病原微生物实验室生物安全管理基础手册.doc

信 阳 职 业 技 术 学 院 检验科
微生物试验室生物安全手册

生物安全管理体系文件目录

序号
名称
备注
一
试验室人员准入制度

二
人员培训考评制度

三
人员健康监护制度

四
生物安全检验制度

五
试验室人员生物安全行为规范

六
事件、伤害、事故和职业性疾病汇报制度

七
试验室生物危险标识使用要求

八
试验室内务管理制度

九
试验室菌（毒）种和生物样本安全保管和档案管理制度

十
试验室废弃物管理制度

十一
试验室消毒隔离制度

十二
试验室应急处理预案

一.试验室人员准入制度
1.目标
规范生物安全二级试验室使用和管理，确保操作人员，试验对象和环境安全，确保检测结果正确可靠。
2.适用范围
适适用于生物安全二级试验室安全运转及在此环境下全部检测工作。
3.职责
进入生物安全二级试验室从事检测工作全部些人员严格根据本要求实施。
4.人员准入要求：
（1）健康体检合格者
（2）本试验室工作人员需取得检验资格证方可独立上岗工作
（3）本试验室工作人员需定时参与医院组织生物安全知识培训并经过考评
（4）本试验室工作人员参与上级机构组织生物安全知识培训并取得证书
（5）新入人员除经过以上各项考评后还需和含有工作经验资历人员共同工作三个月方可独立操作
5.人员进入同意程序
因特殊情况计划进入试验室人员需提出书面申请，经试验室责任人同意方可进入试验室。

二 人员培训考评制度
1.目标
规范试验室相关人员培训考评
2.适用范围
适适用于生物安全包含全部工作人员
3、人员培训考评制度
3.1.试验室工作人员培训
新工作人员进入试验室前，必需经过培训，取得进入试验室工作资格。培训由试验室责任人组织进行，并指定熟悉试验室工作人员担任教导。培训内容包含：
（1）相关检验国家诊疗标准、处理标准和本手册内容。
（2）试验室全部设备使用方法。
（3）个人防护方法。
（4）试验室基础技术。
（5）试验室消毒净化方法。
3.2.试验室工作人员资格考试
新工作人员经过培训后，由试验室责任人组织考评,以确保工作人员掌握试验室技术规范、操作规程、生物安全防护知识和实际操作技能。经过考评后，还须和有资格工作人员一同工作3个月，才能取得独立进行试验室操作正式资格。

三．人员健康监护制度
1.目标
规范试验室相关人员健康监护
2.适用范围
适适用于生物安全包含全部工作人员
3、人员健康监护制度
3.1工作人员从事工作前必需进行HIV抗体和甲肝、乙肝、丙肝等肝炎病毒标识物检测，每六个月进行一次HIV抗体复检，并保留血样十二个月以上。
3.2工作人员应每十二个月进行一次体检，并将可能包含生物安全危害体检结果存档，方便判定生物安全危害是否发生。
3.3试验室应建立人员健康监护档案，档案内容包含既往病史、检测结果、免疫接种史等，方便对从事包含生物安全危害人员健康情况进行跟踪。
3.4试验室工作人员适合工作状态
试验室工作人员必需在身体情况良好情况下，才能进入试验室工作。出现下列情况，不应进入试验室：身体出现开放性损伤；患发烧性疾病：感冒、上呼吸道感染；其它造成抵御力下降情况：妊娠、在试验室内连续工作4小时以上或其它原因造成疲惫状态。

四．生物安全检验制度
1.目标
规范试验室生物安全，确保设备正常运行。
2.适用范围
适适用于生物安全包含仪器设备（比如生物安全柜、放置试剂冰箱等）
3、生物安全检验制度
试验室内，每3个月以细菌培养方法进行安全性检测。生物安全柜内放置平板培养基2个，放置试剂冰箱内冷藏箱每层放置平板培养基1个，试验室4角和中间各放置1个，半污染区放置2个。将平皿敞开5分钟，然后盖上，每平板菌落数平均不得超出2个，超出标准，需要对试验室进行紫外线照射，污染部位用75%乙醇擦拭消毒。

五．微生物试验室设施、设备监测、检测和维护制度

1、目标
为确保试验室工作人员对各类检验仪器安全使用，维护检验工作正常运转，确保检验工作顺利进行。
2、适用范围
适适用于微生物试验室内多种检验仪器。

3、微生物试验室设施、设备监测、检测和维护制度
3.1微生物试验室内多种设施要符合相关要求，所使用全部仪器应经过安全使用认证。试验室供电线路中必需安装断路器和漏电保护器。
3.2科内大型仪器、设备、精密仪器由专员负责保管、登记、建档，仪器设备使用者，需经专业技术培训
3.3科内仪器设备应在检定和校准使用期内使用，并根据检定周期要求进行自检或强检，对使用频率高仪器按要求在检定周期内进行期间核查。

