消瘀健脾止鼾方对间歇性缺氧小鼠血清HIF-1α、IFN-γ及IL-4水平的影响.pdf
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1、ChengChinehypo)nt药理毒理39Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica2023;14(6)中药与临床消瘀健脾止鼾方对间歇性缺氧小鼠血清HIF及IL-4水平的影响F郑洁,卢蓉蓉,蒋路云?摘要 目的:消瘀健脾止鼾方是四川省名中医蒋路云主任医师多年临床经验方,在治疗痰瘀互结型阻塞性睡眠呼吸暂停综合征具有明显的临床疗效,通过对间歇性缺氧小鼠模型血清中HIF-1、IFN-及IL-4的含量变化评价消瘀健脾止方的药效。方法:采用低氧氧仓建立间歇性缺氧小鼠模型,将小鼠分为正常组、模型组、给药组治疗2 周,对比观察分析三组在治疗前后的一般行为学
2、表现以及血清HIF-1、IFN-、IL-4含量变化。结果:消瘀健脾止鼾方可有效降低血清HIF-1、IFN-及IL-4的表达。结论:消痰健脾止軒方能降低HIF-1、IFN-、IL-4为代表的炎症因子水平,对机体间歇性缺氧有明显的改善作用。关键词 消疼健脾止軒方;阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS);间歇性缺氧;HIF-1;IFN-;IL-4中图分类号 R285.5文献标识码 A文章编号 16 7 4-92 6 X(2023)06-007-04Effect of Xiao-Yu-Jian-Pi-Zhi-Han prescription on serum levels of HIF-1a,I
3、FN-y,and IL-4 on mice with intermittexia IZHENG Jie,LU Rong-rong,JIANG Lu-yun/(1.School of Clinical Medicine,Chengdu University of Traditionalse Medicine,Chengdu 610075,Sichuan;2.The Afiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,gdu610032,Sichuan)Abstract Objective:Xiao-Yu
4、-Jian-Pi-Zhi-Han prescription is a formula of Chief Physician Dr.Jiang Lu-yun with manyyears of clinical experience,who is also Sichuan Famous Chinese Medicine Doctor.The prescription has obvious clinical eficacyin the treatment of obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome with interconnection of ph
5、legm and stagnation.The eficacy ofXiao-Yu-Jian-Pi-Zhi-Han prescription was evaluated by changes in the serum levels of HIF-1,IFN-and IL-4 in an experimentalmice model of intermittent hypoxia.Method:A mice model of intermittent hypoxia was established by using a hypoxic oxygenchamber.The mice were di
6、vided into normal group,model group and drug administration group for 2 weeks,and the generalbehavioral performance and changes in serum HIF-la,IFN-and IL-4 levels of the three groups before and after treatment werecompared and analyzed.Result:Xiao-Yu-Jian-Pi-Zhi-Han prescription effectively reduced
7、 the expression of serum HIF-1a,IFN-and IL-4.Conclusion:Xiao-Yu-Jian-Pi-Zhi-Han prescription can reduce the level of inflammatory factors represented by HIF-la,IFN-and IL-4,and has a significant ameliorating effect on intermittent hypoxia in the organism.Key words Xiao-Yu-Jian-Pi-Zhi-Han prescriptio
8、n;obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome(OSAHS);intermittenthypoxia;HIF-1;IFN-;IL-4阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructivesleep apnea-hypopnea syndrome,O SA H S)作为临床常见睡眠障碍疾病,可导致机体氧化应激、全身炎症反应及自主神经功能紊乱等问题。前期临床研究表明2 ,OSAHS患者中医证型主要为痰瘀互结证痰湿证 痰热证 肺脾气虚证=脾肾阳虚证,通过使用消健脾止鼾方联合一般行为疗法治疗痰瘀互结基金项目】国家自然科学基金项目(8 2 17 4198)作者单位
