微生物实验室管理核心制度.docx

目 ：规范微生物室管理规范，以确保微生物试验顺利进行。
范 围：适适用于微生物试验室
依 据：GB/T 19489-《试验室 生物安全通用要求》；
实施部门：化验室微生物检验室
职 责：1. 微生物检验员负责微生物试验室管理。
2. 试验室主管负责对微生物试验室管理情况进行检验。
内 容：
本中心微生物试验室管理制度包含微生物试验室人员管理制度、微生物室出入管理 制度、微生物室环境管理制度、微生物室使用管理制度。
微生物试验室药品管理制度。
1. 微生物试验室人员管理
1.1 微生物试验室由微生物检验员管理及使用,其它人员须经主管人员同意后方可进入和使 用。
1.2 微生物试验室人员需经过相关培训。
2. 微生物试验室出入管理
2.1 人员出入管理：
2.1.1 人员进入微生物试验室洁净区前，需要洗手消毒；在一级缓冲室换试验服、戴帽子、 换鞋后，进入风淋室，风淋后，进入二级缓冲室准备试验。
2.1.2 试验操作前须带上无菌手套和口罩。
2.2 物料出入管理：
2.2.1 物料进入微生物试验室以前，脱去外包装或用酒精棉球擦拭后，放置于传输窗中。
2.2.2 物料放置于传输窗后，开启紫外0.5小时，同时将微生物试验室内净化系统、紫外 灯打开。
2.2.3 紫外开启0.5小时以后，关闭紫外，并将物品转移于试验操作台上。
2.2.4 试验完成后，微生物试验室物品经传输窗传出后，经高温灭菌后废液、废物倒入废液桶处理。
3. 微生物试验室环境管理
3.1 微生物试验室清洁管理
微生物试验室清洁分为通常清洁及根本清洁，其具体清洁部位、方法方法、频率见下表所表示：