3.4关键仪器设备应建立使用统计，有操作规程，注意事项，相关技术参数和维护统计，并置于显见易读位置。仪器使用者必需认真遵守操作规程，并做好仪器设备使用统计，定时维护仪器设备。
3.5仪器设备所用电源，必需满足仪器设备供电要求。用电仪器设备必需安全接地。电源插座不得超栽使用。仪器设备在使用过程中出现断路保护时，必需在查明断电原因后，再接通电源。不准使用有用电安全隐患设备（如漏电、电源插座破损、接地不良、绝缘不好等）。
3.6仪器设备在使用过程中发生异常，随时统计在仪器随机档案上，维修必需由专业人员进行，并做维修统计。
3.7仪器设备使用结束后，必需按日常保养进行检验清理，保持良好状态。
3.8全部仪器设备应加贴唯一性标识及准用、限用、禁用标志。
3.9长久用电设备（如冰箱、培养箱）应定时检验，并统计运行情况。
3.10因故障或操作失误可能产生某种危害仪器设备，必需配置对应安全防护装置。
3.11使用直接接触污染物仪器设备前，必需确定对应安全防护装置能正常启用。试验工作完成后，必需对接触污染物仪器设备进行对应清洗、消毒。
3.12科内应指定专员对安全设备和试验设施/设备维护管理，确保其处于完好工作状态。仪器设备较长时间不使用时，应定时通电、除湿。有统计，保持设备清洁干燥。（比如每十二个月应对生物安全柜进行一次常规检测，须尤其关注高效过滤器。定时对离心机离心桶和转子进行检验）。
3.13高压灭菌器使用时，定时进行生物学指示剂检测。
3.14冰箱应定时化冰、清洗，发觉问题立即维修。试验区冰箱内严禁放个人物品及和试验无关物品。
3.15全部仪器设备在维修和维护保养前运出试验室前必需进行消毒处理。

六．试验室生物危险标识使用要求
1.目标
规范生物安全二级试验室使用和管理。
2.适用范围
适适用于生物安全二级试验室。
3.具体要求：
3.1在含有生物安全二级试验室门口加贴专门生物安全警示标识，以避免无关人员进入相关区域，造成感染危险。
3.2在有可能对人员造成威胁生物标本储存处加贴生物安全警示标识，以防无关人员将危险标本带入安全区域对人员造成威胁。
3.3全部微生物试验室内各项仪器设备处加贴生物安全警示标识。

七.试验室内务管理制度
1.目标
确保生物安全二级试验室正常运行、试验人员、物品和环境安全
2.适应范围
适应于生物安全二级试验室。
3.职责
进入生物安全二级试验室工作全部工作人员严格遵照本管理制度实施。
4.基础制度
4.1在主试验室设置清洁区、半污染区和污染区。入口处贴有醒目标生物危险标志。
4.2非试验室相关人员和物品不得进入。
4.3试验室内不得进食和饮水，或进行其它和试验无关活动。
4.4试验室工作人员、外来合作者、进修和学习人员在进入试验室及其岗位之前必需经过试验室责任人同意。
4.5试验过程中，严格按相关操作程序操作，降低气溶胶产生。
4.6试验室工作人员必需是经受过专业培训技术人员。在独立进行工作前还需在中高级试验室技术人员指导下进行上岗培训，达成合格标准，方可开始工作。
4.7试验室工作人员必需被通知试验室工作潜在危险并接收试验室安全教育，自愿从事试验室工作。
4.8试验室工作人员必需遵守试验室全部制度、要求和操作规程。
4.9试验室工作人员在开始工作前必需留本人血清进行相关检测，以后定时复检。如有疫苗必需进行免疫注射。
4.10全部培养物、废弃物在运出试验室前必需经可行消毒方法进行消毒。
4.11工作前应消毒，活性物质溅出后要随时消毒。
4.12进行感染性试验室时，应严禁她人进入试验室，或必需经试验室责任人同意方可入内。
4.13试验室事故处理：工作人员在操作过程中发生意外，如针刺和切伤、皮肤污染、感染性标本溅及体表和口鼻眼内、衣物污染试验台面等均视为安全事故，应视事故类型不一样情况，立即进行紧急处理。具体方法按《试验室应急处理预案》实施。
4.14填写意外情况登记和处理统计表，并按要求汇报给相关部门。
4.15除特殊情况外，严禁在试验室内使用锐器。
4.16剩下标本应密封后置于合适条件下保留。
4.17试验过程中应使用判定合格二级生物安全柜。
4.18试验设备在运出修理或维修前必需严格消毒，方可运出。

