趋势比重楼水提物组更为明显，这与上述实验中重楼醇提物组肝毒性更明显的结果相符。见图。图 实验验证基因表达情况 注：与空白对照组比较，.，.；为空白对照组；水提物为重楼水提物暴露组；醇提物为重楼醇提物暴露组 讨论重楼始载于神农本草经，其后历代本草均有记载，其主要功效为清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊。重楼是一种非常典型的清热泻火的药材，它主要是针对因肝火旺盛导致的一系列急性症状。根据 版中华人民共和国药典记载，重楼性苦，微寒，有小毒；归肝经。临床上也有重楼不良反应的报道，但其作用机制及主要毒性成分尚不明确，本文通过网络药理学结合斑马鱼模式生物，探究重楼肝毒性的主要成分及潜在作用靶点。斑马鱼急性毒性实验结果表明，重楼醇提物的肝脏毒性明显高于重楼水提物，根据前期实验及文献研究，重楼的主要毒性及活性成分为甾体皂苷类化合物，根据其化学性质，在 乙醇中的溶解度明显大于水中的溶解度。故我们推测，重楼醇提物毒性大于水提物的原因是醇提物中溶解了更多的甾体皂苷类化合物。本研究通过文献挖掘，共收集已被证实重楼的毒性相关成分 个，对其进行成分、作用靶点和信号通路的关系网络研究。在交联网络中拓扑学性质包括度值、介度中心性及紧密度中心性，其中度值为节点的边数，这些性质都能在一定程度上表明节点的重要性。因此，重楼“毒性成分潜在靶点”网络中度值大于二倍中位数即 的靶点可能为重楼致肝毒性较为关键的靶点，而最终拟合重楼肝毒性的“成分关键靶点核心通路”交互关联网络的拓扑分析结果显 示，、及 ，等可能是重楼造成肝毒性核心靶点。对核心成分与靶点采用分子对接的方法进一步探究重楼主要毒性成分基础，以结合能.为标准，值越小代表亲和力越强，结合越稳定。对接结果显示各成分与靶点结合的构象稳定时的能量均较低，则表明核心节点间具有良好的结合活性，发生作用的可能性较大，且毒性成分重楼皂苷（）与多个靶点结合活性均较突出，可推测其在多个致肝毒性的生物过程中发挥重要作用。综上所述，重楼的各个毒性成分作用于多个靶点，以协同方式在肝纤维化与肝癌的不同发展过程与通路作用，从而造成肝脏毒性。其中，对血管发生、血管生成及维持血管稳定性都具有重要意义，能增加血管通透性，促进血管内物质渗出，从而刺激炎症的形成和发展。抑制 可抑制透明细胞癌细胞的增殖，促进细胞凋亡并抑制其迁移和侵袭。是第 类酪氨酸激酶受体的成员，同时作为 的受体，在纤维组织中表现为过表达，是结缔组织形成的关键调节剂，并且该基因的活性随着肝纤维化的程度而增加。是重要的抑癌基因之一，是调控 的主要因子，蛋白与 蛋白结合后介导 蛋白的泛素化降解，并干扰 的转录调控能力。同时，受 转录调控，高水平的 可使 失活，而低浓度的 又可减少 基因转录，使 回到维持正常功能状态的水平，因此它们之间形成负反馈通路，使细胞中 和 比率保持恒定，这对细胞正常生长十分重要。活化能抑制肝纤维化发生，肝细胞特异性 敲除小鼠 表达明显高于野生型小鼠，表明 敲除促进肝纤维化，且 磷酸化上调依赖于 细胞分泌。通路是经典的自噬通路，在维持细胞存活、结构重塑和内环境稳定方面具有重要作用。同时，和 通过上调关键抗炎细胞因子 和抑制促炎细胞因子限制免疫细胞活化，调节肝脏内炎症反应及纤维化形成。的表达会在肝纤维化大鼠肝组织中显著下降，的减少不利于维持正常的免疫状态，可导致机体抵抗力下降及肝硬化甚至肝癌的发生。受体参与 途径以及 途径，激活增加细胞增殖和存活进而产生癌变；缺陷导致肝细胞再生受损，在 缺陷的老龄动物中，出现微泡性脂肪变性。在急性 影响后，和 可能通过基质或细胞内释放来快速激活，以刺激肝细胞成纤维细胞生长因子受体 （，），和 的慢性激活可能导致异常和过度的细胞外基质疾病，如肝脏纤维化。综上所述，我们推测重楼的肝毒性机制可能与细胞增殖的 信号通路、能量代谢和信号转导相关的 信号通路、信号通路、信号通路相关。利益冲突声明：无。参考文献，：，（）：李建良，王朝鲁，蔡淑珍，等 基于网络药理学探讨全石榴“助胃火”治疗功能性胃肠病的作用机制 中成药，（）：世界中医药学会联合会 网络药理学评价方法指南 世界中医药，（）：，（）：肖战说，邹建华，林建国，等 基于网络药理学与分子对接探讨土茯苓治疗银屑病的作用机制 世界中医药，（）：，张远，何霞，串俊兰，等 利用生物信息学数据库筛选药物药动学、药效学相关基因及其多态性位点 实用药物与临床，（）：，：，（）：高娜，姚涛，赵赟，等 基于网络药理学探讨香砂六君子汤治疗慢性萎缩性胃炎的作用机制 世界中医药，（）：谢宇璐，叶慧，张霞，等 基于网络药理学的建昌帮姜天麻对偏头痛作用机制研究 江西中医药大学学报，（）：，：，（）：，：，：，（）：，（）：（下接第 页）世界中医药 年 月第 卷第 期洪方，闫艳，赵雷，等 基于 鉴定葛根汤的入血成分及其代谢产物 中国中药杂志，（）：夏玉英，李菁，李楚源，等 基于 分析感冒清热颗粒化学成分 中药材，（）：李彤，李宇，张彩娟，等 基于 的葛根芩连汤治疗溃疡性结肠炎血清药效物质基础研究 中国中药杂志，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，：张丽红，邓子淳，方佳，等 异落新妇苷抗痛风活性研究 吉林中医药，（）：曾金祥，许兵兵，王娟，等 车前子中毛蕊花糖苷及异毛蕊花糖苷降低急性高尿酸血症小鼠血尿酸水平及其机制 中成药，（）：朱春胜，张冰，林志健，等 菊苣降尿酸有效成分及机制研究 中草药，（）：史珅，张荣涛，尚小玉，等 葛根提取物对高尿酸血症大鼠血尿酸的影响 食品科技，（）：，：，：，（）：（收稿 本文编辑：张晓辉）（上接第 页），（）（），：，：刘毅，李菲，贾跃进，等 基于网络药理学和分子对接探讨丹栀逍遥散治疗失眠障碍的作用机制 中医药临床杂志，（）：饶雅雯，刘敏，孙治中 黄芪治疗糖尿病肾病的网络药理学机制 广州中医药大学学报，（）：，：，（）：，：，：，（）：余小虎，朱金水，朱祖明，等 肝纤维化大鼠免疫性细胞因子表达水平的变化 免疫学杂志，（）：，（）：，（）：（收稿 本文编辑：张晓辉）世界中医药 年 月第 卷第 期