3.2 微生物试验室常见消毒剂及其配制

4. 微生物试验室使用管理
4.1 微生物试验室使用之前，应先开启微生物试验室自净系统30分钟。每次使用前应用消毒 液擦拭超净工作台及其它一切可能引发污染死角，
然后开紫外灯灭菌30分钟，同时开启超净工作台。操作完成后，用消毒液擦拭台面，做好卫生，开紫外灯30分钟，并统计紫外灯照射时间。
注：当紫外灯使用1000小时应更换。
4.2 微生物试验室使用时，应同时进行沉降菌监测，将含有营养琼脂培养基培养皿在各监测点正向放置，打开盖子，暴露30分钟，然后盖上，
将营养琼脂培养基放入30～35℃培养箱培养48小时，观察结果，每皿菌落数应≤1个，不然应加强清洁消毒工作，必需时验证生物安全柜性能。
5. 微生物试验室药品及培养基管理制度
药品及培养基是微生物试验基础，直接影响微生物试验结果。适宜培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基确保。
5.1 药品及培养基采购及接收
微生物试验室所用药品及培养基必需是符合国家相关资质企业所出产。试验室依据检验需要申购所需培养基并做好对应接收统计。
5.1培养基接收
微生物检验室应指定专员负责培养基管理，在接收培养基时，应查对培养基品名、 起源、批号、生产日期、使用期、数量，脱水培养基应附有处方和使用说明，并做好接收统计。
5.2培养基制备
培养基可按处方配制，也可使用按处方生产符合要求脱水培养基。
在制备培养基时，应选择质量符合要求脱水培养基或单独配方组分进行配制。脱水 培养基应附有处方和使用说明，配制时应按使用说明上要求操作以确保培养基质量符合要求，不得使用结块或颜色发生改变脱水培养基。脱水培养基或单独配方组分应在合适条件下贮藏，如低温、干燥和避光，全部容器应密封，尤其是盛放脱水培养基容器。商品化成品培养基除了应附有处方和使用说明外，还应注明使用期、贮藏条件、适用性检验试验质控菌和用途。
为确保培养基质量稳定可靠，各脱水培养基或各配方组分应正确称量，并要求有一定正确度。配制培养基最常见溶剂是纯化水，特殊情况下，可能需要用去离子水和蒸馏水。应统计各称量物重量和水使用量。
配制培养基所用容器和配套器具应洁净，可用纯化水冲洗玻璃器皿以消除清洁剂和外来物质残留，对热敏感培养基如糖发酵培养基其分装容器通常应预优异行灭菌，以确保培养基无菌性。
脱水培养基应完全溶解于水中，再行分装和灭菌。配制时若需要加热助溶，应注意不要过分加热，以避免培养基颜色变深。如需要添加其它组分时，加入后应充足混匀。应根据生产商提供或使用者验证参数进行培养基灭菌。商品化成品培养基必需附有所用灭菌方法资料。培养基灭菌通常采取湿热灭菌技术，特殊培养基可采取薄膜过滤除菌。
培养基若采取不合适加热和灭菌条件，有可能引发颜色改变、透明度降低、琼脂凝固力或pH 改变。所以，培养基应采取验证灭菌程序灭菌，培养基灭菌方法和条件，应经过无菌性试验和促生长试验进行验证。另外，对高压灭菌器蒸汽循环系统也要加以验证，以确保在一定装载方法下正常热分布。温度缓慢上升高压灭菌器可能造成培养基过热，过分灭菌可能会破坏绝大多数细菌和真菌培养基促生长质量。灭菌器中培养基容积和装载方法也将影响加热速度。所以，应依据灭菌培养基特征，进行全方面灭菌程序验证。
应确定每批培养基灭菌后pH值（冷却至室温25 ℃ 测定）。若培养基处方中未列出pH 值范围，除非经验证表明培养基pH 值许可改变范围很宽，不然，pH值范围不能超出要求值士0.2 。
制成平板或分装于试管培养基应进行下列检验：容器和盖子不得破裂，装量应相同，尽可能避免形成气泡，固体培养基表面不得产生裂缝或涟漪，在冷藏温度下不得形成结晶，不得污染微生物等。应检验和统计批数量、使用期及培养基无菌检验。
5.3 培养基贮藏
自配培养基应标识名称、批号、配制日期等信息，并在已验证条件下贮藏。商品化成品培养基标签上应标有名称、批号、生产日期、
失效期及培养基相关特征，生产商和使用者应依据培养基使用说明书上要求进行贮藏，所采取贮藏和运输条件应使成品培养基最低程度失去水分并提供机械保护。
培养基灭菌后若贮藏在高压灭菌器中，质量可能会受影响，通常不提倡这种存放法。琼脂培养基不得在O ℃ 或O ℃ 以下存放，因为冷冻可能破坏凝胶特征。
培养基应避光保留，若要长久保留，应置于密闭容器中以预防水分流失。琼脂平板最好现配现用，如置冰箱保留，通常不超出1周，且应密闭包装，若延长保留期限，
保留期需经验证确定。
固体培养基灭菌后再融化只许可1 次，以避免因过分受热造成培养基质量下降或微生物污染。培养基再融化通常采取水浴或流通蒸汽加热。若使用微波炉，
应避免培养基过分受热及水分蒸发，更要注意安全。融化培养基应置于45 ～50 ℃ 水浴中，不得超出8 小时。倾注培养基时， 应擦干培养基容器外表面水分，避免容器外壁水滴进人培养基中造成污染。使用过培养基（包含失效培养基）应根据国家污染废物处理相关要求进行。
5.4 质量控制试验
试验室应对试验用培养基建立质量控制程序，以确保所用培养基质量符合相关检测需要。
试验室配制或商品化成品培养基质量依靠于其制备过程，采取不宜方法制备培养基将影响微生物生长或复苏，从而影响试验结果可靠性。
全部配制好培养基均应进行质量控制试验。试验室配制培养基常规监控项目是pH 、适用性检验试验，定时稳定性检验以确定使用期。
培养基在使用期内应依据适用性检验试验确定培养基质量是否符合要求。使用期长短将取决于在一定存放条件下（包含容器特征及密封性）培养基其组成成份稳定性。
除药典附录另有要求外，在试验室中，若采取已验证配制和灭菌程序制备培养基且过程受控，那么同一批脱水培养基适用性检验试验可只进行1 次。
假如培养基制备过程未经验证，那么每一批培养基均要进行适用性检验试验，试验菌种可依据培养基用途从相关附录中进行选择，也可增加从生产环境及产品中常见污染菌株。
培养基质屋控制试验若不符合要求，应寻求不合格原因，以预防问题反复出现。任何不符合要求培养基均不能使用。
用于环境监控培养基须尤其防护，最好要双层包装和终端灭菌，假如不能采取终端灭菌培养基，那么在使用前应进行100 ％预培养以预防外来污染物带到环境中及避免出现假阳性结果。