MSC检定作业规程模板药典.doc

委托检验
检验项目和规程

检品名称：

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日期：

第5代细胞
1 判别试验
1.1 细胞形态
检定标准：在倒置显微镜下观察，细胞应贴壁生长，呈长梭形。
1.2 STR图谱判别
检定标准：应表示人16个等位基因，为单一细胞起源。
1.3流式细胞仪检测细胞表面标识物
根据BD企业人间充质干细胞分析试剂盒(BD货号562245)说明进行。
检定标准：CD73、CD90、CD105≥95%；CD11b、CD19、CD34、CD45、HLA-DR≤2%。
1.4种属间细胞污染检验（PCR法）
检定标准：应为人源细胞，无种属间交叉污染。
1.5染色体核型分析
检定标准：参考正常中国人体细胞G显带带型标准，染色体数量应为46 XX或46 XY，染色体结构应无缺失、反复、倒位、易位。

2 细菌、真菌检验
取细胞培养上清液样品, 参考《中国药典》无菌检验法（通则1101）进行检验，应为阴性。

3 分支杆菌检验
取最少107个活细胞样品用培养上清制备细胞裂解物, 参考《中国药典》无菌检验法（通则1101）进行检验，应为阴性。

4 支原体检验
4.1培养法
取细胞培养上清液样品, 参考《中国药典》（通则3301）进行检验，应为阴性。
4.2 DNA荧光染色
取细胞培养上清液样品, 参考《中国药典》（通则3301）进行检验，应为阴性。

5细胞内、外病毒因子检验
5.1细胞形态观察及血吸附试验
细胞接种于细胞培养瓶中，参考《中国药典》第三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程进行，细胞连续培养2周逐日镜检，细胞形态正常，无病变，血吸附试验阴性。
5.2体外不一样指示细胞接种培养法检测病毒因子
细胞接种于细胞培养瓶中，根据体外不一样指示细胞接种培养法（中国药典三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程）进行。细胞形态正常，血吸附试验阴性，血凝试验阴性。
5.3动物体内接种法
5.3.1乳鼠脑内及腹腔接种
取细胞悬液注射于出生二十四小时内乳鼠腹腔和脑内，根据中国药典三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，21天后乳鼠应最少有80%健存。
5.3.2小鼠脑内及腹腔接种
取细胞悬液注射于小鼠腹腔和脑内，根据中国药典三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，21天后小鼠应最少有80%健存。
5.3.3豚鼠腹腔接种
取细胞悬液注射于豚鼠腹腔，根据中国药典三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，42天后豚鼠应健存，解剖无结核病变。
5.4鸡胚接种检验
取细胞悬液注射于5～7日鸡胚卵黄囊，根据中国药典三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应最少80%存活。
取细胞悬液注射于9~11日龄鸡胚尿囊腔，根据中国药典三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应最少80%存活，尿囊液血凝试验应为阴性。
5.5 特殊人源病毒检验
5.5.1 HIV检验
根据中国药典三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。
5.5.2 HBV检验
根据中国药典三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。
5.5.3 HCV检验
根据中国药典三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。
5.5.4 HCMV检验
根据中国药典三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。
5.5.5 EBV检验
根据中国药典三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。
5.5.6 HPV检验
根据中国药典三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。
5.5.7 HHV检验
根据中国药典三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。
5.6牛源病毒检验
根据中国药典三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。
5.7 猪细小病毒检验
根据中国药典三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。
5.8逆转录病毒检验
参考中国药典三部附录 逆转录酶活性检验法，应为阴性。

6 免疫学反应检测
6.1淋巴细胞增殖抑制试验
根据淋巴细胞增殖抑制试验法检测，应含有抑制淋巴细胞增殖能力。
6.2 特定淋巴细胞亚群检测
根据特定淋巴细胞亚群检测法检测淋巴细胞Th1\Th17增殖抑制率和Treg增殖促进率。
6.3淋巴细胞分泌TNF-α抑制试验
根据淋巴细胞分泌TNF-α抑制试验法检测，应含有抑制淋巴细胞分泌TNF-α能力。

7 诱导分化能力检验
7.1 成骨分化
细胞在体外成骨诱导培养后，茜素红S染色分析成骨细胞分化能力。
7.2 成脂分化
细胞在体外成脂诱导培养后，油红O染色检测细胞内红色脂肪滴。

8细胞活性检测
8.1 细胞数和细胞存活率
血细胞计数板对细胞计数，台盼蓝染色法检测细胞平均存活率应不低于90%
8.2细胞生长曲线
用细胞计数方法绘制细胞生长曲线来判定细胞活力。
8.3细胞周期测定
用流式细胞术进行细胞周期测定。

9成瘤性检测
9.1裸鼠体内接种试验
根据中国药典三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。
9.2 软琼脂克隆形成试验
根据中国药典三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应无克隆形成。
9.3 端粒酶活性检测
根据端粒酶活性检测法检测。