实验四动物血液基因组DNA提取.pptx

实验四动物血液基因组DNA提取背景知识背景知识DNA的存在形式的存在形式背景知识背景知识DNA的存在形式的存在形式背景知识背景知识DNA的存在形式的存在形式背景知识背景知识DNA的存在形式的存在形式核苷酸双螺旋结构一级结构-核小体二级机构-螺线管三级结构-超螺旋管四级机构-染色体+组蛋白nDNADNA为白色类似石棉样的为白色类似石棉样的纤维状物纤维状物，大都呈酸味。，大都呈酸味。nDNADNA是是极性化合物极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水。氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水。n在酸性溶液中，易水解，中性或弱碱性溶液中较在酸性溶液中，易水解，中性或弱碱性溶液中较稳定。稳定。DNADNA的理化性质的理化性质实验目的实验目的掌握CTAB法提取植物DNA的原理掌握CTAB法提取植物DNA的实验方法注意：此方法会把少量RNA提取出来，故后面通称核酸的提取。实验原理实验原理 哺乳动物的成熟红细胞已经高度分化，因而当中没有细胞核，无法提取DNA。禽类的血细胞则可以。禽类代谢旺盛，血液中红细胞更多，而且红细胞中有完整的细胞核、大量的染色体。且材料易得、经济。用鸡血细胞做实验材料有两个原因：一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。实验原理实验原理固定血样采集抗凝血裂解细胞蛋白质降解蛋白质变性沉淀DNA洗涤去杂质普通家鸡普通家鸡无水乙醇、柠檬酸、柠檬酸钠、尿素、十二烷无水乙醇、柠檬酸、柠檬酸钠、尿素、十二烷基硫酸钠基硫酸钠(SDS)(SDS)、1M Tris-HCl(PH8.0)1M Tris-HCl(PH8.0)缓冲液、缓冲液、乙二胺四乙酸二钠乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)(EDTA-2Na)、蛋白酶、蛋白酶K K、TrisTris饱和酚、氯仿饱和酚、氯仿(三氯甲烷三氯甲烷)、异戊醇、异戊醇 实验材料实验材料实实验验仪仪器器取血针及管取血针及管离心机：离心机：3 3台台/12/12管管离心管：离心管：水浴锅：水浴锅：6565移液枪（包括枪头）移液枪（包括枪头）实验试剂实验试剂1.75%的乙醇2.ACD抗凝剂 100ml（共需48ml，每管0.8ml）3.禽血裂解液 100ml（共需51ml，每管1.7ml）4.氯仿-异戊醇（24:1）共需54ml，每管1.8ml5.酚-氯仿-异戊醇（25:24:1）共需60ml，每管2ml6.TE缓冲液 PH8.0 50ml实验步骤实验步骤75%乙醇20ml翅下取血5ml5ml离心管800ulACD抗凝剂800ulACD抗凝剂8000转离心1分钟弃上清液8000转离心1分钟弃上清液取680ul8000转离心1分钟55水浴过夜1700ul裂解液10ul蛋白酶K实验步骤实验步骤2ml饱和酚摇匀至无块状12000转离心10分钟DNA酚蛋白层5ml离心管取上层透明的DNA溶液2ml酚-氯仿-异戊醇12000转离心10分钟5ml离心管取上层DNA液1.8ml氯仿-异戊醇12000转离心10分钟5ml离心管取上层DNA液无水乙醇75%无水乙醇1000ulTE缓冲液晾干-20保存在整个实验过程中应严格执行无菌操作；部分药品有毒，操作中应注意安全防护；刚投入水浴时可以稍快速的晃动，之后的晃动一定要轻柔！再每一次加入药剂后，都要轻轻晃动离心管，使之混匀。注意事项注意事项思考题思考题本实验中用到的各种试剂的作用是什么？本实验中进行了几次离心操作，每次的目的？实验安排实验安排按照学号分组进行实验，每6人一组，一组做3管，用一个研钵。每3组共用1台离心机同时进行离心操作。6人一组2013级生物技术专业分子生物学实验报告姓名：学号：实验项目：实验四 动物血液基因组DNA的提取1.实验目的2.实验原理3.实验试剂4.实验步骤5.实验注意事项6.思考题实验报告实验报告谢谢观赏谢谢观赏