布鲁氏菌病原学血清学诊断.ppt
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1、布鲁氏菌病原学血清学诊断主要内容:主要内容:1 1、布鲁氏菌病原学;、布鲁氏菌病原学;2 2、布鲁氏菌诊断标准;、布鲁氏菌诊断标准;3 3、布鲁氏菌血清学实验的几种方法。、布鲁氏菌血清学实验的几种方法。2020/11/32(一)(一)布氏菌概述布氏菌概述 18871887年年英英国国医医生生布布鲁鲁氏氏首首先先从从死死于于“马马尔尔他他热热”的的英英国国士士兵兵脾脾脏脏中中分分离离出出羊羊种种布布氏氏菌菌后后,布布鲁鲁氏氏菌菌属属(Brucella)Brucella),包括包括6 6个种个种1919个生物型。个生物型。羊种布氏菌(羊种布氏菌(Br melitensis)Br melitensi
2、s)牛种布氏菌(牛种布氏菌(Br abortus)Br abortus)猪种布氏菌(猪种布氏菌(Br suis)Br suis)沙漠森林野鼠种布氏菌(沙漠森林野鼠种布氏菌(Br neotomae)Br neotomae)绵羊附睾种布氏菌(绵羊附睾种布氏菌(Br ovis)Br ovis)犬种布氏菌(犬种布氏菌(Br canis)Br canis)2020/11/33布鲁氏菌的发展史布鲁氏菌的发展史年份年份菌名菌名发现人发现人国家国家宿主宿主1887羊种菌羊种菌Bruce马尔他马尔他羊羊1897牛种菌牛种菌Bang丹麦丹麦牛牛1914猪种菌猪种菌Traun美国美国猪猪1953绵羊附睾种菌绵羊附睾
3、种菌Buadle新西兰新西兰公绵羊公绵羊1956沙漠森林鼠种菌沙漠森林鼠种菌Stoennen美国美国沙漠森林野鼠沙漠森林野鼠1966犬种菌犬种菌Carmichael美国美国小猎犬小猎犬2020/11/34(一)病原学概述(一)病原学概述布鲁氏菌属(布鲁氏菌属(Brucella)Brucella)包括包括6 6个种个种1919个生物型。个生物型。牛种布氏菌(牛种布氏菌(Br abortus)Br abortus):1 1、2 2、3 3、4 4、5 5、6 6、7 7、9 9型型 羊种布氏菌(羊种布氏菌(Br melitensis)Br melitensis):1 1、2 2、3 3型型 猪种布
4、氏菌(猪种布氏菌(Br suis)Br suis):1 1、2 2、3 3、4 4、5 5型型 沙漠森林野鼠种布氏菌(沙漠森林野鼠种布氏菌(Br neotomae)Br neotomae)绵羊附睾种布氏菌(绵羊附睾种布氏菌(Br ovis)Br ovis)犬种布氏菌犬种布氏菌 (Br canis)Br canis)2020/11/351 1、形、形 态态n布布鲁鲁氏氏菌菌是是一一组组微微小小的的球球状状、球球杆杆状状、短短杆状细菌;杆状细菌;n宽宽约约0.30.50.30.5微微米米、长长0.61.50.61.5微微米米。电电镜镜下下见见到到的的羊羊种种菌菌为为明明显显的的球球杆杆状状、牛牛种
5、种菌和猪种菌为短杆状;菌和猪种菌为短杆状;n6 6种种布布鲁鲁氏氏菌菌靠靠形形态态很很难难区区分分,一一般般来来说说,羊种菌最小,牛种菌产次之,猪种菌较大;羊种菌最小,牛种菌产次之,猪种菌较大;n布鲁氏菌没有鞭毛,不形成芽胞和夹膜。布鲁氏菌没有鞭毛,不形成芽胞和夹膜。2020/11/362 2、染、染 色色n涂涂片片染染色色检检查查多多为为单单个个排排列列,少少见见成成对对短短链排列。链排列。n布鲁氏菌可被碱性染料着色;布鲁氏菌可被碱性染料着色;n革兰染色阴性;革兰染色阴性;n柯柯兹兹罗罗夫夫斯斯基基提提出出用用0.5%0.5%沙沙黄黄水水溶溶液液染染色色,加加热热出出现现气气泡泡,水水洗洗后
