加味参芪地黄汤对糖尿病肾病大鼠足细胞自噬的影响.pdf
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1、854中药研究与开发中国中医药科技2 0 2 3年9 月第30 卷第5期Sep.2023Vol.30No.5加味参芪地黄汤对糖尿病肾病大鼠足细胞自噬的影响李莲花,程楚楚,张佩青,杨馨,陈明,尚国旗,王海艳,于卓(黑龙江省中医药科学院黑龙江哈尔滨150 0 36)摘要目的:观察加味参芪地黄汤对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠足细胞自噬的影响。方法:从50 只SD大鼠中取10 只大鼠作正常对照组,其余采用高糖高脂饲料+STZ诱导DN大鼠模型,造模成功后将DN大鼠分为4组,分别为模型组、阳性对照组(洛丁新,0.9 0 mg/kg)、加味参芪地黄汤高剂量组(44.10
2、g/kg)、加味参芪地黄汤低剂量组(11.0 3g/kg),每组9 只,各组按相应剂量药物灌胃给药,模型组、正常组均予以等体积生理盐水灌胃,每天1 次,共8 周。HE、M a s s o n 染色观察肾脏病理改变;采用免疫组织化学法检测肾组织中自噬蛋白 5(Autophagy-related protein 5,Atg5)、微管相关蛋白1轻链3(Mi-crotubule-associated protein 1-light chain 3,LC3)表达情况。结果:肾脏 HE染色和MASSON染色结果显示,加味参芪地黄汤可以改善DN大鼠肾小球系膜基质弥漫增生,基底膜增厚、肾小管空泡变性脂肪变性和
3、间质淋巴增生的病理损伤,与阳性对照组相比较有明显差异(P0.05)。免疫组化结果显示,加味参芪地黄汤可以增强DN大鼠肾脏足细胞自噬蛋白Atg5、LC 3的表达,与阳性对照组相比有明显差异(P0.05)。结论:加味参芪地黄汤能够改善DN大鼠肾组织病理损伤,促进DN大鼠的足细胞自噬。关键词糖尿病肾病;加味参芪地黄汤;病理学;足细胞自噬;Atg5;LC3;大鼠Effect of Modified Shenqi Dihuang Decoction(加味参芪地黄汤)on Podocyte Autophagy in Diabetic Nephropathy RatsLI Lianhua,CHENG Chu
4、chu,ZHANG Peiqing,YANG Xin,CHEN Ming,SHANG Guoqi,WANG Haiyan,YU Zhuo(Heilongjiang Academy of Chinese Medicine Sciences,Harbin,Heilongjiang 150036)ABSTRACT Objective:To observe the effect of Modified Shenqi Dihuang Decoction on podocyte autophagy inrats with diabetic nephropathy(DN).Methods:40 male S
5、D rats were fed with high sugar and high fat diet+STZ to induce DN rat models.After successful modeling,the DN rats were divided into 4 groups:model group,positive control group(Benazepril Hydrochloride,0.90 mg/kg),Modified Shenqi Dihuang Decoction high dosegroup(44.10 g/kg),Modified Shenqi Dihuang
6、Decoction low dose group(11.03 g/kg),9 rats in each group,10 rats were taken as normal control group,each group rats were given the corresponding medicine once a day for8 weeks.The pathological changes of kidney tissue were observed by HE and Masson staining.The expressionsof Atg5 and LC3 in renal t
7、issues were detected by immunohistochemistry.Results:HE staining and Masson stai-ning showed that the Modified Shenqi Dihuang Decoction could improve the pathological changes of glomerularmesangial matrix diffuse proliferation,basement membrane thickening,tubular vacuolar degeneration and steato-sis
8、 and interstitial lymphatic hyperplasia in DN rats,which were significantly different from those in the positivecontrol group(P0.05).The Modified Shenqi Dihuang Decoction could increase the expressions of Atg5 andLC3 in renal podocytes of DN rats,and there were significant differences compared with
9、the positive controlgroup(P 11.1 mmol/L 作为糖尿病模型成模标准。在此基础上,继续高糖高脂饲料喂养1 个月后,以随机血糖16.7 mmol/L,24 h 尿蛋白定量 30 mg视为DN模型成功 6 。期间有4只大鼠死亡。2.2分组及给药将造模成功的36 只大鼠随机分为模型组,阳性对照组和中药高剂量组、低剂量组,每组9 只。中药组以加味参芪地黄汤44.10 g/kg(高剂量组)、11.03g/kg(低剂量组)灌胃给药,阳性对照组予洛汀新0.9 mg/kg灌胃;每次灌胃药液体积1mL/100g;正常对照组、模型组给予等体积生理盐水灌胃;每天1次,连续给药8 周
10、。2.3观察指标及检测方法2.3.1肾组织病理变化观察末次给药后,禁食不禁水12 h,10%水合氯醛(3mL/kg)腹腔注射麻醉,处死大鼠取一侧肾脏立即投入10%多聚甲醛溶液固定,用于制作石蜡切片。HE染色:风箱调制6 5烤片30 min;常规脱腊水化;置苏木精溶液内30 min染色;自来水洗去浮色,以1%的盐酸酒精分色,0.5%1%伊红溶液复染1 10 min;待胞质染成红色,梯度脱水透明(50%、7 0%、8 0%、9 0%乙醇各3min,95%、10 0%乙醇I、II各3min,二甲苯I、I各10min;中性树胶封片。光学显微镜下观察(40 0)。M a s s o n 染色:石蜡切片脱
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