九 试验室菌（毒）种和生物样本安全保管和档案管理制度
1.目标
规范试验室菌（毒）种和生物样本保管和档案管理
2.适用范围
试验室菌（毒）种和生物样本处理和档案管理
3、试验室菌（毒）种和生物样本保管
3.1按国家要求能够保留菌（毒）种，由指定专员负责登记、保留和管理。按期传代、判定，必需在无菌室或接种罩内进行，并做好相关统计。在保留过程中发觉菌（毒）种变异或死亡，应立即上报试验室责任人。
3.2本区检出地方菌（毒）株应立即上报，因工作需要临时保留菌（毒）株也应按上级要求时间进行销毁处理。新发觉菌（毒）株，要做好原始统计，并上报主管部门复核确定。
3.3菌（毒）种必需每种设一统计卡，其内容包含：名称、编号、起源、分离日期、判定结果、判定者、审核者、传代情况、所用培养基、保留方法、温度、使用转移及销毁情况、保留者、部门责任人等。
3.4向上级主管部门申请索取菌（毒）种和向下级相关部门发放菌（毒）种时，应有2人参与办理，严格实施国家相关要求，手续要完备，并认真做好统计
3.5一、二类菌（毒）种，应派专员向提供单位领取，不得邮寄；三类菌（毒）种邮寄必需持有邮寄单位证实，并根据菌（毒）种邮寄和包装相关要求办理。
3.6未经上级同意，任何单位及个人不得以工作之便，进行国际间各类菌（毒）种交流，做好菌（毒）种安全防范工作。
4、档案管理制度
4.1、非试验室人员不得随意查看试验室统计
4.2、试验室人员负责妥善保留多种样品登记本、汇报单及试验室原始统计，不得私自修改和销毁
4.3、未经领导同意不得向无关人员或单位提供任何试验室及感染者信息

十 试验室废弃物管理制度
1.目标
规范废弃物处理
2.适用范围
尖锐器具和其它废弃物处理。
3.具体方法：
3.1尖锐器具处理
3.1.1尖锐器具，如针、注射器等，除特殊情况外，严禁在试验室使用，尽可能用塑料器材替换玻璃器材。
3.1.2注射和吸收感染性材料时，必需使用一次性注射器。用过针头、注射器直接放入防刺破盛废弃锐器容器中。非一次性锐器必需放置在坚壁容器中，进行高压消毒处理。
3.1.3打坏玻璃器具，严禁用手直接清理，必需使用其它工具，如扫把、簸箕、夹子或镊子等。
3.2废弃物处理
3.2.1试验样本在处理和进行试验室检测时产生废弃物，如一次性针头、离心管、平皿等应放入合适容器和严格防漏高压袋内，待试验结束后立即就地高压消毒。
3.2.2试验过程中产生污染性液体物质、废弃液体标本等放在盛有消毒液严格防渗漏专用容器中，并立即加盖。
3.2.4以上全部盛装废弃物容器，在每次试验结束后，就地高压消毒。
3.2.5高压锅应有专员负责，严格按使用说明操作，确保在121℃条件下，高压30分钟，以达成消毒要求。
3.2.6全部试验产生废弃物，必需经严格高压消毒后方能运出试验区，并送至指定地点集中焚烧处理。