6、后用用0.5%0.5%孔孔雀雀绿绿或或1%1%美美兰兰复复染染,布布鲁鲁氏氏菌菌呈呈红红色色,其其它它细细菌菌呈呈绿色和兰色。绿色和兰色。2020/11/37布鲁氏菌布鲁氏菌:革兰阴性,革兰阴性,m,m,用柯氏染色染成红用柯氏染色染成红色色,无鞭毛、不形成无鞭毛、不形成芽胞和荚膜。芽胞和荚膜。2020/11/383 3、培养特性、培养特性1.1.布鲁氏菌培养营养要求高:布鲁氏菌培养营养要求高:需需要要各各种种氨氨基基酸酸和和各各种种金金属属离离子子,有有的的菌菌种种需需要要血清才能生长。血清才能生长。2.2.生生长长缓缓慢慢:一一般般需需经经4646天天,有有的的甚甚至至21302130天天才
7、才能能长出菌落。长出菌落。3.3.生生长长所所需需温温度度:20402040,最最适适为为37,37,超超过过4242则则不生长。不生长。4.4.C0C02:2:绵绵羊羊附附睾睾种种菌菌和和牛牛种种菌菌的的某某些些生生物物型型菌菌需需严严格格的的C0C02 2(5(51010)。2020/11/39(4 4)细菌变异细菌变异n布氏菌在各种理化因素作用下易发生变异布氏菌在各种理化因素作用下易发生变异;n即即从从光光滑滑型型(S S)变变为为非非光光滑滑型型粗粗糙糙(R)R)或粘液或粘液(M)M)状。状。n变变异异菌菌落落常常比比光光滑滑型型稍稍长长,表表面面有有颗颗粒粒。菌落颜色为灰白色或褐色,
8、菌落颜色为灰白色或褐色,2020/11/310(5 5)抵抗力抵抗力 n布布氏氏菌菌在在合合适适条条件件下下能能生生存存很很长长时时间间,有有较较高高的抗灭活能力。的抗灭活能力。n对对湿湿热热、紫紫外外线线和和各各种种射射线线以以及及常常用用的的消消毒剂、抗生素、化学药物比较敏感;毒剂、抗生素、化学药物比较敏感;n对对低低温温和和干干燥燥有有较较强强的的抵抵抗抗力力,故故可可用用冷冷冻冻真空干燥法保存菌种。真空干燥法保存菌种。2020/11/311布氏菌在自然条件下的生存能力自然条件自然条件生存时间(天)生存时间(天)自然条件自然条件生存时间(天)生存时间(天)水水50120奶油奶油2565尘
9、尘4120奶酪奶酪2190粪粪2172冻肉冻肉1447畜舍墙棚畜舍墙棚4150腌肉腌肉2045地面地面4150培养基培养基60318衣服衣服3080干燥胎膜干燥胎膜120皮毛皮毛45120腐败脏器腐败脏器死亡死亡鲜牛乳鲜牛乳2550人工胃液人工胃液20502020/11/312 (1)(1)对物理因子的抵抗力对物理因子的抵抗力 物理因子对布氏菌的影响物理因子对布氏菌的影响物理因子物理因子 生存时间生存时间 物理因子物理因子 生存时间生存时间湿热湿热5656 60 60分钟以上分钟以上 干热干热80 6080 60分钟以上分钟以上湿热湿热63 63 60 60分钟以上分钟以上 干热干热90 60
10、90 60分钟以上分钟以上湿热湿热8080 30 30分钟以上分钟以上 干热干热100 7100 7分钟以上分钟以上湿热湿热90 1090 10分钟以上分钟以上 直射阳光直射阳光 1 14 4小时小时湿热湿热100 100 半分钟死亡半分钟死亡 散射阳光散射阳光 7 78 8天天2020/11/313 (2)(2)对化学因子的抵抗力对化学因子的抵抗力 化学因子对布氏菌的影响化学因子对布氏菌的影响 药物名称药物名称 浓度浓度(%)(%)生存时间生存时间 药物名称药物名称 浓度浓度(%)(%)生存时间生存时间 新洁尔灭新洁尔灭 0.1 30 0.1 30秒钟秒钟 漂白粉漂白粉 0.2 0.22.5
11、2.5 2 2分钟以内分钟以内 石炭酸石炭酸 1 12 2 1 15 5分钟分钟 红红 汞汞 2 7 2 7分钟分钟 来苏儿来苏儿 2 1 2 13 3分钟分钟 过锰酸钾过锰酸钾 0.1 0.10.2 70.2 71515分钟分钟 来苏儿来苏儿 3 1 3 1分钟以内分钟以内 甲甲 醛醛 0.2 20 0.2 20分钟以上分钟以上 氯亚明氯亚明 0.2 5 0.2 57 7分钟分钟 乳乳 酸酸 0.5 0.5 1 1分钟以内分钟以内 氯亚明氯亚明 0.5 3 0.5 35 5分钟分钟 氢氧化钾氢氧化钾 2 3 2 3分钟分钟 升升 汞汞 0.05 1 0.05 1分钟以内分钟以内 肥皂肥皂 2