9、 1.成都中医药大学临床医学院,四川成都6 10 0 7 5;2.成都中医药大学附属医院,四川成都6 10 0 32作者简介 郑洁(1996-),女,在读硕士研究生,主要从事中西医结合耳鼻咽喉临床与基础研究Tel:13207130709Email:通讯作者 蒋路云(196 9-),男,硕士学历,主任医师,主要从事中西医结合耳鼻咽喉临床与基础研究Tel:139081915333Email:收稿日期 2 0 2 3-0 4-0 1型OSAHS患者,可以降低患者BMI指数(身体质量指数)及AHI指数(呼吸暂停低通气指数)、提高LSpO2(最低血氧饱和度),且疗效肯定、安全稳定、无副作用。反复间歇性缺
10、氧是OSAHS的主要表现之一,而缺氧诱导因子是与机体氧代谢有关的关键因子。LuD等人3 的研究表明,OSAHS与缺氧诱导因子1(H I F-1)的表达有关,且OSAHS缺氧程度越严重,HIF-1的活性越强。GabryelskaA等人(4也提出OSAHS的间歇性缺氧可以让血清HIF-1表达上调。JanmohammadiP等人5 进行的一项Meta分析显示,OSAHS不仅与HIF-1密切相关,血清干扰素(IFN-)的表达也高于健康人。TamCS等人通过对113名儿童的研究表明,患有OSAHS的儿童,其IFN-水平显著升高。除上述两个因子外,白细胞介素作为一种参与一系列炎症途径的细胞因子,也常见40
11、:Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica2023;14(6)中药与临床于OSAHS的研究中。YiM等人门通过研究白细胞介素与OSAHS的关系,发现白介素-4(IL-4)在OSAHS患者中表达升高。TanHL等人8 通过对包括IL-4在内的各种炎性因子进行研究,发现OSAHS患儿表现为促炎状态。因此,在以往OSAHS有关的研究中,HIF-1、IFN-及IL-4是不可忽视的主要因子。HIF-1、I FN-及IL-4是机体应答缺氧应激及气道炎症的关键因子。本文针对消瘀健脾止鼾方对OSAHS间歇性缺氧的治疗效果进行研究,通过建立间歇性缺氧小鼠模型,
12、对上述关键血清因子进行检测,进一步佐证临床疗效,探讨消瘀健脾止鼾方在治疗OSAHS间歇性缺氧方面中的作用机制。1实验材料1.1实验动物36只4周龄大小的雄性C57BL/6J健康小鼠(体重为2 0-2 2 g),由达硕生物科技有限公司提供,许可证编号SYXK(川)2 0 2 1-2 46。于特定无病原体条件下适应性喂养至3天后,按照研究目的将实验小鼠随机分为三组即A组(空白对照组:常氧)、B组(模型组)、C组(模型+消瘀健脾止鼾方治疗组),每组12 只小鼠。1.2实验药物与试剂消瘀健脾止鼾方组成:酒川芎、三七粉、石菖蒲、法半夏、地龙、牡蛎、浙贝母、黄芪、白术、茯苓、党参、山药、甘草。由四川新绿色
13、药业有限公司制成免煎颗粒,所使用的中药颗粒机均为同一批次。检测试剂盒为血红蛋白测定试剂盒(C021-1-1),南京建成生物工程研究所生产;Mouse HIF-1ELISAKIT(ZC-38 10 2),上海苗彩生物科技有限公司生产,Mouse IFN-ELISAKIT(ZC-37 90 5),上海苗彩生物科技有限公司生产MouseIL-4ELISAKIT(ZC-37 98 6),上海苗彩生物科技有限公司生产。2实验方法2.1动物造模参考MateikaJH的实验方法复制慢性间歇性缺氧实验动物模型。将A组小鼠放置于常氧环境(氧含量浓度为2 1%),B组与C组小鼠放置于密闭氧舱内,开启氧仓开关,调节
14、氧气及氮气比例,使舱内氧浓度至10%,持续8 h,后恢复氧舱内常氧环境16 h,持续造模4周。造模成功标准:2 周后各组ELISA检测血红蛋白含量,A与B、C 组有显著差异即视为造模成功。2.2给药方法A组不做干预。造模2 周后B组以0.5mL蒸馏水灌胃,每日1次。C组参考实验动物用药剂量换算:一副消瘀健脾止鼾方颗粒约重2 1g,以成人平均体重7 0kg计算动物给药量,成人用法:每日一副,一日三次口服。根据人和小鼠间的换算系数9.1,计算出C组小鼠消瘀健脾止鼾方颗粒每日给药剂量为2.7 3g:kg,为能更好地体现中药灌胃组与其他两组的疗效差异,故采用双倍高剂量治疗性给药,即5.46 gkg,按
15、此比例将免煎颗粒溶于蒸馏水用以灌胃,每日1次。治疗性灌胃治疗与造模同步进行,持续2 周。2.3标本采集及检测造模2 周后,A组12 只小鼠,以及在B组及C组中随机抽取12 只小鼠,共计2 4只小鼠于眼眶静脉采血0.2 mL用于检测造模结果;造模4周后,夜间8:0 0后不再投放食物,于次日早晨8:0 0 将3组动物按序号称重记录,用戊巴比妥钠(50 mgkg)腹腔注射麻醉,麻醉成功后腹主动脉采血,1.5mL离心管收集血液0.8 mL左右,室温放置3h后,8 0 0 0 rmin的离心机离心10 min(离心半径6 cm),收集上层血清,分装于1.5mL离心管中-8 0 C冰箱保存待测。通过ELI
16、SA试剂盒检测血清中HIF-1、I FN-及IL-4水平。2.4统计学方法用SPSS26.0统计软件对所有数据进行统计学分析,对所有数据采用(均数土标准差)的方式来表示并进行方差齐性检验,若方差齐,则采用单因素方差分析,并用LSD法进行两两比较;如若方差不齐,则选用Games-Howell法进行两两分析。P0.05表示差异具有统计学意义。3结果3.1造模结果统计结果显示,与A组相比,B组+C组小鼠全血中血红蛋白含量明显升高,差异显著,具有统计学意义(P0.01),提示造模成功。详见表1。表1造模2 周后各组小鼠全血中血红蛋白含量的变化(XSD)组别只数含量(gL)A组1287.0404.896
17、B组+C组12107.0113.994*注:与A组比较,*P0.05,*P0.013.2行为症状学造模前,各组小鼠精神状态良好,活动正常,进食及排泄无异常,皮毛光滑,无明显呼吸音,无异常行为。造模过程中,低氧模型组及中药灌胃组均出现活动量减少,喜卧少动,采食减弱,二便较空白组无明显变化,无明显呼吸音,皮毛光泽度降低,喜成41Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica2023;14(6)中药与临床团聚集于氧舱出风口。随着灌胃治疗的进行,C组较前饮食量逐渐增加,活动量逐渐增加,进食量逐渐增加,仍有成团聚于氧舱出风口的表现,二便较前无明显变化。整个实
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