十一、试验室消毒隔离制度
1.目标
规范微生物试验室和生物安全二级试验室消毒隔离工作。
2.适用范围
微生物试验室和生物安全二级试验室。
3.职责
全部工作人员全部必需遵从本规程。
4.具体步骤
4.1试验室基础要求
4.1.1试验室相对独立，试验室关键区包含试验间及缓冲间，明确划分清洁区、半污染区和污染区，并有显著标识。
4.1.2试验人员进入试验室应穿戴好个人防护用具，如隔离衣、防护眼睛、口罩、一次性手套等。试验过程中注意本身防护，并预防操纵过程中交叉污染。
4.1.3培养基、组织、体液等必需放在防漏密闭容器中储运。
4.1.4血清学试验、样品处理和分装应在BSL-2安全柜内进行。
4.1.5样品离心使用密封离心杯，以防溅出。
4.1.6试验过程中使用器材、试验废弃物均应按废弃物处理程序进行消毒处理。
4.1.7试验完成，先消毒物体表面，再按要求程序脱下个人防护用具放入包装袋内就地高压消毒，并进行空气消毒。
4.1.8离开试验室前，必需按相关要求消毒双手。
4.2消毒方法
4.2.1仪器等表面消毒：工作结束后，用含有效氯1000消毒液或75%乙醇溶液擦拭消毒，作用20分钟以上。
4.2.2工作台等物体表面消毒：工作完成，用含有效氯mg/L消毒液或75％乙醇溶液擦拭消毒，作用20分钟以上。
4.2.3个人防护用具消毒：试验结束，将隔离衣、口罩、帽子、手套、鞋套等121℃高压消毒30分钟。防护镜浸泡在75％乙醇或有效氯为1000mg/L含氯消毒剂中，作用30-60分钟。
4.2.4手消毒：用典伏或75％乙醇擦拭，作用1-3分钟。
4.2.5空气消毒：每次试验前后用紫外灯照射消毒，每次不少于1小时，每立方米空间安装紫外灯瓦数≥1.5W，距紫外灯1米处照射强度≥70W/㎡。
4.2.7地面消毒：工作结束，应用含有有效mg/L消毒液喷洒拖地。
十二、试验室应急处理预案
1．目标
规范紧急情况处理工作。
2．适用范围
微生物试验室和微生物安全二级试验室。
3．职责
遇有紧急情况全部工作人员严格按此规程处理。
4．具体要求：
4.1造成或可能造成试验室污染，但未造成人身伤害试验室事故，由试验室责任人处理。比如试验过程中，因为标本、试剂溢出溅落造成操作台或地面污染等，应立即喷洒消毒液并覆盖浸透消毒液纸巾，等消毒液根本浸泡30分钟后，对污染物品进行处理。清理后物品高压灭菌。并填写生物安全二级试验室意外情况登记和处理统计表，试验室责任人应指导这些处理行动，并检验处理效果。
4.2在没有强毒微生物时，在试验室内受到意外伤害，比如割伤、烧伤、烫伤等，由试验室责任人处理。令受到伤害人员立即停止工作，用消毒液清洗未破损皮肤表面，伤口以碘伏消毒，眼睛用洗眼器反复冲洗。有在同一试验室内工作人员或派人快速着装进入试验室，清除造成伤害原因，清理试验材料，帮助受伤人员紧急处理并撤离试验室。受到伤害人员应立即就医，并将受伤原因及接触微生物情况通报责任人。对其进行合适而完整病史统计。在其身体情况未恢复之前，不得重新进入试验室工作。试验室在经过整理，消除了造成伤害故障以后，方可重新使用。
4.3伤害事故可能造成被强毒微生物感染，比如针头刺破、锐器割伤、粘膜暴露等路径接触到感染性液体，首优异行局部处理，用肥皂和水清洗污染皮肤，挤压伤口尽可能挤出损伤处血液，用肥皂或清水冲洗，用消毒液浸泡或涂抹消毒，并包扎伤口。在操作过程中发生培养物、污染材料溅落身体表面等情况，首先使用喷淋装置，立即将污染物冲洗掉，然后再进行局部处理。暴露粘膜应立即用生理盐水或清水冲洗洁净。试验室责任人应向上级部门汇报，对受伤害者进行隔离观察，同时依据情况预防性用药，并写出职业暴露后预防感染评价和处理方案。
4.4试验室事故可能造成气溶胶污染，如压力容器或管道破裂等，立即关闭试验室，疏散现场全部些人员，对全部暴露人员提出对应医学提议。立即通知试验室责任人及生物安全员。最少在1小时内，任何人员不得进入现场，方便气溶胶消散记空气中较重微粒沉降。张贴严禁入内警示标志。在生物安全员监督下进行消毒、净化处理；实施这项工作时应该穿戴适宜防护服及呼吸防护用具。试验室责任人员除立即采取对应方法外，应向上级部门汇报，填写意外情况登记和处理统计表。
4.5培养物等传染性物质破碎
被传染性物质物质污染小玻璃瓶及其它容器破碎时，用布或纸巾覆盖，尔后将消毒剂倾倒其上，放置30分钟。其后即可清除掉，玻璃碎片应该用镊子清理。污染区域应该用消毒剂清洗。破碎物品清理时假如使用了簸箕，应将其进行高压灭菌或用有效消毒剂浸泡二十四小时。清理使用过布、纸巾、抹布及拖把，放入污染废弃物容器中。上述步骤均应佩戴手套。
4.6假如试验室纪录表格、其它印刷品或书面材料遭到污染，在妥善转抄后或烤后，应该将其弃入污染废弃物容器。
4.7试管破碎于密闭式安全离心杯中
全部密闭式安全离心杯在生物安全过程中装载和卸载。假如怀疑发生了破损，应该将其盖子拧松；尔后，将整个离心杯高压灭菌。
4.8蓄意破坏
坚固、厚重门、牢靠锁具和限制出入，全部是适宜防范方法。发觉蓄意破坏情况后汇报试验室责任人及生物安全员，视破坏种类根据上述方法进行处理，并具体填写意外情况登记和处理统计表。