12、 20 2 20分钟以上分钟以上2020/11/314主要化学药品对三型菌的影响主要化学药品对三型菌的影响 浓度浓度 布鲁氏菌生存时间布鲁氏菌生存时间(分钟分钟)化学药品名称化学药品名称 (%)(%)羊型羊型 牛型牛型 猪型猪型 石石 碳碳 酸酸 1 5 3 5 1 5 3 5 石石 碳碳 酸酸 2 1 2 1 2 1 2 1 来来 苏苏 儿儿 2 3 1 3 2 3 1 3 来来 苏苏 儿儿 3 3 瞬间瞬间 瞬间瞬间 瞬间瞬间 漂白粉澄清液漂白粉澄清液 0.2 1-2 0.2 1-2 瞬间瞬间 瞬间瞬间 漂白粉乳剂漂白粉乳剂 2.5 1-2 2.5 1-2 瞬间瞬间 瞬间瞬间 肥肥 皂皂
13、水水 2 20 20 20 2 20 20 20 2020/11/315(二)布鲁氏菌分离培养(二)布鲁氏菌分离培养n采用何种方法、采用何种方法、n取何种材料、取何种材料、n何种培养基何种培养基 n实验室条件实验室条件2020/11/316布氏菌的分离培养布氏菌的分离培养n一、一、从可疑病人分离布氏菌从可疑病人分离布氏菌 n血培养:血培养:3030天未培养出菌,可定位阴性天未培养出菌,可定位阴性 。n骨髓培养:抽取骨髓(接种双相培养基)骨髓培养:抽取骨髓(接种双相培养基)n尿培养:尿培养:n其他病原材料培养其他病原材料培养:乳、脑脊液、关节液乳、脑脊液、关节液和滑囊液分离布氏菌,参照血培养观察
14、结和滑囊液分离布氏菌,参照血培养观察结果,果,1515天不长菌定为阴性天不长菌定为阴性 2020/11/317二、从牲畜材料中分离布氏菌二、从牲畜材料中分离布氏菌 n 从牲畜流产羔检菌:从牲畜流产羔检菌:n 从胎衣检菌:从胎衣检菌:n 从阴道分泌物检菌:从阴道分泌物检菌:n 尿液检菌:尿液检菌:n 乳汁检菌:乳汁检菌:n 脓汁检菌:脓汁检菌:n 血液培养:血液培养:n 脏器检菌:脏器检菌:2020/11/318我国出菌宿主及材料我国出菌宿主及材料n我我国国从从人人、羊羊、牛牛、猪猪、犬犬、鹿鹿、马马、骆骆驼驼等等家家畜畜及及黄黄羊羊、岩岩羊羊、黄黄鼠鼠、黄黄胸胸鼠鼠等等野野生生动动物物检检出出
15、布布氏氏菌菌。从从牧牧区水塘水和羊毛中也检出过布氏菌。区水塘水和羊毛中也检出过布氏菌。n出出菌菌材材料料有有血血液液、关关节节液液、滑滑囊囊液液、骨骨髓髓、脑脑髓髓液液、胸胸液液、淋巴结、乳汁、脓汁、胆汁、尿、阴道分泌物、等淋巴结、乳汁、脓汁、胆汁、尿、阴道分泌物、等2020余种。余种。n由由于于取取材材难难易易等等原原因因,人人多多由由血血液液、关关节节液液、滑滑囊囊液液、骨骨髓髓出出菌菌;羊羊多多由由流流产产羔羔、胎胎盘盘、死死羔羔检检出出菌菌;牛牛多多由由流产犊、乳汁检出菌;猪多由流产仔猪、胎盘出菌。流产犊、乳汁检出菌;猪多由流产仔猪、胎盘出菌。2020/11/319布氏菌的鉴定及分型布
16、氏菌的鉴定及分型 (一一)常规确定布氏菌属细菌的方法常规确定布氏菌属细菌的方法n菌落生长时间和形态菌落生长时间和形态;n菌体形态和染色菌体形态和染色;n布氏菌血清凝集试验布氏菌血清凝集试验;(二二)特殊方法:特殊方法:n1 1细细菌菌DNADNA鸟鸟嘌嘌呤呤十十胞胞嘧嘧啶啶克克分分子子百百分分比比(C+CMOLC+CMOL)的测定的测定;n2 2布氏菌布氏菌DNADNA与可疑菌与可疑菌DNADNA杂交试验杂交试验;n3 3应用色谱技术鉴定布氏菌应用色谱技术鉴定布氏菌;2020/11/320布氏菌属的种、型鉴定方法布氏菌属的种、型鉴定方法初代分离培养对二氧化碳的需要初代分离培养对二氧化碳的需要硫
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