荷叶和罗布麻总黄酮的富集纯化工艺研究_韦琴.pdf
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1、收稿日期:基金项目:湖北省资源环境与智能化工程优势特色学科(群)建设专项资金资助项目;校级学术团队特色生物资源开发与利用()作者简介:韦琴(),女,硕士,教授,研究方向为天然产物开发与利用。通信作者:梅辉(),女,硕士,副教授,研究方向为生物化学。食品工艺荷叶和罗布麻总黄酮的富集纯化工艺研究韦 琴,刘清怡,范康俊,梅 辉(武汉工商学院环境与生物工程学院,湖北武汉;武汉生物工程学院生命科学与技术学院,湖北武汉)摘 要:以静态吸附率和解吸率为指标,筛选出适合荷叶、罗布麻总黄酮纯化的最佳大孔树脂,再用其进行动态吸附考察;采用单因素试验和正交试验优化荷叶、罗布麻总黄酮的纯化工艺条件。结果表明:荷叶、罗
2、布麻总黄酮纯化的最佳树脂均是 型大孔树脂,荷叶总黄酮最佳纯化工艺条件为上样流速 、上样质量浓度 、乙醇体积分数%、上样量 ,在此条件下荷叶总黄酮含量为%;罗布麻总黄酮最佳纯化工艺条件为上样流速 、上样质量浓度 、乙醇体积分数%、上样量 ,在此条件下罗布麻总黄酮含量为%。关键词:大孔树脂;荷叶;罗布麻;总黄酮;纯化 ,(,;,):,:,%,%:,%,%:;中图分类号:文献标志码:文章编号:()荷叶为睡莲科属植物,生长在水上、陆地或湖泊,在我国资源十分丰富。现代医学研究证明,年第 卷第 期 粮食与油脂荷叶中含有大量的黄酮类和生物碱类物质,具有降血脂、治疗动脉粥样硬化、抑菌等功效。罗布麻在中国淮河、
3、秦岭以北各省(自治区)都有分布。现代研究认为其可预防和治疗高血压,对增强机体抗病能力均有一定作用,为延年益寿、养生之药。大孔树脂是一类有机高聚物吸附剂,其理化性质稳定,不溶于酸、碱及有机溶剂,选择性较好,与其他分离技术相比,它具有提高有效成分的相对含量、生产周期短、树脂再生方便等优点,因而近几年在天然产物的分离纯化中被广泛应用,尤其适用于黄酮类化学物的分离纯化。本研究筛选出适合荷叶和罗布麻总黄酮纯化的最佳大孔树脂,并优化得到纯化荷叶、罗布麻总黄酮的最佳条件,可为荷叶和罗布麻的有效开发利用提供理论依据。材料与方法 材料与试剂荷叶、罗布麻,湖北济善堂中药饮片有限公司;芦丁标准品(%),天津一方科技
4、有限公司;无水乙醇、浓盐酸、氢氧化钠、硝酸铝、亚硝酸钠,分析纯;大孔吸附树脂、大孔吸附树脂、大孔吸附树脂、大孔吸附树脂、大孔吸附树脂、大孔吸附树脂,郑州勤实科技有限公司。仪器与设备 型电子天平,上海精密科学仪器有限公司;型旋转蒸发仪,上海亚荣生化仪器有限公司;型低速离心机,长沙湘麓离心机仪器有限公司;型中草药粉碎机,浙江省瑞安市飞达器械有限公司;型超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司;型紫外分光光度计,上海光谱仪器有限公司;型全温振荡培养箱,常州诺基仪器有限公司。方法 罗布麻、荷叶的总黄酮标准曲线的制作精密称取芦丁标准品,用体积分数%乙醇配制成 芦丁标准品对照液,精准量取对照液、分别移入标有、
5、号的 比色管中,分别加入体积分数%乙醇至,各加入 溶液 ,摇匀,静置 ,再加入 ()溶液 ,摇匀,静置 后,加入 溶液 ,最后加入体积分数%乙醇至刻度,摇匀,静置 。以 号为空白对照,于波长 处测吸光度。以芦丁标准品质量浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,得到回归方程 ,相关系数 。芦丁对照品在质量浓度 呈良好的线性关系。罗布麻、荷叶的预处理及提取工艺按文献操作,分别取罗布麻、荷叶以 干燥至恒重,粉碎后过 钢筛,密封保存。分别称取一定量的罗布麻、荷叶粉末。荷叶粉末在、条件下按料液比 ()加入体积分数%乙醇作溶剂,抽提 次,每次超声;罗布麻粉末在 、条件下按料液比 ()加入体积分数%乙醇
6、作溶剂,抽提 次,每次超声 ;收集提取物后分别以 离心,取上清液,对荷叶、罗布麻中总黄酮含量进行测定。提取液中总黄酮含量测定提取液于波长 处测吸光度,经标准曲线方程计算得到提取液中总黄酮质量浓度。按式()计算总黄酮含量。总黄酮含量%()式中:为提取液中总黄酮质量浓度,;为洗脱液的体积,;为洗脱液干燥后的质量,。大孔树脂的预处理与筛选按文献操作,将大孔树脂进行预处理使上清液 呈中性。通过大孔树脂的静态吸附 解吸试验选取最优树脂。吸附率和解吸率按式()()计算。吸附率%()解吸率%()式中:为初始质量浓度,;为吸附后质量浓度,;为解吸液中黄酮质量浓度,。上样量的确定按文献操作,称取已处理完毕的 大
7、孔树脂,湿法上柱维持柱体积 ,以流出液总黄酮质量浓度为考察指标,加入一定体积的上样液,荷叶粗提液以上样流速为 ,罗布麻粗提液以上样流速 进行动态吸附,每 接 管,测定总黄酮的质量浓度,当 大孔树脂达到吸附饱和时,停止上样并记录上样量,绘制泄露曲线。粮食与油脂 年第 卷第 期 单因素试验 上样流速的确定分别以、的上样流速,收集流出液,测定上样流速对总黄酮流出液质量浓度的影响。上样质量浓度的确定将荷叶、罗布麻总黄酮提取液分别以 、与、进行上样,收集流出液,测定上样质量浓度对总黄酮吸附率的影响。洗脱液体积分数的确定分别用体积分数%、%、%、%乙醇进行洗脱,收集流出液,测定不同体积分数的乙醇对总黄酮流
8、出液质量浓度的影响。正交试验在单因素试验的基础上,以上样流速()、上样质量浓度()、乙醇体积分数()为变量、总黄酮含量为指标,设计正交试验,因素水平见表。表 ()正交试验因素水平表水平因素 上样流速()上样质量浓度()乙醇体积分数%、注:每个因素的水平左边数值表示为荷叶总黄酮上样条件,右边数值表示为罗布麻总黄酮上样条件。结果与分析 树脂筛选结果由表 可知:对于荷叶总黄酮,吸附率最强,为%,次之,为%,而 解吸率最强,为%,远高于其他树脂;对于罗布麻总黄酮,吸附率最强,为%,解吸率最强,为%,而 解吸率是中等水平,为%。综合吸附率和解吸率,荷叶和罗布麻表 种大孔树脂对总黄酮的吸附率及解吸率树脂型
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